鮮牛鞭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明

李坦城，李蘭蘭，孫麗艷，胡光華，張 竹

（長春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長春 130012）

【藥材名稱】正名：鮮牛鞭，漢語拼音名：Xianniubian，拉丁名：PENIS BOVIS RECENS

【性味與歸經(jīng)】咸，溫。歸腎經(jīng)。

【功能與主治】補(bǔ)腎暖胃，壯陽治疝。用于腎虛腰疼，寒性胃痛，性欲減退及疝氣。

【用法與用量】60～120 g，煮爛后，切成小片，加食鹽適量。

【貯藏】冷藏。備注：藥材原標(biāo)準(zhǔn)為吉藥監(jiān)注[2002]500號，此次該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂主要包括陰莖橫切面、水分、灰分等檢驗(yàn)項(xiàng)目，性味與歸經(jīng)、功能與主治、用法與用量、貯藏均參照原標(biāo)準(zhǔn)未做修訂。

【概述】牛鞭，史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等古代醫(yī)藥經(jīng)典著作，其中記載了本品的藥用功效，我國現(xiàn)代醫(yī)藥著作《中華本草》、《中藥大辭典》、《中國動物藥資源》中均有記載該藥材，詳細(xì)描述了本品的來源、原動物形態(tài)、生境分布、化學(xué)成分、藥理作用、性味、歸經(jīng)、功能主治及用法用量。表明本品在我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用歷史悠久，具有開發(fā)利用價值?！吨兴幋筠o典》收載牛鞭為?？埔芭賱游稂S牛或水牛屬動物水牛.雄性的陰莖及睪丸；《中國動物藥資源》收載牛鞭為?？苿游锱５年幥o及睪丸。經(jīng)與全國3家生產(chǎn)企業(yè)溝通，現(xiàn)所用牛鞭藥材，均取自黃牛和改良黃牛，由于現(xiàn)在純種黃牛較少，養(yǎng)殖的大多為改良品種的黃牛，故將來源修訂為黃牛和改良黃?！，F(xiàn)根據(jù)《中國動物藥資源》、《中藥大辭典》收載及藥材實(shí)際使用情況調(diào)查，牛鞭藥材基源確定為?？苿游镄坌渣S牛和改良黃牛的陰莖及睪丸。

【來源】本品為?？苿游镄坌渣S牛和改良黃牛的陰莖及睪丸。宰殺后，割取陰莖及睪丸，除去殘肉及油脂。

【起草樣品收集情況】2016年12月至2017年7月，項(xiàng)目組分別從長春地區(qū)、琿春地區(qū)、延邊地區(qū)，收集了12批鮮牛鞭藥材，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)劉忠軍教授鑒定為?？苿游镄坌渣S?；蚋牧键S牛的陰莖及睪丸，12批藥材均為正品，對12批不同產(chǎn)地的牛鞭藥材樣品進(jìn)行實(shí)際觀察，測量，描述了本品性狀，基本與原標(biāo)準(zhǔn)一致。

1 化學(xué)鑒別

由于牛鞭中含有一定量的蛋白質(zhì)，加水溶解后，蛋白質(zhì)與茚三酮在加熱條件下反應(yīng)，顯藍(lán)紫色或紫紅色。

牛陰莖：取本品0.5 g，研細(xì)，加水10 ml，置水浴中加熱使分散溶解，再加0.2%茚三酮乙醇溶液數(shù)滴，加熱5～10分鐘，即顯藍(lán)紫色。

牛睪丸：取本品1.0 g，研細(xì)，加水10 ml，置水浴中加熱使分散溶解，再加0.2%茚三酮乙醇溶液數(shù)滴，加熱5～10分鐘，即顯藍(lán)紫色。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：12批樣品均呈正反應(yīng)，顯藍(lán)紫色，陰性無干擾。由于該反應(yīng)為氨基酸蛋白質(zhì)類物質(zhì)普遍具有的化學(xué)反應(yīng)，專屬性不強(qiáng)，故不列入標(biāo)準(zhǔn)正文。

2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

模板DNA提取參照《中國藥典》2015年版方法對牛鞭、牛蛋進(jìn)行DNA提取本品0.5g，置乳缽中，充分研磨使成細(xì)粉，取0.1 g置1.5 ml離心管中，加入消化液275 μl[細(xì)胞核裂解液200 μl，0.5 mol/L乙二胺四乙酸二鈉溶液50 μl，蛋白酶K溶液（20 mg/ml）20 μl，RNA酶溶液5 μl]，在55℃水浴保溫1小時，加入裂解緩沖液250 μl，混勻，加到DNA純化柱中，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）3分鐘；棄去過濾液，純化柱中加人洗脫液700 μl[5 mol/L醋酸鉀溶液26 μl，l mol/L Tris-鹽酸溶液（pH值7.5）18ul，0.5 mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液（pH值8.0）3 μl，無水乙醇480 μl，滅菌雙蒸水273 μl]，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）1分鐘；棄去過濾液，用上述洗脫液反復(fù)洗脫3次，每次離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）1分鐘；棄去過濾液，再離心2分鐘，將DNA純化柱轉(zhuǎn)移入另一離心管中，加入無菌雙蒸水100 μl，室溫放置2分鐘后，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）2分鐘，離心液即為DNA溶液，作為供試品溶液，置零下20℃保存?zhèn)溆?。另取牛鞭、牛蛋對照藥?.1 g，同法制成對照藥材模板DNA溶液。

取本品0.5 g，剪碎，取50 mg置1.5 ml離心管中，加150 μl生理鹽水，研磨，離心10000 r/min×1 min，去上清；加400 μl GA，混勻，振蕩（徹底混勻）；加40 μl PK酶，56℃水浴1 h（封口膜封口）；加400 μl GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，短離心；加400 μl無水乙醇，顛倒混勻，充分混勻15秒，短離心；將液體750 μl加入CB3中，放入收集管，12000 r/min×30 s倒廢液，重復(fù)一次；加500 μl GD（已加過乙醇）12000 r/min×30 s倒廢液；加600 μl PW（已加過乙醇）12000 r/min×30 s倒廢液，重復(fù)一次；12000 r/min×2 min棄去收集管，打開CB3管，放在濾紙上，晾干；剪去CB3的蓋，分別放置于一個新的EP管中，加100 μl TE（垂直滴加），12000 r/min 2 min收集DNA溶液，作為供試品溶液，置零下20℃保存?zhèn)溆?。另取牛鞭、牛蛋對照藥?.1 g，同法制成對照藥材模板DNA溶液。

結(jié)果表明：兩種提取DNA方法無差異，但因?yàn)榕１?、牛蛋為地道藥材，?yīng)按藥典方法合理，故本文采納藥典方法。

3 水 分

根據(jù)測定結(jié)果，考慮氣候、溫度、濕度以及藥材包裝、貯運(yùn)的實(shí)際情況，確定限度為鮮牛鞭水分不得過72.0%。根據(jù)牛鞭化學(xué)成分研究報道，分別以水、乙醇、稀乙醇為溶劑，照《中國藥典》2015年版四部通則2201浸出物測定法進(jìn)行測定。根據(jù)測定結(jié)果，稀乙醇熱浸法浸出物測定值較高，故選擇稀乙醇熱浸法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，限度規(guī)定為浸出物不得少于15.0%（以干燥品計）。鮮牛鞭由于無法過篩，采用剪碎方法測定浸出物時同一批次測定數(shù)值不穩(wěn)定，數(shù)值差距較大。

附：

研究起草人：李坦城1，樊紅軍1，楊樹東1，于?，?，彭秀麗1，周麗麗1，李蘭蘭1，王 輝1，王 坤1，谷 杰1，張麗華2

起草單位：1.長春市食品藥品檢驗(yàn)中心；2.吉林市雷博科技有限公司

復(fù)核單位：松原市食品藥品檢驗(yàn)所