鴨致病性大腸桿菌耐藥性調(diào)查與分析

杜　娟，牛艷波，王　麗

（長治市畜牧獸醫(yī)局，山西　長治　046000）

鴨致病性大腸桿菌耐藥性調(diào)查與分析

杜娟，牛艷波，王麗

（長治市畜牧獸醫(yī)局，山西長治046000）

摘要：試驗(yàn)選用22種抗生素對20株致病性鴨源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測，結(jié)果表明，20株試驗(yàn)菌對測試抗生素均存在不同程度的耐藥性，其中對5種以及5種以上的抗生素有抗藥性的菌株占90%，試驗(yàn)菌對青霉素耐藥率最高（90%），其次為恩諾沙星（85%），而對黏桿菌素和呋喃妥因的耐藥性最低。

關(guān)鍵詞：鴨；大腸桿菌；耐藥性；調(diào)查；分析

鴨致病性大腸埃希氏菌（E. coli）是引起鴨大腸桿菌病的病原體，主要導(dǎo)致病鴨大腸桿菌性敗血癥、肉芽腫、心包炎、肝周炎、氣囊炎、腸炎、臍炎、全眼球炎和卵黃性腹膜炎等癥狀，并對雛鴨和胚胎鴨有較高的致死性[1]。鴨致病性大腸桿菌感染還可以作為禽流感、新城疫、傳染性支氣管炎等病毒性疾病的繼發(fā)病出現(xiàn)，加劇疾病發(fā)展，對鴨體生命健康和養(yǎng)鴨產(chǎn)業(yè)構(gòu)成巨大威脅[2]。伴隨著抗生素在家禽養(yǎng)殖中的過度使用和濫用，鴨大腸桿菌對藥物的耐藥性增加，病鴨死亡率提高。本試驗(yàn)從山西省不同地區(qū)患大腸桿菌病的病鴨中分離出20株致病性大腸桿菌，并挑選22種抗生素對這些大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行檢測，以期為大腸桿菌耐藥性的消除探索新的方法。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)菌株

20株鴨致病性大腸桿菌從山西省不同地區(qū)鴨場送檢的病鴨中分離。大腸桿菌質(zhì)控菌株ATCC25922購自北京天壇藥物技術(shù)開發(fā)公司。質(zhì)粒轉(zhuǎn)化使用的受體菌株DH5α購自Promega公司。

1.1.2藥敏紙片

頭孢拉啶（RA）、慶大霉素（GM）、利福平（FF）、卡那霉素（K）、環(huán)丙沙星（CIP）、阿莫西林（AMX）、頭孢噻肟（CTX）、氧氟沙星（OFL）、黏桿菌素（PMB）、諾氟沙星（NOR）、強(qiáng)力霉素（DO）、泰樂菌素（TL）、氟苯尼考（FF）、恩諾沙星（ENR）、氨芐西林（AMX）、硫紅霉素（SU）、頭孢曲松鈉（CED）、呋喃妥因（CFX）、四環(huán)素（FT）、青霉素（PG）、鏈霉素（S）、阿米卡星（AMK）等購自杭州天和藥物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1菌株分離

鴨大腸桿菌的分離、純化和鑒定參照常規(guī)方法進(jìn)行[3-4]。將收集到的鴨大腸桿菌菌株接種在普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h，抹片，挑取邊緣整齊、表面光滑、灰白色半透明的單個菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2藥敏實(shí)驗(yàn)

選取麥康凱瓊脂上長出的紅色菌落進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）推薦的Kirby-Bauer法進(jìn)行[5]。每次測定均以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株ATCC25922作參照。結(jié)果判定按CLSI 2008年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，級別分為耐藥（R）、中度敏感（M）和敏感（S）3種。

2　試驗(yàn)結(jié)果

20株大腸桿菌除了對黏桿菌素和呋喃妥因完全敏感外，對其他20種抗生素均有不同程度的耐藥性，其中最少對3種抗生素有耐藥性，最多對19種抗生素有耐藥性，5耐及5耐以上的菌株占分離菌株的90%，20株鴨源大腸桿菌耐藥譜見附表。大腸桿菌耐藥抗生素按嚴(yán)重程度依次為PG、ENR、RA、NOR、E、AMX、DO、TL、TE、CIP、SU、OFL、S、CED、FF、CFX、GM、K、CTX、AMK。其中PG、ENR、RA、NOR、E、AMX、DO、TL、TE、CIP、SU、OFL、S等13種抗生素的耐藥率≥50%，20株鴨源大腸桿菌耐藥率分析見附圖。

附表　20株鴨源大腸桿菌耐藥譜

附圖　20株鴨源大腸桿菌耐藥率分析

3　討論

大腸桿菌的耐藥性受多種因素影響，各地報(bào)道的鴨源大腸桿菌耐藥種類均有所不同，且不同時(shí)期分離菌株的耐藥性也有較大差異。我國各地區(qū)關(guān)于耐藥性的調(diào)查有很多，有各地的報(bào)道也有綜合性的比較。其中，以山東省、廣東省、河南省、重慶市等地的報(bào)道較多。郝智慧等報(bào)道了山東省9個地區(qū)、河北省青縣和遼寧省本溪市的肉鴨大腸桿菌耐藥情況，其中山東省肉鴨大腸桿菌耐藥最多，遼寧省最少，對5種藥產(chǎn)生耐藥性的達(dá)到90%，對9種藥產(chǎn)生耐藥性的達(dá)到80%。李芳等對2009—2010年我國部分地區(qū)的耐藥性又進(jìn)行了分析，在大部分地區(qū)對頭類藥物的耐受率已接近或超過50%，對磺胺類藥物的耐受率已達(dá)70%，個別地區(qū)對阿米卡星的耐受率也超過了60%，對土霉素、四環(huán)素藥物的耐藥率已接近100%，值得注意的是對氨曲南也出現(xiàn)耐藥株。楊希國等報(bào)道，2008—2010年遼寧省鴨源大腸桿菌耐藥性不斷增加，2009和2010年分離的大腸桿菌對多黏菌素E耐藥率較低，對其余9種藥物的耐藥率均很高，尤其對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、四環(huán)素、磺胺異惡唑、復(fù)方新諾明和恩諾沙星的耐藥率均> 80%，2008年分離的大腸桿菌主要集中在1～5重耐藥，2009、2010年分離株主要集中表現(xiàn)在6～9重耐藥。朱恒乾等對廣東省10多個地市家禽類養(yǎng)殖場分離出的378株大腸桿菌進(jìn)行耐藥性研究，結(jié)果表明，耐藥性逐年上升，耐藥率逐年下降，耐藥譜已集中在5～12耐。徐小艷等對1975—2002年江蘇省雞致病性大腸桿菌的耐藥性變化情況進(jìn)行分析，結(jié)果表明，20世紀(jì)90年代前期、中期、后期致病性大腸桿菌對抗生素藥物的平均耐藥率分別為28.11%、42.15%、54.05%，大腸桿菌對抗生素藥物的敏感和中度敏感菌株比例下降，而耐藥菌株比例卻逐年增加[9]。陳鴻樹等對重慶6株鴨大腸桿菌耐藥調(diào)查表明氧氟沙星、諾氟沙星耐藥率均為50%[10]。張秀英等從山東分離81株雞源大腸桿菌的耐藥情況為萘啶酸、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾氟沙星、諾氟沙星的耐藥率分別為95.1%、61.7%、65.4%、80.2%、55.6%[11]。研究表明，近年來禽源大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物也產(chǎn)生較嚴(yán)重的耐藥性，耐藥率逐年上升。

本試驗(yàn)調(diào)查了山西省鴨源大腸桿菌對各類抗生素的耐藥情況，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對青霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、喹諾酮類抗生素耐藥性均>50%。其中，對青霉素類抗生素耐藥率最高；對氨基糖苷類抗生素、硝基呋喃類抗生素和頭孢菌素類抗生素的耐藥率較低，而對硝基呋喃類抗生素全部敏感，這一結(jié)論與我國其他學(xué)者研究結(jié)果一致。

不同地區(qū)大腸桿菌的耐藥性不同，主要是與地區(qū)性用藥習(xí)慣導(dǎo)致抗藥性有關(guān)，與當(dāng)?shù)氐膬?yōu)勢發(fā)病菌株也有關(guān)。在同一個地區(qū)，不同種鴨群對藥物的抗藥性不同，同一種鴨不同養(yǎng)殖場的抗藥性也不同，這些問題與養(yǎng)殖場的用藥習(xí)慣關(guān)系甚大。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wu Q, Xi M, Lv X, et al. Presence and antimicrobial susceptibili?ty of escherichia coli recovered from retail chicken in China[J]. Journal of Food Protection, 2014, 77（10）: 1 773-1 777.

[2] Dwars R M, Matthijs M G R, Daemen A J J M, et al. Progression of lesions in the respiratory tract of broilers after single infection with Escherichia coli compared to superinfection with E. coli after infection with infectious bronchitis virus[J]. Veterinary Immunolo?gy and Immunopathology, 2009, 127（1）: 65-76.

[3]曹澍澤.獸醫(yī)微生物學(xué)及免疫學(xué)技術(shù)[M].北京:北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 1992.

[4]陶勇,王紅寧,劉書亮.四川規(guī)?；唸鲽喼虏⌒訣. coli血清型、耐藥性和質(zhì)粒圖譜的研究[J].中國獸藥雜志, 2001, 35 （4）: 9-13.

[5]郝智慧,肖希龍,邱梅,等.不同區(qū)域雞大腸桿菌對抗菌藥的耐藥性比較[J].中國獸醫(yī)科學(xué), 2009, 39（1）: 84-88.

[6]李芳,張榮武,袁雅平,等. 2009—2010年我國部分地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性分析[J].山東畜牧獸醫(yī), 2010（11）: 55-57.

[7]楊希國,李欣南,李香珍,等.雞大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性研究[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī), 2011（7）: 32-34.

[8]朱恒乾,陳朝喜,廖曉萍,等.廣東地區(qū)2007—2009年禽源大腸桿菌的耐藥性演變[J].中國獸醫(yī)雜志, 2011, 47（9）: 5-7.

[9]徐小艷,王國相,印繼華,等. 1975—2002年大腸桿菌耐藥性變化情況調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī), 2003, 35（3）: 29-32.

[10]陳鴻樹,楊忠祥,孔禮明,等.鴨的大腸桿菌和沙門氏菌感染及藥敏性測定[J].四川畜牧獸醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2001, 15（4）: 29-33.

[11]張秀英,盧秀梅.大腸桿菌對獸醫(yī)臨床抗菌藥物耐藥情況分析[J].河北畜牧獸醫(yī), 2003, 19（5）: 15-17.

Investigation and Analysis on Drug Resistance of Duck Pathogenic Escherichia coli

DU Juan, NIU Yanbo, WANG Li
（Animal Husbandry and Veterinary of Changzhi City, Changzhi 046000, Shanxi China）

Abstract:Twenty-two kinds of antibiotics were used for resistance test of twenty strains of Duck Pathogenic Escherichia coli. The results showed that twenty strains of bacteria had generated different levels of resistance to test antibiotics, 90% of bacterium had generated resistance to five and over five kinds of antibiotics, highest degree to peni?cillin(90%), and higher degree to enrofloxacin(85%), but lowest degree to colimycin andfuradantin.

Key words:duck; Escherichia coli; drug resistance; survey; analysis

作者簡介：杜娟（1985-），女，山西長治市人，獸醫(yī)師，主要從事畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管和重大動物疫病防控專業(yè)工作。

收稿日期：2015-04-05

中圖分類號：S852.61；S834

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-0084（2015）06-0041-03