康復新液的體外抑菌活性研究

梁啟聰，蔡婭娟

（中山大學附屬第五醫(yī)院藥學部，廣東 珠海）

0 引言

康復新液為美洲大蠊提取物，含有海藻糖、肌醇、苯丙氨酸、天冬酰胺等多種糖蛋白和氨基酸等，具有增強機體免疫力、保護肝臟、促進組織修復和廣泛的抗腫瘤等作用[1]。內(nèi)服可治療瘀血阻滯如胃出血，胃、十二指腸潰瘍等，以及肺結核、陰虛肺癆的輔助治療[2]。外用可用于潰瘍、外傷、燒傷、燙傷、褥瘡等皮膚黏膜創(chuàng)口[3]。目前廣泛應用于臨床多個學科，體現(xiàn)多種藥理作用，從藥理學角度分析，康復新液富含多元醇類和多肽(表皮細胞生長因子EGF)，能促進表皮細胞生長和肉芽組織增生，改善局部血液循環(huán)，促進創(chuàng)面壞死組織脫落，加速創(chuàng)面修復；抗結核作用，肺結核病為結核桿菌引起的肺部特異炎癥，其治療主要通過抗結核藥物的殺菌作用，而康復新液對非特異性炎癥有一定消炎作用、抗癌作用，有學者提出惡性腫瘤的發(fā)展可能和身體防御機能的破壞、細胞免疫的缺陷、免疫監(jiān)視失敗以及機體抗腫瘤生長潛力的減少和不平衡有關；促進機體的新陳代謝，防止機體內(nèi)的氧化損傷，提高機體的抗氧化酶活性，從而起到抗衰老的作用等[4]。而且康復新液屬于純天然昆蟲——美洲大蠊的提取物，與傳統(tǒng)西藥相比，有安全性高、副作用小、使用方便、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點。王奎等[5]研究發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊乙酸乙酯提取物對供試的金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌3種革蘭氏陽性菌具有一定抑菌作用，因此設計實驗研究康復新液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌及黑曲霉這5種具有典型代表的菌是否具有廣譜抑菌效果，探索康復新液體外抑菌的廣譜性。

1 材料

1.1 受試藥物

康復新液（100 ml/瓶，四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責任公司，批號：190409）。

1.2 儀器

SW-CJ-1F型凈化工作臺（蘇州安泰技術有限公司），DHP300型電熱恒溫培養(yǎng)箱（武漢海聲達儀器設備有限公司），HWS-12 電熱恒溫水浴鍋( 上海一恒科技有限公司)，LMQR-3260B立式高壓滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司），BHC-1500IIBl生物安全柜等。

1.3 試劑、菌株

無菌水，金黃色葡萄球菌（GIM1.64），大腸埃希氏菌 （GIM1.973），銅綠假單胞菌（GIM1.843），白色念珠菌（GIM2.194），黑曲霉（GIM 3.516）。以上菌株由廣東微生物菌種保藏中心提供。

1.4 培養(yǎng)基

Mueller-Hinton 瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號190621）。Mueller-Hinton（MH）肉湯培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號190610），TTC顯色劑（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號190517）。

2 方法

2.1 實驗原理

本試驗采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養(yǎng)基中，然后點種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌物質(zhì)抑制受試菌生長的最低濃度，即最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)[6]。

2.2 菌懸液的配制

刮取銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌18-20h的培養(yǎng)物，加入到含15ml無菌水的無菌試管中。搖勻，制成菌懸液。利用可見光光度儀，調(diào)菌懸液濃度為108/ml（白色念珠菌濃度為106/ml）。取培養(yǎng)成熟的黑曲霉用吐溫-80水溶液做洗脫劑，洗掉黑曲霉，用血球計數(shù)板調(diào)菌液濃度為106/ml。

2.3 培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基配制選用Mueller-Hinton（MH）肉湯培養(yǎng)基。培養(yǎng)基滅菌處理后冷卻至45℃左右，加入TTC顯色劑（含量為0.5g/L）。

2.4 體外抑菌試驗

精密稱量32g康復新液加入68g無菌水，均質(zhì)搖勻，制成樣品混合液。用5ml移液器吸取MH肉湯培養(yǎng)基5ml加入到無菌試管中待用，5根為一組（編號為1#、2#、3#、4#、5#），共五組，每組均重復以下步驟：用5ml移液器吸取樣品混合液5ml加入1#試管，均質(zhì)。從中吸取5ml加入2#試管，均質(zhì)。按上述操作,制備二倍系列稀釋樣品勻液至1%。每遞增稀釋一次，換用1次5ml吸頭。0.1%濃度吸取出的5ml倒于廢液缸。三組試管分別加入銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌菌懸液每根各0.1ml。放入恒溫培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)48±2h，觀察結果。剩余兩組試管分別加入白色念珠菌、黑曲霉菌液每根各0.1ml。放入恒溫培養(yǎng)箱28 ℃培養(yǎng)5-7d，觀察顯色結果。

3 試驗結果

結果顯示康復新液對金黃色葡萄球菌的MIC為40g/L，對大腸埃希氏菌的MIC為80g/L，對銅綠假單胞菌的MIC為80g/L，對白色念珠菌的MIC為40g/L，對黑曲霉的MIC為80g/L，因此，在使用濃度為80g/L時，康復新液對這五種代表菌具有一定的廣譜抑菌活性。結果見表1。

表1 康復新液最小抑菌濃度( MIC) 測定

4 討論

本研究結果顯示，康復新液中含有抗菌活性成分，對多種細菌及霉菌具有抑制作用，且抑菌效果在使用濃度80g/L有體現(xiàn)?？祻托乱嚎咕行镔|(zhì)可能與其所含的小分子化合物及抗菌肽有關，前者涉及不飽和脂肪酸、異黃酮化合物及甾醇類化合物，并分別獲得個別單體成分；后者主要是美洲大蠊受到各種誘導源刺激后所產(chǎn)生的抗菌肽，并對其誘導與提取影響因素及初步殺菌機制進行了研究[7]。康復新液雖然對多株細菌具有抗菌活性，但抗菌的最小抑菌濃度相對較大，不適宜單獨做抗菌劑使用，可復配其他抗菌劑或作輔助使用[8]。