甲狀腺激素受體β1在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達(dá)

康朋朋，劉洪博，張紅，白潔

哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院 1病理科，2檢驗(yàn)科，3耳鼻喉科(河北衡水 053000)

子宮內(nèi)膜癌是西方國(guó)家發(fā)病率最高的婦科惡性腫瘤，主要發(fā)生于絕經(jīng)后婦女，其發(fā)病與肥胖、糖尿病、高血壓、生育史、口服避孕藥和激素的使用密切相關(guān)。近年來(lái)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率在國(guó)內(nèi)也逐步上升，且趨于年輕化[1]。子宮內(nèi)膜發(fā)生的疾病主要有子宮內(nèi)膜單純性增生、復(fù)雜性增生和子宮內(nèi)膜癌。子宮內(nèi)膜癌又分為很多種類(lèi)，包括子宮內(nèi)膜樣腺癌、漿液性癌、透明細(xì)胞癌等，其中以子宮內(nèi)膜樣腺癌最為常見(jiàn)，多為雌激素依賴(lài)性，且具有極強(qiáng)的侵襲性[2]。對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵，晚期子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的5年生存率不到20%，而早期診斷的患者5年生存率高達(dá)90%。由于早期沒(méi)有明顯癥狀，當(dāng)出現(xiàn)出血、腹痛等癥狀時(shí)，病情多已晚期且存在腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移，難以進(jìn)行根治性腫瘤切除[3]。刮宮是子宮內(nèi)膜樣腺癌診斷評(píng)估的金標(biāo)準(zhǔn)，由于部分腫瘤形態(tài)不典型且多樣化，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)一些相關(guān)蛋白標(biāo)志物的表達(dá)，成為輔助診斷子宮內(nèi)膜樣腺癌的必要手段。因此，近年來(lái)對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究已成為熱點(diǎn)，從蛋白及分子水平上尋求相關(guān)標(biāo)志物，可以對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌的診斷及預(yù)后起到重要的指導(dǎo)作用[4]。研究表明甲狀腺激素受體β1(TRβ1)在多種腫瘤組織中表達(dá)均降低甚至完全缺失[5-7]，推測(cè)TRβ1可能是一種抑癌基因，可以抑制腫瘤的發(fā)生[8]，但TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)至今鮮見(jiàn)報(bào)道，本研究擬對(duì)TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達(dá)情況進(jìn)行研究，并分析其與子宮內(nèi)膜樣腺癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年12月至2016年12月我院門(mén)診刮宮及手術(shù)切除子宮的標(biāo)本中病理診斷為子宮內(nèi)膜樣腺癌48例和子宮內(nèi)膜單純性增生27例。子宮內(nèi)膜樣腺癌患者中，年齡≤50歲者30例，年齡>50歲者18例；腫瘤組織≤5 cm者32例，>5 cm者16例；浸潤(rùn)深度≤1/2肌層者29例，>1/2肌層者19例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期者36例，Ⅲ、Ⅳ期者12例；無(wú)脈管侵犯者31例，有脈管侵犯者17例。所選取標(biāo)本的患者之前均未接受放療、化療和激素治療，并排除合并其他重要疾病的患者。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 所有標(biāo)本采用10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，65℃烤片30 min，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，PBS洗滌3次，3%過(guò)氧化氫高壓修復(fù)2 min，PBS洗滌3次，并滴加一抗TRβ1(1∶50)，4℃冰箱過(guò)夜，次日滴加二抗，37℃孵育1 h，PBS洗滌3次，進(jìn)行DAB顯色，蘇木素復(fù)染2 min，自來(lái)水沖洗5 min，梯度酒精逆行脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。TRβ1抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司，SP檢測(cè)試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉公司。

1.3 結(jié)果判定 所選取的組織標(biāo)本均由兩名主治以上的病理醫(yī)師采用雙人雙盲法判定診斷，顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)、讀片。切片染色強(qiáng)度評(píng)分淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分：按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：<10%記為0分，10%～25%記為1分，26%～50%記為2分，>50%記為3分；兩者得分相乘，將≤3分設(shè)為陰性表達(dá)，>3分設(shè)為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織和子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達(dá) TRβ1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，陽(yáng)性顆粒黃色至棕黃色分布，見(jiàn)圖1。48例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中TRβ1蛋白表達(dá)陽(yáng)性4例，陽(yáng)性率8.3%，而在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中TRβ1蛋白表達(dá)陽(yáng)性25例，陽(yáng)性率92.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=51.73，P<0.05)，見(jiàn)表1。

A：TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)；B：TRβ1在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達(dá)

表1 TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達(dá) 例

2.2 TRβ1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌患者臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 不同年齡、腫瘤大小、肌層浸潤(rùn)深度和有無(wú)脈管侵犯分組子宮內(nèi)膜樣腺癌患者組織中TRβ1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：TRβ1蛋白陽(yáng)性率無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組0.0%(0/33)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組26.7%(4/15)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。臨床分期：TRβ1蛋白陽(yáng)性率Ⅰ、Ⅱ期25%(3/12)，Ⅲ、Ⅳ期2.8%(1/36)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是女性生殖系統(tǒng)中的常見(jiàn)病和多發(fā)病。患者多為絕經(jīng)后婦女，以陰道不規(guī)則出血為首要癥狀。腫瘤常呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]。由于其高發(fā)性和預(yù)后差，近年來(lái)關(guān)于子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究非常多。研究表明，多種蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中均呈高表達(dá)狀態(tài)，如VEGF、CD31、IGF-1、CD74、CyclinA1等蛋白，而TSP-1、PAX-2等蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中呈低表達(dá)狀態(tài)。子宮內(nèi)膜單純性增生是由于體內(nèi)雌孕激素水平失常所致，超聲下主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜增厚。雌激素持續(xù)升高而缺乏孕激素的拮抗引起子宮內(nèi)膜的腺體和間質(zhì)呈不同比例的增生，導(dǎo)致無(wú)排卵性功能性子宮出血，經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)。如不及時(shí)治療，不僅會(huì)引發(fā)患者貧血等繼發(fā)表現(xiàn)，還有可能繼續(xù)發(fā)展為子宮內(nèi)膜復(fù)雜性增生甚至不典型增生，所以對(duì)子宮內(nèi)膜單純性增生的及時(shí)治療和研究也是極為重要的。

表2 TRβ1表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 例

甲狀腺激素(TH)對(duì)許多組織的正常發(fā)育以及功能調(diào)節(jié)至關(guān)重要，人體內(nèi)的甲狀腺激素主要有兩種，即T3和T4，其中T3生物活性較活躍，與甲狀腺激素受體(TRs)的親和性比T4高20倍左右[10]，它可以通過(guò)單羧酸酯膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MCT8)進(jìn)入細(xì)胞與甲狀腺激素脫碘酶和TRs共同發(fā)揮作用。TRs由兩個(gè)人類(lèi)基因編碼，即THRA和THRB，此外，通過(guò)交替的mRNA剪接和不同的啟動(dòng)子使用產(chǎn)生了4種DNA和T3結(jié)合亞型，即TRα1、TRβ1、TRβ2和TRβ3。前3種廣泛存在于人體各臟器組織中，高度同源，但又有獨(dú)特的表達(dá)模式[11]。在腸上皮黏膜和視網(wǎng)膜中可以檢測(cè)到TRα1和TRβ2 的表達(dá)，分別誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和分化[12]。骨骼肌細(xì)胞中的甲狀腺激素主要通過(guò)與TRα1結(jié)合發(fā)揮作用。TRβ3僅存在于大鼠中[13]。TRβ1被Weinberger于1986年首次發(fā)現(xiàn)[14]，位于人染色體3p24.1，編碼TRβ1蛋白，屬于核受體超家族。研究表明，TRβ1編碼基因失活會(huì)導(dǎo)致聽(tīng)力障礙[15]。核定位信號(hào)鉸鏈域中的NLS-1和NLS-2可以誘導(dǎo)TRβ1進(jìn)入核內(nèi)，若NLS-1和NLS-2基因突變，會(huì)影響TRβ1的核穿梭活動(dòng)，甚至導(dǎo)致TRβ1定位錯(cuò)誤，誘發(fā)腫瘤的發(fā)生[16]。TRs與人體代謝、膽固醇和三酰甘油循環(huán)水平的調(diào)節(jié)有關(guān)。TRs是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，其活性可以通過(guò)T3的局部利用率來(lái)維持，并參與許多調(diào)節(jié)細(xì)胞周期控制和細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)[17]，影響處于不同分化階段的細(xì)胞，但不同種類(lèi)的TRs對(duì)細(xì)胞增殖和分化的影響是大不相同的，這取決于細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞環(huán)境以及發(fā)育或轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。無(wú)論在發(fā)育期間還是在成年人中，干細(xì)胞對(duì)于正常器官的形成、維持和再生都是必不可少的。最近的證據(jù)表明，TRs的某些作用可能是干細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的次要因素[18]。TRs中研究最多的亞型是TRβ1，有研究人員通過(guò)功能獲得方法使體外乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-468)重新高表達(dá)TRβ1，增加了細(xì)胞凋亡，降低了細(xì)胞增殖，并阻止了癌細(xì)胞的遷移[19]。由此可見(jiàn)，對(duì)TRβ1的檢測(cè)和干預(yù)已成為腫瘤診斷和治療的新方法[20]。除了調(diào)節(jié)代謝、生長(zhǎng)和發(fā)育外，越來(lái)越多的證據(jù)表明TRβ1在細(xì)胞增殖[21]和惡性轉(zhuǎn)化中具有重要作用。相關(guān)研究表明，將108 bp外顯子序列引入人TRβ1DNA結(jié)合域(DBD)的相應(yīng)位置，構(gòu)建人工修飾的人TRβ1(m-TRβ1)[22]，可以通過(guò)上調(diào)Caspase-3和Bak基因的表達(dá)抑制體外肝癌細(xì)胞(SK-hep1)的增殖并阻止腫瘤細(xì)胞遷移，推測(cè)TRβ1可能是一種抑癌因子[23]。

本研究顯示，TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)顯著低于子宮內(nèi)膜單純性增生，提示TRβ1的降低可能導(dǎo)致了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生，推測(cè)TRβ1是一種抑癌基因。TRβ1與患者的年齡、腫瘤大小及浸潤(rùn)肌層深度沒(méi)有相關(guān)性，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示TRβ1的低表達(dá)促進(jìn)了子宮內(nèi)膜樣腺癌的轉(zhuǎn)移，推測(cè)TRβ1在抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮著重要作用。

由于本次研究收集標(biāo)本數(shù)量相對(duì)較少，不能分析大量的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，只是針對(duì)本地區(qū)子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的研究分析，并做了初步探討，之后會(huì)加大研究力度，增加病例標(biāo)本，以獲得長(zhǎng)久、大量準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)及意義。我們提出了利用生物學(xué)上重要的蛋白標(biāo)記物TRβ1檢測(cè)子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)，為子宮內(nèi)膜樣腺癌生物標(biāo)記物研究的未來(lái)方法奠定了基礎(chǔ)，也為臨床早期診斷和治療子宮內(nèi)膜樣腺癌提供新的思路。