胃癌患者血清膜聯(lián)蛋白A1、糖類抗原72-4、胃蛋白酶原Ⅰ及胃泌素-17 水平變化及意義分析

夏永欣，田春陽(yáng)，郭潔，張萌

南陽(yáng)市中心醫(yī)院消化科二病區(qū)，河南 南陽(yáng)4730000

胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其病死 率僅次于肺癌，位居第二[1]。胃癌的發(fā)生較為隱匿，早期診斷和治療對(duì)提高患者的療效和降低病死率具有重要意義。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法由于具有獲取方便、檢測(cè)速度快、滿足定性和定量檢測(cè)需求的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐[2]。血清中的糖類抗原72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）、胃蛋白酶原Ⅰ（pepsinogen Ⅰ，PGⅠ）和胃泌素-17（gastrin-17，G-17）可以作為胃癌診斷的生物學(xué)指標(biāo)[3]。腫瘤相關(guān)抗原引起的自身抗體可在腫瘤患者的血清中檢測(cè)到，并可用于檢測(cè)腫瘤進(jìn)展。盡管惡性腫瘤中自身抗體水平升高的原因尚不清楚，但自身抗體被認(rèn)為是可以識(shí)別腫瘤發(fā)生的潛在生物標(biāo)志物[4]。此外，由于在正常人和非腫瘤患者中抗原抗體反應(yīng)不明顯，因此自身抗體作為用于腫瘤檢測(cè)的血清學(xué)標(biāo)志物是可行的。最近的報(bào)道表明，膜聯(lián)蛋白A1（Annexin A1，ANXA1）的異常水平可能與多種腫瘤有關(guān)，可用作潛在的標(biāo)志物和治療靶標(biāo)[5]。本研究探討胃癌患者血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ及G-17 的水平及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017 年1 月至2020 年4 月在南陽(yáng)市中心醫(yī)院治療的85 例胃癌患者（胃癌組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②年齡＞18 歲；③入組前無(wú)放化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤、肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等；②復(fù)治患者。同時(shí)選取60 例慢性胃炎患者（慢性胃炎組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療方案》[6]診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡＞18 歲；入院前1 個(gè)月未進(jìn)行藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并甲狀腺疾病、血液系統(tǒng)疾病等。另選取60 例體檢健康者作為對(duì)照（健康組）。3 組受試者各基線特征比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及家屬知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

取3組受試者的空腹靜脈血4 ml，以3000 r/min的速度離心6 min，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者的血清G-17、CA72-4 水平，乳膠免疫比濁法檢測(cè)血清PGⅠ水平。全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)科技有限公司，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

表1 3 組受試者的基線特征

ANXA1 檢測(cè)：使用ANXA1 自身抗體半定量檢測(cè)試劑盒，將純化的ANXA1 用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）稀釋至0.5 mg/ml，每孔200 μl 加到96 孔板中，并用2.5%的胎牛血清封閉。用PBS 以1∶100 的比例稀釋制備的血清樣品，然后將稀釋的血清樣品添加到每孔中。使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）檢測(cè)ANXA1 自身抗體水平，加入四甲基聯(lián)苯胺底物溶液，每孔100 μl，并在室溫下孵育15 min，每孔中添加50 μl 2 mol/L 的硫酸終止反應(yīng)，用550 型酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量每個(gè)孔的吸光度（A），A值代表ANXA1自身抗體水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組比較采用t 檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陽(yáng)性）例數(shù)×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）例數(shù)×100%，陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陰性）例數(shù)×100%；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17水平的比較

胃癌患者血清ANXA1、CA72-4 和G-17 水平均高于慢性胃炎和健康者，而PGⅠ水平均低于慢性胃炎和健康者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

2.2 不同臨床特征的胃癌患者血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 水平的比較

TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤大?。? cm 的胃癌患者血清ANXA1 水平分別高于TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期、腫瘤大小≤5 cm 的患者（t=-2.490、-2.190，P＜0.05）。低分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤大小＞5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清CA72-4 水平分別高于中高分化、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、腫瘤大小≤5 cm、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（t=-2.415、-4.412、-4.053、-3.412，P＜0.05）。TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ期患者血清PGⅠ水平明顯低于TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期的患者（t=5.144，P＜0.01），而G-17 水平明顯高于TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期的患者（t=-3.288，P＜0.01）。（表3）

表2 3 組受試者血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 水平的比較（±s）

表2 3 組受試者血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 水平的比較（±s）

注：a與健康組比較，P＜0.05；b與慢性胃炎組比較，P＜0.05

組別胃癌組（n=85）慢性胃炎組（n=60）健康組（n=60）F值P值A(chǔ)NXA1（g/L）6.05±1.53a b 4.40±1.02a 1.50±0.44 7.393 0.000 CA72-4（U/ml）40.20±9.88a b 8.92±2.10a 3.49±1.00 9.221 0.000 PGⅠ（ng/ml）45.04±13.32a b 110.32±34.45a 160.50±41.12 10.322 0.000 G-17（pmol/L）19.29±5.59a b 14.59±4.33a 9.89±2.10 8.221 0.000

2.3 血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷價(jià)值

血清ANXA1 診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為65.88%（56/85）、65.00%（78/120）、57.14%（56/98）和72.90%（78/107）。

血清CA72-4 診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為58.82%（50/85）、58.33（70/120）、50.00%（50/100）、66.67%（70/105）。

血清PGⅠ診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為63.53%（54/85）、64.17%（77/120）、55.67%（54/97）和71.30%（77/108）。

血清G-17 診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為78.82%（67/85）、62.50%（75/120）、59.82%（67/112）和80.65%（75/93）。

血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 聯(lián)合診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為84.71%（72/85）、81.67%（98/120）、76.60%（72/94）和88.29%（98/111）。

3 討論

萎縮性胃炎為常見(jiàn)的慢性胃病，如果患者未得到有效治療，則可能發(fā)展為胃癌[7]。因此，萎縮性胃炎的早期診斷同等重要，因此本研究也將其納入研究范圍。血清腫瘤標(biāo)志物是一種與腫瘤相關(guān)的抗原，可以在一定程度上反映腫瘤的性質(zhì)和分化特征。因此，檢測(cè)其血清水平可有助于腫瘤的診斷、預(yù)后判斷和治療[8-10]。

腫瘤標(biāo)志物可在腫瘤組織、血液甚至排泄物中被發(fā)現(xiàn)，正常組織中卻含量很小。腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、可行、可重復(fù)性高[11]。因?yàn)槲赴┑陌l(fā)展是通過(guò)健康人、慢性胃炎患者和胃癌患者的過(guò)程進(jìn)行的，因此，本研究建立了胃癌組、健康組和慢性胃炎組進(jìn)行研究。CA72-4是一種高分子量的糖蛋白，也是近年來(lái)臨床實(shí)踐中開(kāi)發(fā)的新型腫瘤標(biāo)志物，其檢測(cè)特異度較高，在胃腸道腫瘤的檢測(cè)中具有很高的價(jià)值[12]。胃蛋白酶由胃的主要細(xì)胞合成和分泌，屬于天冬氨酸蛋白酶家族，包括PGⅠ和PGⅡ。研究發(fā)現(xiàn)胃黏膜腺體可影響PGⅠ的分泌，當(dāng)胃黏膜腺體萎縮時(shí)，會(huì)抑制PGⅠ的分泌。同樣，胃黏膜的功能和形態(tài)也會(huì)影響患者的血清PG 水平[13]。G-17 是胃腸道G 細(xì)胞分泌的一種多肽激素，可與膽囊收縮素受體結(jié)合，刺激胃酸分泌并通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)滋養(yǎng)胃腸黏膜，不僅可以維持消化道的結(jié)構(gòu)完整性，還可以調(diào)節(jié)消化道的功能[14]。血清G-17 水平的變化可以反映胃黏膜病變的狀況，因此可以作為胃癌和癌前疾病的篩查指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，G-17與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，可以直接影響胃癌細(xì)胞從良性向惡性轉(zhuǎn)化[15]。膜聯(lián)蛋白A 家族在胃癌中過(guò)表達(dá)，可作為早期胃癌診斷的潛在標(biāo)志物和治療靶標(biāo)[16]。膜聯(lián)蛋白A 家族成員包括A1～A11 和A13，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞分化和凋亡等過(guò)程[17]。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ANXA1的異常表達(dá)與多種腫瘤的癌變有關(guān)[18]。

表3 不同臨床特征的胃癌患者的血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ、G-17 水平（n=85）

本研究結(jié)果顯示，胃癌患者血清ANXA1、CA72-4 和G-17 水平均高于慢性胃炎患者和健康者，而PGⅠ水平均低于慢性胃炎患者和健康者。這表明這4 種腫瘤標(biāo)志物對(duì)胃癌患者的變化敏感，具有一定的診斷價(jià)值。由于胃黏膜萎縮、胃功能障礙和胃黏膜腺上皮化生，導(dǎo)致PGⅠ水平升高。盡管尚不清楚惡性腫瘤中自身抗體水平上升的原因，但認(rèn)為ANXA1 水平上升導(dǎo)致機(jī)體的免疫反應(yīng)，ANXA1 自身抗體水平的升高可能與腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移有關(guān)。為了研究ANXA1 水平對(duì)胃癌的影響，本研究進(jìn)一步分析了其與胃癌臨床特征的關(guān)系。TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤大小＞5 cm的胃癌患者血清ANXA1 水平分別高于TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期、腫瘤大小≤5 cm 的患者，以上表明ANXA1 水平與腫瘤負(fù)荷有關(guān)，腫瘤負(fù)荷越大，腫瘤細(xì)胞釋放的ANXA1 越多，這直接導(dǎo)致人體對(duì)自身抗體的反應(yīng)越強(qiáng)，其在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。通過(guò)進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，不同TNM 分期的胃癌患者血清PGⅠ、G-17 和CA72-4 水平存在差異。隨著TNM 分期的增加，血清PGⅠ水平呈下降趨勢(shì)，而血清G-17 和CA72-4 水平升高，表明上述血清指標(biāo)與胃癌的TNM 分期密切相關(guān)，可用于評(píng)估胃癌患者的嚴(yán)重程度。因此，在臨床工作中可檢測(cè)上述指標(biāo)水平，以有效地診斷胃癌并確定胃癌患者的嚴(yán)重程度，有助于制定臨床治療方案。

目前臨床研究中對(duì)胃癌患者的早期診斷研究主要是針對(duì)多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，提高其陽(yáng)性檢出率和靈敏度[19-20]。血清標(biāo)志物水平變化與胃癌臨床特征的關(guān)系研究較少，本研究主要選擇血清ANXA1、CA72-4、PGⅠ和G-17 水平變化與胃癌臨床特征的關(guān)系進(jìn)行研究。但是，本研究中選擇病例的數(shù)量是有限的，這可能會(huì)影響數(shù)據(jù)的結(jié)果。在后期階段將加大樣本量，并將不同分化程度、胃癌預(yù)后和復(fù)發(fā)胃癌腫瘤標(biāo)志物水平的變化納入研究。

綜上所述，胃癌患者血清ANXA1、CA72-4 和G-17 水平升高，PGⅠ水平降低，與患者TNM 分期、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定聯(lián)系，值得進(jìn)一步研究。