結(jié)核菌Xpertrpob基因利福平耐藥快速檢測(cè)的臨床價(jià)值

譚雪松

【摘 要】 目的：研究結(jié)核菌Xpert（rpob）基因檢測(cè)在利福平耐藥性的快速檢測(cè)過(guò)程中的臨床價(jià)值。方法： 選取2018年5月～2019年7月在長(zhǎng)春市傳染病醫(yī)院診斷為肺結(jié)核病患者400例作為本次研究對(duì)象 采用Xpert MTB/RIF （簡(jiǎn)稱Xpert）、抗酸染色法 320液體培養(yǎng)法三種方法對(duì)結(jié)核菌進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)比其檢測(cè)靈敏度與檢測(cè)時(shí)間。結(jié)果：Xpert檢出率明顯優(yōu)于抗酸染色法（P<0.05）。Xpert技術(shù)與液體培養(yǎng)法之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（P >0.05）。Xpert檢測(cè)時(shí)間最短。用液體培養(yǎng)結(jié)合膠體金法菌型鑒定結(jié)果為檢驗(yàn)結(jié)核桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌靈敏度為94.20%，特異性為96.39%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.53%。以液體藥敏作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert檢測(cè)與液體藥敏檢測(cè)法有較好的一致性。結(jié)論：Xpert作為一種新的檢測(cè)方法，具有檢測(cè)時(shí)間短、操作準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，對(duì)于肺結(jié)核的診斷具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核菌;Xpert;利福平;藥敏檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R520.4?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A?? 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）03-089-01

結(jié)核病是由結(jié)核桿菌（Tubercle Bacillus，TB）感染引起的一種具有傳染的慢性疾病，以肺結(jié)核最為常見(jiàn)，是導(dǎo)致人類死亡的主要疾病之一。我國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃的目標(biāo)是在2030年使發(fā)病率降低80%，而病死率降低90%。為實(shí)現(xiàn)此目標(biāo)，結(jié)核病的早期診斷及其耐藥性檢測(cè)具有非常重要的應(yīng)用價(jià)值。然而目前我國(guó)結(jié)核病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施還不發(fā)達(dá)，主要確診方法仍停留在涂片和體外培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法，檢出率低，且培養(yǎng)周期長(zhǎng)，很容易耽誤患者的病情。Xpert MTB/RIF系統(tǒng)是由WHO推薦的近年來(lái)在結(jié)核病的快速診斷和利福平耐藥性檢測(cè)應(yīng)用較為廣泛，該技術(shù)在我國(guó)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)被初步使用，診斷技術(shù)還初級(jí)階段[1]。本研究采用Xpert系統(tǒng)對(duì)肺結(jié)核及疑似患者痰樣本進(jìn)行結(jié)核桿菌及其對(duì)利福平耐藥性的檢測(cè)，進(jìn)而評(píng)價(jià) Xpert系統(tǒng)在耐多藥結(jié)核病快速診斷中的價(jià)值。

1 資料和方法

1.1? 一般資料

選取2018年5月～2019年7月長(zhǎng)春市傳染病醫(yī)院收納的400例肺結(jié)核病患者作為本次研究對(duì)象。所有患者均符合《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)》[2]其中男性236例，女性164例，平均年齡（44.4±2.6）歲，所有入組患者均簽署知情同意。

1.2 儀器與試劑

快速培養(yǎng)藥敏系統(tǒng)（美國(guó)BD公司）;Xpert MTB/RIF系統(tǒng)（美國(guó)Cepheid公司），萋-尼氏抗酸染色試劑盒（上海江萊生物科技有限公司）。

1.3? 抗酸染色 液體培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)方法

抗酸染色按照文獻(xiàn)[1]進(jìn)行操作。取1～2ml樣本進(jìn)行液體培養(yǎng)，對(duì)陽(yáng)性菌株進(jìn)行涂片確認(rèn)，鑒定為結(jié)核分枝桿菌的進(jìn)行藥物耐藥檢測(cè)。

1.4? Xpert檢測(cè)流程

取痰樣本放置處理管中，加入2倍體積的處理液振蕩混勻并放置10min。打開(kāi)試劑盒，取2ml液化樣本加入試劑盒中，然后將試劑盒放到儀器模塊中，儀器開(kāi)始進(jìn)行檢測(cè)

1.5? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，P<0.05為差異有統(tǒng)意義。以液體培養(yǎng)和藥敏為檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)Xpert的靈敏度和特異性。

2 結(jié)果

2.1? 三種方法檢出率及報(bào)告時(shí)間 400例肺結(jié)核痰樣本同時(shí)采用Xpert、抗酸染色法、320液體培養(yǎng)法進(jìn)行檢測(cè)。Xpert檢出率36.75% （147/400），抗酸染色檢出率17.75% （71/400），320液體培養(yǎng)檢出率35.75% （143/400）。對(duì)比Xpert與抗酸染色法，Xpert檢出率明顯優(yōu)于抗酸染色法（P<0.05）。Xpert技術(shù)與液體培養(yǎng)法之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（P >0.05）? 抗酸染色的檢出時(shí)間為3h，Xpert檢測(cè)時(shí)間2h，MGIT320平均檢出時(shí)間為10.8 （5.0～19.0）d。

2.2? Xpert檢測(cè)結(jié)核桿菌的診斷效能 400例患者中液體培養(yǎng)陽(yáng)性143例，培養(yǎng)陰244性例，有13例污染，Xpert檢測(cè)陽(yáng)性147例，陰性250例，有3例結(jié)果錯(cuò)誤。液體培養(yǎng)陽(yáng)性的菌株可通過(guò)膠體金法確認(rèn)結(jié)核分枝桿菌共121例，非結(jié)核分枝桿菌7例。用液體培養(yǎng)結(jié)合膠體金法菌型鑒定結(jié)果為檢驗(yàn)結(jié)核桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)Xpert檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌靈敏度為94.20% （130/138），特異性為96.39% （267/ 277），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.53%（128/121），陰性預(yù)測(cè)值為97.26%（249/256）。Xpert檢測(cè)結(jié)核桿菌結(jié)果，見(jiàn)表1。

2.3 Xpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥性

對(duì)130例結(jié)核菌株進(jìn)行液體藥敏試驗(yàn)，對(duì)利福平耐藥有7例，敏感的有123例。通過(guò)Xpert檢測(cè)出利福平耐藥10例，敏感的120例。兩者檢測(cè)利福平同時(shí)耐藥9例，敏感117例，兩者檢測(cè)利福平結(jié)果不同的有3例。以液體藥敏作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert檢測(cè)利福平耐藥性的靈敏度90%（9/10），特異性98.37%（121/123），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值90%（9/10） 陰性預(yù)測(cè)值97.5% （117/120）。兩種方法一致性較好，Kappa值為0.90≥0.75。兩者檢測(cè)利福平結(jié)果有所不同。不一致的菌株經(jīng)ropB基因測(cè)序后，均未檢測(cè)到基因突變，結(jié)果為利福平敏感菌株。

3 討論

結(jié)核分支桿菌可引起全身疾病，最常見(jiàn)的為肺結(jié)核。而且結(jié)核桿菌生長(zhǎng)較慢，給檢驗(yàn)帶來(lái)了很大困難。Xpert系統(tǒng)可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和利福平是否耐藥。本研究顯示Xpert、液體培養(yǎng)、抗酸染 色對(duì)結(jié)核桿菌的檢出率依次為36.75%、17.75%、35.75%。Xpert在檢測(cè)結(jié)核方面與以液體培養(yǎng)聯(lián)合膠體金菌種鑒定結(jié)果靈敏度相似，特異度略高。以液體藥敏作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert檢測(cè)結(jié)核桿菌對(duì)利福平的耐藥性具有較高靈敏度。

綜上所述，Xpert作為一種新的檢測(cè)方法，具有檢測(cè)時(shí)間短、操作準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，對(duì)于肺結(jié)核的診斷具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì).臨床診療指南：結(jié)核病分冊(cè)IN].北 京：人民衛(wèi)生出版社，2015：2-5.

[2] 陸峰，馬俊鋒，王小平，符劍.Xpert MTB/RIF快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌技術(shù)的應(yīng)用[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)，2019，30（03）：335-336.