高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用和效果

魯珍娥，聶娟，魯彩彩，柳威，易家玲

（武漢華科大生命科技有限公司，湖北武漢 430223）

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對(duì)藥品質(zhì)量的要求也越來越高，而合格的藥品需要嚴(yán)格的檢測(cè)流程和先進(jìn)的檢測(cè)方法。其中，高效液相色譜技術(shù)（High Performance Liquid Chromatog-raphy，HPLC）就是目前最常使用的檢測(cè)手段，其在所有的藥品質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)中運(yùn)用已較為成熟。而色譜法起初并沒有用于藥品檢測(cè)，僅僅是將混合物按不同組分進(jìn)行分離，一直到20世紀(jì)50年代，這種分離手段才開始運(yùn)用到藥品檢測(cè)中，是當(dāng)前化學(xué)分析過程中應(yīng)用最普遍的手段之一，其具有很高的分離速度與分離效率，且具有極高的檢測(cè)靈敏度，近些年來，逐漸成為藥品質(zhì)量控制的重要手段。

1 高效液相色譜的原理和技術(shù)條件

高效液相色譜是利用細(xì)粒徑填料和細(xì)內(nèi)徑柱子而形成的一種技術(shù)，而色譜柱的性能取決于固定相的顆粒度大小，即顆粒度越大，色譜柱分離速度及效率就越低，反之越高[1]。圖1所示為高效液相色譜技術(shù)裝置示意圖。而想要獲取更高的分離效能及靈敏度，高效液相色譜技術(shù)需要具備以下4個(gè)條件[2]：（1）填料應(yīng)選擇使用新型色譜填料，使用雜化顆粒技術(shù)將顆粒粒徑的大小設(shè)定在17 μm；（2）針對(duì)長(zhǎng)度較長(zhǎng)的色譜柱，為了能夠保證其流速，應(yīng)使用高效液相色譜輸液泵；（3）為了有助于檢測(cè)器捕捉到更多色譜峰內(nèi)的數(shù)據(jù)，應(yīng)裝置高效液相色譜高速檢測(cè)器，以確保獲取更多的峰面積；（4）自動(dòng)進(jìn)樣器是高效液相色譜技術(shù)中不可或缺的，其能夠提高進(jìn)樣速度，加快進(jìn)樣周期，從而保證在使用高效液相色譜法的過程中檢測(cè)結(jié)果不受極端高壓波動(dòng)的影響。

2 高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

2.1 藥品含量測(cè)定

高效液相色譜法可對(duì)原料中各雜質(zhì)、各成分的含量進(jìn)行測(cè)定[3-4]，特別是遇水化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)，如藥品吡羅昔康（酰胺類化合物），其能夠快速準(zhǔn)確可靠地得出檢測(cè)結(jié)論。而針對(duì)不同的藥品，具體操作流程也存在差異，對(duì)于吡羅昔康，為了增強(qiáng)吡羅昔康水溶液的穩(wěn)定性及溶解性，確保檢測(cè)結(jié)果，需先使用0.01 mol/L的鹽酸甲醇溶液；而對(duì)于四環(huán)素類抗生素，在對(duì)其進(jìn)行測(cè)定的過程中，需要使用高效液相色譜法對(duì)四環(huán)素類抗生素進(jìn)行組分分離；在對(duì)鹽酸萘甲唑啉鼻用劑型凝膠中的鹽酸萘甲唑啉含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)，應(yīng)先將鹽酸萘甲唑啉鼻用劑型凝膠中的高分子物質(zhì)分離出來，常采取乙腈進(jìn)行析出，以避免高分子物質(zhì)影響液相柱，從而影響檢測(cè)結(jié)果。

2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查

高效液相色譜法還可用于檢查藥物生產(chǎn)制造及運(yùn)輸使用過程中產(chǎn)生的物質(zhì)，通常在此過程中產(chǎn)生的物質(zhì)含量極其微小，為了保證產(chǎn)生的物質(zhì)不對(duì)藥品的安全性造成影響，必須加強(qiáng)對(duì)這些物質(zhì)的檢查。而高效液相色譜法具有極高的靈敏度，即便對(duì)含量微小的有關(guān)物質(zhì)，也能獲取準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。例如，制備和使用鹽酸特拉唑嗪片過程中，使用高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)范圍可達(dá)0.05 μg/mL，而采用常規(guī)檢測(cè)法檢測(cè)精確度僅有0.025 mg/mL。

2.3 中藥成分檢驗(yàn)

中藥是一個(gè)成分較為復(fù)雜的藥物體系，其中含有多種微量元素及有機(jī)成分。隨著近些年來我國(guó)中藥產(chǎn)業(yè)的不斷崛起，控制中藥質(zhì)量尤為重要。因此，需要對(duì)中藥的成分進(jìn)行檢測(cè)。通?？刂浦兴庂|(zhì)量常采用薄層色譜法進(jìn)行中藥成分檢測(cè)，但該方法除了具有一定的實(shí)驗(yàn)難度外，還容易受到外界環(huán)境因素的影響，進(jìn)而造成檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。目前，高效液相色譜法在藥物檢測(cè)中應(yīng)用廣泛，當(dāng)前已替代了常規(guī)中藥成分檢測(cè)所使用的薄層色譜法，經(jīng)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究證明，使用該方法所檢測(cè)出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作方法簡(jiǎn)便。

2.4 抗生素類藥品中降解產(chǎn)物及聚合物的檢驗(yàn)

高效液相色譜法還能對(duì)抗生素類藥品進(jìn)行檢驗(yàn)。在臨床上，抗生素類藥物得到了廣泛應(yīng)用，但同時(shí)也伴隨著諸多不良反應(yīng)的產(chǎn)生，造成這種問題的原因之一就是生產(chǎn)抗生素類藥物的原料中含有雜質(zhì)。為了減小或消除使用抗生素類藥物過程中產(chǎn)生的不良反應(yīng)，必須對(duì)原料中的雜質(zhì)進(jìn)行控制。而相關(guān)研究證明，高效液相色譜法的使用能夠在較短時(shí)間內(nèi)分離出原料中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物及聚合物等雜質(zhì)，從而對(duì)其進(jìn)行限量控制，保障抗生素類藥物的藥效，減少不良反應(yīng)的發(fā)生。

3 高效液相色譜新技術(shù)的發(fā)展

目前發(fā)展的高效液相色譜新技術(shù)包括高效液相色譜法-蒸發(fā)光檢測(cè)技術(shù)（HPLC-ELSD）、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）及快速高效液相色譜技術(shù)等[5]。（1）HPLC-ELSD技術(shù)將蒸發(fā)光檢測(cè)技術(shù)與高效液相色譜技術(shù)相結(jié)合，解決了以往受限于含發(fā)色團(tuán)的化合物檢測(cè)范圍等問題，從而大大提高了高效液相色譜技術(shù)的使用范圍。（2）LC-MS技術(shù)是將質(zhì)譜儀運(yùn)用到液相色譜技術(shù)上，能夠達(dá)到高效分離復(fù)雜有機(jī)混合物的目的，其主要是利用了質(zhì)譜儀強(qiáng)大的組分鑒定能力。（3）快速高效液相色譜技術(shù)主要是在高效液相色譜技術(shù)的基礎(chǔ)上對(duì)色譜參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)柱子進(jìn)行了升級(jí)與改造，使柱子更耐高壓，增加了柱效，以此來使得高效液相色譜技術(shù)更快速高效，縮短檢測(cè)時(shí)間。

4 實(shí)際案例應(yīng)用

以復(fù)方氨基酸注射液中焦谷氨酸含量的測(cè)定為例，說明高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。人體蛋白質(zhì)吸收不足時(shí)，機(jī)體將由于氨基酸過低而出現(xiàn)新陳代謝障礙，此時(shí)使用藥物復(fù)方氨基酸注射液將有助于患者吸收補(bǔ)充蛋白質(zhì)，改善術(shù)后營(yíng)養(yǎng)狀況。該藥物根據(jù)含氨基酸總量可分為5%和12%兩種規(guī)格，其中含L-谷氨酸含量為0.75 mg/mL和1.80 mg/mL[6]。由于在產(chǎn)品的制備過程中需經(jīng)過高溫環(huán)境，因此，容易造成藥物中產(chǎn)生焦谷氨酸，可以選用高效液相色譜技術(shù)對(duì)復(fù)方氨基酸注射液中焦谷氨酸的含量進(jìn)行測(cè)定。

在測(cè)定過程中，需對(duì)色譜條件及測(cè)定方法進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的型號(hào)選擇為Agilent ZORBAXSB—C18，該色譜柱具有較強(qiáng)的耐酸性，有助于分離樣品中的不同組分峰，并且要求柱溫不能太高，這是由于較低柱溫有助于柱效的提高。為了達(dá)到最佳的分離效果，將pH設(shè)定為1.6。測(cè)定過程中直接對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，省去了樣品過柱環(huán)節(jié)，該過程能夠減少成分含量的降低，使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

5 結(jié)語

高效液相色譜技術(shù)在藥品檢測(cè)中發(fā)揮著重要作用，能夠應(yīng)用到藥品含量、中藥成分組成及抗生素類藥品檢測(cè)方面，并對(duì)藥物在生產(chǎn)制造及運(yùn)輸使用過程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。而隨著科技發(fā)展，HPLC-ELSD、LC-MS、快速高效液相色譜等技術(shù)的出現(xiàn)，促進(jìn)了藥品檢測(cè)速度及效率的進(jìn)一步提高，藥品檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，使得藥品質(zhì)量控制得到了加強(qiáng)。如今，便攜式理念被歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家檢驗(yàn)設(shè)備公司引入超高效液相色譜領(lǐng)域，其作為經(jīng)典技術(shù)的傳承，實(shí)現(xiàn)了技術(shù)的革新性突破，令應(yīng)用場(chǎng)景更加多元化，將更加拓展與提升藥品質(zhì)量檢驗(yàn)的水平，同時(shí)降低檢驗(yàn)成本。