基于時間分辨免疫熒光法與電化學(xué)發(fā)光法對降鈣素原檢測項目的臨床一致性評價

李登紅，陸建偉，王洪濤，莊子檳

1 巴迪泰（廣西）生物科技有限公司 （廣西南寧 530031）；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科 （廣西南寧 530022）

降鈣素原（procalcitonin，PCT）是無激素活性的降鈣素 前肽物質(zhì)，為分子量為13 kD的糖蛋白。健康人血漿中PCT含量極低[1]，其在人體內(nèi)的半衰期為25～30 h，穩(wěn)定性好[2]。PCT水平在有系統(tǒng)性癥狀的細菌感染后會快速升高，其他情況，如重大手術(shù)、嚴(yán)重?zé)齻托律鷥阂矔?，但是其會很快回?fù)到基線水平；而病毒性感染、細菌定植、局灶感染、變態(tài)反應(yīng)性疾病、自身免疫疾病和移植排斥反應(yīng)通常不會誘導(dǎo)PCT水平大幅度升高（數(shù)值＜0.5 ng/ml）。因此，通過評估PCT水平，臨床醫(yī)師能夠進行是否會發(fā)展為重度膿毒癥和膿毒性休克的危險性評估。

目前，測定PCT的方法主要有凝膠層析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、放射免疫法、金標(biāo)法、免疫熒光法、免疫化學(xué)發(fā)光法等[3]。羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）已進入中國市場多年，因其產(chǎn)品質(zhì)量可靠、穩(wěn)定，深受廣大醫(yī)院用戶的信賴。超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）是巴迪泰公司研發(fā)的POCT試劑盒，采用時間分辨免疫熒光與干化學(xué)層析技術(shù)，結(jié)合抗體、抗原的特異度反應(yīng)，檢測下限能夠達到0.01 ng/ml，通過配套的熒光免疫分析儀，將結(jié)果定量顯示出來。為了評估超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）的性能，以羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）為對照，對超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）開展準(zhǔn)確度、精密度、相關(guān)性、一致性方面的評價，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

110例樣本均來源于2019年3—4月廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診、急診以及住院的患者，其中男60例，女50例；年齡1～85歲；包含一定數(shù)量的健康人群和輕、重度炎癥患者，剔除嚴(yán)重溶血、黃疸以及體積小的樣本。

1.2 儀器與試劑

參照組試劑及儀器：羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）及配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（Roche diagnostics GmbH），羅氏 cobas e411分析儀（Roche diagnostics GmbH）。

試驗組試劑及儀器：超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）及配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品[巴迪泰（廣西）生物科技有限公司]，全自動干式熒光免疫分析儀（A5000）[巴迪泰（廣西）生物科技有限公司]。

參照試劑和試驗試劑的陽性標(biāo)準(zhǔn)均為PCT≥0.5 ng/ml。

1.3 方法

1.3.1 精密度評估

參考EP15-A2文件，兩種試劑均檢測兩個水平的血清樣品配制的血清質(zhì)控品，另外使用兩種試劑分別測試兩種試劑配套的質(zhì)控品，測定3次/d，間隔2 h，連續(xù)測定5 d，計算批內(nèi)和總變異系數(shù)（CV）；根據(jù)原衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)評標(biāo)準(zhǔn)，檢測系統(tǒng)不精密度CV＜1/3Tea（10%）。

1.3.2 準(zhǔn)確度評估

使用羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）和超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）同時檢測25例濃度覆蓋檢測范圍的臨床樣本，采用t檢驗統(tǒng)計檢驗結(jié)果，計算超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）測定值與羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）測定值的偏倚，繪制偏移圖，將測量的偏倚與廠家聲明進行比較。

1.3.3 相關(guān)性評估

使用羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）和超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）同時檢測110例濃度覆蓋檢測范圍的臨床樣本，采用線性回歸進行結(jié)果分析，以y=a+bx和r的形式給出回歸分析的擬合方程。

1.3.4 一致性評估

Bland-Altman可很好地評價定量數(shù)據(jù)的檢測結(jié)果一致性，同時會提供系統(tǒng)誤差與隨機誤差。試驗試劑與參照試劑的每個樣本測定值之差與相應(yīng)兩試劑的測試均值作散點圖并采用四格表法分析兩種方法的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和約登指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

基于 OriginPro8 SR4（v8.0951(B951)）和 MedCalc（Version 18.2.1）軟件進行統(tǒng)計分析和作圖，精密度評估用CV表示，準(zhǔn)確度評估采用t檢驗，相關(guān)性評估采用線性回歸分析，一致性評估應(yīng)用Bland-Altman和四格表法。

2 結(jié)果

2.1 精密度評估結(jié)果

兩種方法檢測PCT的精密度見表1，其中兩種檢測方法均小于原衛(wèi)生部臨檢中心要求的1/3Tea（10%）。

表1 試驗試劑與參照試劑檢測結(jié)果

2.2 準(zhǔn)確度評估結(jié)果

通過t檢驗，在置信限P=0.05情況下，t臨界值為2.06，超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）檢測結(jié)果均值為6.76 ng/ml，羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）檢測結(jié)果均值為6.35 ng/ml，兩種檢測方法的百分偏倚為6.42%，＜10%，與廠商的聲明相符。

2.3 相關(guān)性分析結(jié)果

兩種檢測方法的檢測結(jié)果回歸方程為：y=0.9777x+0.3365，r=0.987＞0.975，表明在檢測范圍內(nèi)兩種檢測方法的相關(guān)性良好，擬合曲線方程見圖1。

2.4 一致性判斷

使用Bland-Altman散點圖進行分析，在檢測范圍內(nèi)，兩種方法的差值偏倚呈現(xiàn)均勻分布，由圖2可以看出共有3個點超出±1.96SD范圍，比例為2.73%，表明兩種方法具有良好的一致性。

采用四格表法計算兩種方法的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、約登指數(shù)分別為96.36%、94.55%、94.64%、96.30%、0.91，見表2。

圖1 兩種方法檢測結(jié)果的線性相關(guān)

圖2 兩種檢測方法的Bland-Altman散點

表2 試驗試劑與參照試劑比較（例）

3 討論

新生兒肺炎為新生兒的常見疾病和多發(fā)病癥，主要由細菌、病毒、衣原體及支原體等引起，以細菌較為常見，是引起新生兒死亡的一個重要原因，據(jù)研究報道，新生兒感染性肺炎的病死率為5%～20%[4]?？紤]新生兒感染初期臨床表現(xiàn)較隱蔽，少數(shù)表現(xiàn)有咳嗽、咳痰、體溫升高等現(xiàn)象，所以容易被家屬忽視，據(jù)調(diào)查，全世界每年有200萬例以上新生兒死于肺炎，其中在中國西部農(nóng)村新生兒病死率調(diào)查研究中，34.5%的新生兒死于肺炎[5]。因此，新生兒肺炎需盡早確診并及時治療，以確保新生兒生命安全。對于此類患兒展開治療時，針對不同的發(fā)病原因，需采用不同的方式，早期診斷中對感染病原菌進行明確極為關(guān)鍵。作為一個敏感指標(biāo)，PCT與新生兒肺炎病情嚴(yán)重程度及病原菌感染類型有一定關(guān)系，可用于膿毒血癥的早期診斷中[6-8]。

目前行業(yè)內(nèi)對PCT進行檢測采用電化學(xué)發(fā)光法口碑較好，其中羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法），其準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、特異度等各項性能都得到廣泛認(rèn)可[9-10]。超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）使用時間分辨熒光免疫法，以免疫熒光分析儀為檢測平臺，檢測下限達到0.01 ng/ml。本研究選擇羅氏診斷公司生產(chǎn)的羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）與超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）兩種檢測方法進行系統(tǒng)性的比對分析，以羅氏電化學(xué)發(fā)光法作為參考方法，時間分辨免疫熒光法為試驗方法，對兩者的偏倚程度、相關(guān)性和一致性進行分析。

本研究結(jié)果顯示，超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）擁有良好的精密度，檢測結(jié)果的變異系數(shù)＜10%，能夠滿足臨床檢驗的要求；超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）與羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）之間存在一定的系統(tǒng)性誤差，其偏倚為6.42%，符合廠家的聲明；兩種檢測方法擁有較好的相關(guān)性（r=0.987）。Bland-Altman法可得出有2.73%的檢測結(jié)果超出了95%的置信區(qū)間，靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、約登指數(shù)分別為96.36%、94.55%、94.64%、96.30%、0.91，證明兩種方法一致性較好。

綜上所述，超敏PCT（PCT Plus）檢測試劑盒（免疫熒光干式定量法）具有良好的精密度，且與羅氏PCT檢測試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）的偏倚較小，兩種檢測方法相關(guān)性、一致性均良好，臨床上不同科室應(yīng)考慮自身需求選擇合適的檢測方法。