杜 婧,滕 婧,馬 卞,張奧鑫
華北電力大學(xué) 控制與計(jì)算機(jī)工程學(xué)院,北京102206
乳腺癌在我國(guó)女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤中排名第二,也是排名第六的惡性腫瘤致死原因[1]。中國(guó)女性的乳腺癌發(fā)病率和死亡率在近年來(lái)呈現(xiàn)出迅速增長(zhǎng)的趨勢(shì),且部分地區(qū)上升幅度顯著,增長(zhǎng)較快[2]。我國(guó)女性的乳腺癌死亡率持續(xù)上升的現(xiàn)象,與歐美國(guó)家的顯著下降趨勢(shì)呈現(xiàn)出明顯的對(duì)比[3]。為降低患者的死亡率,需要分析挑選出更為有效的治療方案,或是針對(duì)患者定制個(gè)性化治療方案,這都依賴于有效的預(yù)后分析以及對(duì)患者生存情況的預(yù)測(cè)。
在癌癥的預(yù)后影響因素的研究中,研究者們發(fā)現(xiàn)有多種因素影響患者的預(yù)后水平,可將它們大致分為以下三類:一是患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和遺傳學(xué)特征,如患者的發(fā)病年齡、是否攜帶乳腺癌易感基因等;二是疾病特征,如腫瘤的位置、大小、組織學(xué)分級(jí)情況等;三是治療方案,如化療、免疫治療等[4]。目前已有大量統(tǒng)計(jì)學(xué)方法針對(duì)上述因素進(jìn)行分析研究,以求量化判斷這些因素對(duì)于患者預(yù)后情況的影響[5-6]。
預(yù)后分析的首要步驟是就是要判斷哪些因素的影響最為顯著。在上述列舉的多種因素中,有些因素之間高度相關(guān),甚至冗余,無(wú)法提供更多的信息。由于對(duì)患者預(yù)后情況的跟蹤調(diào)查需要耗費(fèi)大量的時(shí)間、經(jīng)濟(jì)成本,因此建立生存預(yù)測(cè)模型的首要步驟是選取顯著的預(yù)測(cè)特征,使預(yù)測(cè)模型盡可能的簡(jiǎn)潔,即在得到幾乎相同信息量的前提下,選擇包含特征量最少的模型。目前,常用的特征選擇方法包括前向特征選擇、反向特征選擇,亦或是使用Cox回歸模型做單變量分析,選取影響權(quán)重較大的特征。本文在參考了大量文獻(xiàn),并比較了各種特征選擇方法之間的優(yōu)缺點(diǎn)后[7-8],選擇了常用的反向特征選擇方法,選取出最為顯著的因素進(jìn)行預(yù)后分析,其中LNR是最為顯著的疾病特征因素之一。
大量針對(duì)癌癥預(yù)后影響因素的研究表明,LNR是癌癥患者預(yù)后分析中最重要的特征之一,與患者預(yù)后的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)尤其相關(guān),且該項(xiàng)特征對(duì)于多種癌癥患者的預(yù)后生存率都有很好的預(yù)測(cè)效果。Cheng等人證明,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)比率是宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[9]。Smith等人利用LNR與其他影響因素,使用基于貝葉斯方法的經(jīng)典Cox模型,預(yù)測(cè)胰腺癌患者的預(yù)后生存率,得到了相較于其他同類研究更好的效果[4]。在針對(duì)乳腺癌患者的研究中,Wu等人使用經(jīng)典Cox回歸模型分析了中山大學(xué)癌癥中心1998年至2007年的2 591份病歷記錄后發(fā)現(xiàn),LNR水平較低的乳腺癌患者比LNR水平較高的患者有更高的總體生存率、無(wú)病生存率以及無(wú)轉(zhuǎn)移生存率,并證明LNR是上述生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[10]。
在臨床上,LNR使用切片上檢測(cè)到的陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)除以觀察到的淋巴結(jié)總數(shù)。但檢測(cè)所得的LNR值可能與患者實(shí)際的總體LNR值有較大偏差。其中最主要的原因是檢測(cè)樣本中的淋巴結(jié)總數(shù)僅為局部觀測(cè)值。這導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)所得的LNR值與患者的實(shí)際總體LNR值出入較大。相對(duì)而言,在切片檢測(cè)過(guò)程中觀察到的淋巴結(jié)數(shù)量越多,得到的LNR值也相應(yīng)地越準(zhǔn)確。因此,根據(jù)檢測(cè)到的淋巴結(jié)總數(shù)與陽(yáng)性淋巴結(jié)數(shù)量計(jì)算得到的LNR檢測(cè)值應(yīng)當(dāng)看作是患者真實(shí)LNR值的一個(gè)估計(jì)[4]。為優(yōu)化LNR的估計(jì)精度,本研究引入其他相關(guān)的病理特征,基于邏輯回歸(Logistic Regression)算法對(duì)LNR值進(jìn)行估計(jì),以期得到更接近患者真實(shí)總體LNR值的估計(jì)。本文仿真部分分別比較了基于邏輯回歸的LNR總體估計(jì)值與LNR局部切檢值對(duì)預(yù)后分析的影響。
如前所述,基于邏輯回歸模型得到的LNR總體估計(jì)值作為重要的臨床特征用于預(yù)后分析。目前,預(yù)后分析中廣泛采用經(jīng)典Cox回歸模型預(yù)測(cè)患者的生存率。該模型由英國(guó)統(tǒng)計(jì)學(xué)家Cox于1972年提出[11],其基本思想是將患者的生存率表示為風(fēng)險(xiǎn)函數(shù),即個(gè)體在生存過(guò)程中某一單位時(shí)間內(nèi)的死亡概率。Cox回歸模型屬于半?yún)?shù)的生存分析模型[12],與參數(shù)模型相比[13],其條件更為寬松,不需要生存數(shù)據(jù)預(yù)先滿足某種特定的分布;與參數(shù)模型相比,其檢驗(yàn)效能相對(duì)更高,可在未知數(shù)據(jù)的生存分布和基準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)的情況下,同時(shí)得到生存函數(shù)和基準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)。正是這些優(yōu)勢(shì),使得經(jīng)典Cox回歸模型在提出后的幾十年時(shí)間里頗受青睞,得到了廣泛的應(yīng)用。然而,在經(jīng)典Cox回歸模型中,協(xié)變量系數(shù)始終為常數(shù),無(wú)法反映隨時(shí)間的推移,預(yù)測(cè)變量對(duì)生存率所產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)影響。本研究基于貝葉斯方法構(gòu)建動(dòng)態(tài)Cox回歸模型[14],通過(guò)結(jié)合各參數(shù)的先驗(yàn)知識(shí)與觀測(cè)數(shù)據(jù)共同推斷參數(shù)的后驗(yàn)分布并持續(xù)更新,從而更好地捕捉不同時(shí)間區(qū)間中,預(yù)測(cè)變量對(duì)生存率的影響。
本研究總體流程框圖如圖1所示。首先從SEER(The Surveillance,Epidemiology,and End Results)中選取合適的患者樣本。選取條件為:女性乳腺癌患者;確診年齡在20歲到80歲之間;確診時(shí)間在2010年至2012年間;檢測(cè)到的淋巴結(jié)個(gè)數(shù)不小于1。另外考慮到不同的乳腺癌子類型患者之間的總體生存率有所差異[15],在此僅選取“Her2-/HR+”子類型的乳腺癌患者。篩選后共得到4 402個(gè)樣本。樣本的簡(jiǎn)要描述如表1所示。之后進(jìn)行反向特征選擇,挑選出用于估計(jì)LNR的特征,其余特征用于生存分析。根據(jù)赤池信息準(zhǔn)則(Akaike Information Criterion,AIC)指標(biāo)選取得到的與LNR相關(guān)性最大的特征分別為:淋巴結(jié)總數(shù)、陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)、M分期和N分期,然后將它們作為輸入訓(xùn)練邏輯回歸模型并估計(jì)LNR值。在預(yù)后分析部分,使用LNR的總體估計(jì)值,以及樣本中的其他特征,包括患者的年齡、腫瘤大小和T分期,基于貝葉斯方法構(gòu)建動(dòng)態(tài)Cox回歸模型以預(yù)測(cè)患者生存率。
圖1 整體流程圖
臨床應(yīng)用的LNR值是用切片上檢測(cè)到的陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)除以淋巴結(jié)總數(shù)計(jì)算所得。但實(shí)際情況下,這樣得到的LNR局部切檢值難以準(zhǔn)確地反映患者的總體LNR值。因此本研究綜合考慮患者其他相關(guān)的病理信息與LNR的關(guān)聯(lián),使用邏輯回歸模型估計(jì)患者的總體LNR值。首先,將LNR局部切檢值作為響應(yīng)特征,通過(guò)反向特征選擇篩選出相關(guān)病理特征作為輸入特征,再通過(guò)擬合邏輯回歸模型,計(jì)算協(xié)變量系數(shù),最后根據(jù)相應(yīng)的協(xié)變量系數(shù)估計(jì)患者總體LNR值。
表1 數(shù)據(jù)集樣本特征
邏輯回歸模型是一種常用的機(jī)器學(xué)習(xí)模型,其形式較為簡(jiǎn)單直觀,且具有良好的可解釋性。本文中利用邏輯回歸模型的值域在[0,1]范圍內(nèi)進(jìn)行回歸分析,估計(jì)具有相同值域的LNR總體值。本研究中,邏輯回歸模型的基本形式如下:對(duì)于樣本i,其響應(yīng)值,即LNR值為yi;經(jīng)過(guò)反向特征選擇篩選出4個(gè)與LNR相關(guān)的病理特征作為作為輸入特征,分別為陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)X1、淋巴結(jié)總數(shù)X2、M分期X3和N分期X4。根據(jù)邏輯回歸模型,樣本i的LNR值yi與其對(duì)應(yīng)的預(yù)測(cè)特征Xi的關(guān)系為:其中,β0為常數(shù)項(xiàng),β1,β2,β3,β4是每個(gè)預(yù)測(cè)特征對(duì)應(yīng)的協(xié)變量系數(shù),β是上述協(xié)變量系數(shù)組成的向量。Xi,1,Xi,2,Xi,3,Xi,4是樣本i的4個(gè)預(yù)測(cè)特征值,Xi是上述預(yù)測(cè)特征值組成的向量。采用訓(xùn)練集數(shù)據(jù)擬合邏輯回歸模型后,得到所有預(yù)測(cè)特征對(duì)應(yīng)的協(xié)變量系數(shù)β。之后,根據(jù)系數(shù)β和預(yù)測(cè)特征Xi,再代入式(1)可得LNR的總體估計(jì)值。
經(jīng)典Cox回歸模型的基本形式為:
在經(jīng)典Cox回歸模型中,不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的協(xié)變量系數(shù)βs保持不變。但實(shí)際應(yīng)用中,各預(yù)測(cè)變量對(duì)患者生存率的影響往往是隨時(shí)間變化的。為此,基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)回歸模型將不同時(shí)間點(diǎn)的協(xié)變量系數(shù)表示為βs(t),并基于貝葉斯方法,結(jié)合生存數(shù)據(jù)求取其后驗(yàn)分布。該方法由Wang等人提出,本文僅作簡(jiǎn)要表述。
基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型的基本形式為:
其中,Z是所有樣本的預(yù)測(cè)變量組成的矩陣,λ0(t)表示t時(shí)刻的基準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn),βs(t)表示t時(shí)刻的協(xié)變量系數(shù)向量。在該動(dòng)態(tài)模型中,λ0(t)和βs(t)均假設(shè)為左連續(xù)的階躍函數(shù)。模型中,需要估計(jì)基準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)λ0(t)和協(xié)變量系數(shù)向量βs(t)具體的階躍次數(shù)和相應(yīng)的階躍值與階躍時(shí)間點(diǎn),以達(dá)到動(dòng)態(tài)估計(jì)參數(shù)的目的。令:Θ=,該集合包含了所有的未知參數(shù),使用θ(t)來(lái)指代lnλ0(t)或βs(t)中的一個(gè)分量。
所有的未知參數(shù)都根據(jù)數(shù)據(jù)樣本估計(jì)得到。對(duì)于樣本i(i=1,2,…,n),令Ti表示事件“患者死亡”發(fā)生的時(shí)間。若Ti已知,則該樣本數(shù)據(jù)為完整生存數(shù)據(jù)。若僅能確定Ti∈[Li,Ri),且Ri為有限值,則該樣本數(shù)據(jù)為區(qū)間刪失數(shù)據(jù);若Ri=∞,則該樣本數(shù)據(jù)為右刪失數(shù)據(jù)。同時(shí),根據(jù)所有樣本的Ti構(gòu)造由等距點(diǎn)組成的時(shí)間網(wǎng)格,G={0=s0<s1<…<sK<sK+1=∞}。令:Δk=sksk-1表示第k個(gè)網(wǎng)格區(qū)間的寬度,并計(jì):λk=λ0(sk),βk=β(sk)。最后,令:Dobs={ }Ti∈[Li,Ri),Zi;i=1,2,…,n,該集合表示所有樣本的生存信息,以及與生存分析有關(guān)的預(yù)測(cè)變量的信息。
在動(dòng)態(tài)模型中,采用貝葉斯方法用于估計(jì)模型的參數(shù)。貝葉斯方法的基本形式為:
該式表示,參數(shù)的后驗(yàn)分布正比于參數(shù)的聯(lián)合先驗(yàn)分布p(Θ)與樣本似然L(Z|Θ)的乘積。其中,樣本似然L(Z|Θ)可表示為:
式中,n為樣本總數(shù)。其中任一樣本i的似然貢獻(xiàn)為:
其中:
上式中,I(·)為指示函數(shù),若·為真,則I(·)=1,否則I(·)=0。
前文提到,在基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型中,參數(shù)Θ是根據(jù)生存數(shù)據(jù)動(dòng)態(tài)階躍變化的。且變化的次數(shù)與變化程度需經(jīng)貝葉斯方法推理計(jì)算。假設(shè)參數(shù)的階躍次數(shù)為J,且J服從從1到K的離散的均勻分布。對(duì)于固定的J,階躍的時(shí)間點(diǎn)0<τ1<τ2<…<τJ=sK是從時(shí)間網(wǎng)格集合G中隨機(jī)選取的。對(duì)于參數(shù)集合Θ中的所有分量,其先驗(yàn)假設(shè)為:
其中,ω服從參數(shù)為α和η的逆伽馬分布,是模型中的超參數(shù)。參數(shù)c、α和η用于估計(jì)不同時(shí)間區(qū)間的參數(shù),且都是預(yù)先定義的常數(shù)。每個(gè)時(shí)間區(qū)間的協(xié)變量系數(shù)的先驗(yàn)分布都與前一個(gè)時(shí)間區(qū)間該參數(shù)的先驗(yàn)分布假設(shè)相關(guān)。如圖2所示是參數(shù)的先驗(yàn)分布假設(shè)間的關(guān)系。圓框中的參數(shù)是預(yù)先定義的常數(shù),方框中的參數(shù)僅知其服從的特定分布,具體數(shù)值需要估計(jì)。
圖2 參數(shù)間的先驗(yàn)關(guān)系
根據(jù)前文所述的貝葉斯框架和參數(shù)的動(dòng)態(tài)先驗(yàn)關(guān)系,θ(t)和ω的聯(lián)合先驗(yàn)分布,π(θ(t),ω)正比于下式:
本研究運(yùn)用R Studio 1.0.143進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析,使用的R語(yǔ)言版本為3.4.4。在SEER中篩選得到了4 402個(gè)樣本。在實(shí)際仿真中,將這些樣本隨機(jī)劃分為訓(xùn)練集與測(cè)試集。其中訓(xùn)練集包含3 000個(gè)樣本,測(cè)試集包含剩余的1 402個(gè)樣本。
經(jīng)過(guò)反向特征選擇后,共有4個(gè)特征用于估計(jì)LNR值,分別是陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)、淋巴結(jié)總數(shù)、M分期和N分期。使用這4個(gè)特征時(shí),邏輯回歸模型有最低的AIC值1968。AIC值低說(shuō)明該模型用較少的參數(shù)獲得了足夠的擬合度。邏輯回歸模訓(xùn)練后的部分預(yù)測(cè)特征的協(xié)變量系數(shù)列于表2中。從表中可以看出,淋巴結(jié)總數(shù)和陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)這兩個(gè)特征的標(biāo)準(zhǔn)差最低,說(shuō)明這兩個(gè)特征與LNR的關(guān)系最為顯著。
表2 部分預(yù)測(cè)變量的系數(shù)
為了判斷是否出現(xiàn)過(guò)擬合問(wèn)題,分別計(jì)算了訓(xùn)練集和測(cè)試集數(shù)據(jù)擬合邏輯幾率回歸模型后的MSE。經(jīng)過(guò)計(jì)算,訓(xùn)練集數(shù)據(jù)擬合模型后的MSE值為0.018,測(cè)試集數(shù)據(jù)的MSE值為0.020。這兩者在同一數(shù)量級(jí)上且差距較小。據(jù)此判斷,訓(xùn)練后的邏輯幾率回歸模型沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)擬合現(xiàn)象。在后續(xù)的計(jì)算過(guò)程中,使用該模型估計(jì)的LNR值是可行的。
為了檢驗(yàn)LNR的總體估計(jì)值對(duì)患者生存情況的預(yù)測(cè)效果,在生存分析部分,本研究分別使用了兩個(gè)數(shù)據(jù)集。兩者均包含患者的生存信息、T和N分期信息、確診年齡和腫瘤大小;唯一不同之處在于,數(shù)據(jù)集1使用LNR局部切檢值,數(shù)據(jù)集2使用LNR總體估計(jì)值。再者,為驗(yàn)證基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型有能夠更好地反映預(yù)測(cè)變量在不同時(shí)間階段對(duì)患者生存率的影響,本文分別使用了經(jīng)典Cox回歸模型和動(dòng)態(tài)Cox回歸模型。因此,不同的數(shù)據(jù)集與不同的生存分析模型兩兩組合,共產(chǎn)生了4個(gè)模型模型以比較它們之間的結(jié)果差異。4個(gè)模型的主要特點(diǎn)如表3所示。對(duì)所有模型均設(shè)置500次吉布斯采樣。
表3 模型特點(diǎn)
本文中使用對(duì)數(shù)偽邊際似然(Log Pseudo Marginal Likelihood,LPML)作為生存分析模型的評(píng)價(jià)指標(biāo)。對(duì)模型來(lái)說(shuō),該指標(biāo)數(shù)值越大,說(shuō)明樣本越支持該模型。4個(gè)模型的LPML值分別是:-710.25,-708.79,-701.14以及-698.49。正如表3所示,相比于Model_1,Model_2的LPML值較大。同樣,Model_4的LPML值大于Model_3的LPML值。根據(jù)這一數(shù)值比較,可以看出,使用LNR總體估計(jì)值有相對(duì)較好的模型擬合效果。另外,Model_3和Model_4的LPML值均高于Model_1和Model_2的LPML值。這一結(jié)果說(shuō)明基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型相較于經(jīng)典Cox回歸模型,能夠更好地?cái)M合生存數(shù)據(jù)。
為了更直觀判斷模型的效果,繪制了4個(gè)模型對(duì)訓(xùn)練集和測(cè)試集數(shù)據(jù)分析后得到的總體生存率-時(shí)間曲線。與之相比較的是利用Kaplan-Meier方法(后文簡(jiǎn)稱KM方法)繪制的患者總體生存率-時(shí)間曲線。與KM曲線更加接近,則說(shuō)明該模型的預(yù)測(cè)效果相對(duì)更好。圖3中所示的是4個(gè)模型所預(yù)測(cè)的訓(xùn)練集和測(cè)試集數(shù)據(jù)的生存率-時(shí)間曲線。從圖中可看出,使用經(jīng)典Cox回歸模型的Model_1和Model_2在訓(xùn)練集和測(cè)試集上的表現(xiàn)均遜色于使用動(dòng)態(tài)Cox模型的Model_3和Model_4,使用動(dòng)態(tài)Cox模型預(yù)測(cè)得到的總體生存率-時(shí)間曲線更接近實(shí)際情況。另外,Model_3與Model_4在訓(xùn)練集和測(cè)試集上得到的曲線較為接近,但仍然可以看出,Model_4曲線有相對(duì)較好的預(yù)測(cè)效果,并且Model_4有更低的LPML值。這說(shuō)明,使用LNR的總體估計(jì)值能夠更為準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)生存率-時(shí)間特性曲線。
本文指出了乳腺癌預(yù)后分析中存在的兩個(gè)重要問(wèn)題提出了相應(yīng)的解決方案:一是實(shí)驗(yàn)檢測(cè)所得的LNR值受觀測(cè)誤差影響較大,對(duì)后續(xù)的生存分析過(guò)程產(chǎn)生偏差的;二是經(jīng)典的Cox回歸模型無(wú)法捕捉到不同時(shí)間區(qū)間內(nèi),癌癥相關(guān)因素對(duì)于患者生存率的動(dòng)態(tài)影響。針對(duì)第一個(gè)問(wèn)題,本研究首先使用邏輯回歸估計(jì)LNR總體值,之后使用LNR總體估計(jì)值與其他預(yù)測(cè)變量信息以及生存數(shù)據(jù)擬合基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型。與使用LNR局部切檢值相比,使用估計(jì)值能夠降低較小的淋巴結(jié)檢測(cè)總數(shù)對(duì)于LNR值的影響,以及患者間個(gè)體差異對(duì)于LNR的影響。針對(duì)第二個(gè)問(wèn)題,使用基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸模型能夠更好地捕捉不同時(shí)間階段,預(yù)測(cè)特征對(duì)于患者生存率的影響;同時(shí),在估計(jì)系數(shù)的過(guò)程中,使用了能夠結(jié)合參數(shù)先驗(yàn)分布的貝葉斯方法,這使得對(duì)于參數(shù)的預(yù)測(cè)更為準(zhǔn)確。
圖3 預(yù)測(cè)的訓(xùn)練集和測(cè)試集生存率-時(shí)間曲線
本文中所使用的數(shù)據(jù)集是SEER中的部分女性乳腺癌患者數(shù)據(jù),算法實(shí)現(xiàn)使用R語(yǔ)言。為了驗(yàn)證文中所述方法的性能,使用LPML值作為衡量模型性能的指標(biāo)。仿真結(jié)果表明,使用LNR估計(jì)值和基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox回歸方法的模型有最高的LPML值,這說(shuō)明數(shù)據(jù)最為支持該模型。另外,為了驗(yàn)證模型的預(yù)測(cè)效果,使用KM方法計(jì)算測(cè)試集數(shù)據(jù)的生存率-時(shí)間曲線,并以此作為基準(zhǔn),與使用邏輯回歸模型估計(jì)LNR和基于貝葉斯方法的動(dòng)態(tài)Cox生存分析模型所預(yù)測(cè)的生存率-時(shí)間曲線進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,兩個(gè)曲線有較多重合之處,且趨勢(shì)一致。在未來(lái)的研究中,可以繼續(xù)探索LNR這一指標(biāo)對(duì)于癌癥患者生存率的預(yù)測(cè)效果,并嘗試使用其他的機(jī)器學(xué)習(xí)方法,如決策樹、隨機(jī)森林等,來(lái)估計(jì)LNR值。