2014一2018年江蘇省及上海市部分機構(gòu)普通級實驗犬質(zhì)量檢測情況

盛雅潔，肖春蘭，趙麗娟，周正宇

（蘇州大學實驗動物中心，蘇州大學衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所，蘇州 215123）

實驗動物的質(zhì)量直接影響實驗數(shù)據(jù)的準確性，甚至影響科研人員的健康[1]。由于實驗犬多采用群體飼養(yǎng)，更加容易感染各種微生物及寄生蟲。一旦被感染，除影響犬的健康外，還會威脅到相關(guān)工作人員的健康，特別是狂犬病病毒、布魯桿菌等感染引起的人獸共患病[2-4]對人的危害性極大。

微生物學、寄生蟲學質(zhì)量控制是衡量實驗動物質(zhì)量的主要標準之一[5]。按照普通級實驗犬寄生蟲學和微生物學控制標準[6-7]，本文結(jié)合本檢測機構(gòu)2014—2018年接受江蘇省及上海市部分機構(gòu)委托檢測和行政監(jiān)督抽查的結(jié)果，就普通級實驗犬的檢測方法和質(zhì)量控制現(xiàn)狀進行總結(jié)，以期為普通級實驗犬的生產(chǎn)及使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

成年普通級實驗犬，主要品種為比格犬，性別不限，來自江蘇省及上海市具有普通級實驗犬生產(chǎn)許可證的部分單位，共計 21 批次，每批次6只或6個樣本。其中監(jiān)督抽查10批次，委托檢測11批次。監(jiān)督抽查樣品均為活體動物，委托檢測樣品部分批次為活體動物，還有部分批次為血清、肛拭子或毛發(fā)等樣品。

1.2 主要試劑與儀器

犬瘟熱病毒、犬肝炎病毒和犬細小病毒抗體檢測試劑盒均購自美國XpressBio公司；狂犬病病毒抗體檢測試劑盒購自法國Synbiotics公司；犬布魯桿菌檢測試劑盒購自北京杰輝博高生物技術(shù)有限公司；ID 32E腸桿菌科和其他非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌鑒定試劑盒購自法國梅里埃生物公司；弓形蟲抗體檢測試劑盒購自法國ID-VET公司；DHL培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基購自青島日水生物技術(shù)有限公司；血瓊脂培養(yǎng)基購自常德比克曼生物科技有限公司。

ATB半自動微生物鑒定儀為法國梅里埃公司產(chǎn)品；酶標儀（型號Multiskan MK3）為美國賽默飛公司產(chǎn)品；體視顯微鏡為日本尼康公司產(chǎn)品（型號SMZ745T）。

1.3 檢測方法

1.3.1 樣本采集 待檢實驗犬編號后進行外觀檢查，然后對不同病原體分別進行取樣，包括皮膚、毛發(fā)、血液以及新鮮糞便或者肛拭子，采集方法按照實驗動物國家標準進行。

1.3.2 檢測指標及方法 檢測指標：病原菌檢測包括沙門菌、皮膚病原真菌以及布魯桿菌；病毒檢測包括狂犬病病毒、犬細小病毒、傳染性犬肝炎病毒以及犬瘟熱病毒；寄生蟲學檢測包括體外寄生蟲（節(jié)肢動物）以及弓形蟲。

體外寄生蟲檢測：首先進行外觀檢查，尤其要注意耳根、頸后、眼周、腹股溝等易感部位，然后直接拔毛進行取樣，顯微鏡觀察結(jié)合肉眼觀察是否有體外寄生蟲。

沙門菌和病原真菌按常規(guī)檢測。

布魯桿菌、狂犬病病毒、犬細小病毒、傳染性犬肝炎病毒、犬瘟熱病毒及弓形蟲檢測：采血后分離血清，按ELISA試劑盒說明書檢測。

2 結(jié)果

共檢測21批次，總體合格率72.8%，其中總體免疫合格率77.3%。

2.1 監(jiān)督抽查不合格情況

監(jiān)督抽查的10個批次中，共有4個批次檢出不合格項目。除1個批次發(fā)現(xiàn)1例弓形蟲抗體陽性外，其他3個批次均為免疫不合格，分別為：1批次狂犬病病毒抗體群體免疫合格率為16.7%，犬瘟熱病毒抗體群體免疫合格率為33.3%；另1批次狂犬病病毒抗體免疫合格率僅為16.7%，犬瘟熱病毒抗體免疫合格率為66.7%；還有1批次犬肝炎病毒抗體群體免疫合格率為50.0%。此外，有1個批次犬中有1例犬瘟熱病毒抗體不合格，但是其群體免疫合格率達到了70.0%，因此群體免疫合格，符合國家標準要求。

2.2 委托檢測不合格情況

委托檢測的11個批次中，有2個批次檢出不合格項目，均為狂犬病病毒抗體免疫不合格，其群體免疫合格率分別為50.0%和66.7%。1批次犬中有1例犬肝炎病毒抗體不合格，但其群體免疫合格率達到了70%，符合國家標準要求。

2.3 不合格情況處理

對檢測的所有批次實驗犬均出具了檢測報告。對于檢測不合格動物，如果是委托檢測，根據(jù)檢測結(jié)果建議生產(chǎn)單位重新進行疫苗接種或者驅(qū)蟲等處理后再次進行委托檢測。如果是監(jiān)督抽查，將不合格結(jié)果直接上報給相關(guān)單位。

3 討論

免疫接種是有效預防控制動物烈性傳染病的可靠方法，當易感動物免疫覆蓋率達到70%以上時，即可有效抑制疾病的傳播[8]。我國國家標準[9-12]規(guī)定，普通級實驗犬均需進行狂犬病病毒、犬細小病毒、傳染性犬肝炎病毒及犬瘟熱病毒等免疫接種，經(jīng)檢測各項病毒抗體陽性方為合格，犬群體免疫抗體合格率達到70%以上則可判斷為該犬群免疫合格。根據(jù)2014—2018年監(jiān)督抽查與委托檢測的結(jié)果，江蘇省及上海市部分機構(gòu)實驗犬的總體免疫合格率為77.3%，其中監(jiān)督抽查的群體免疫合格率為70.0%，委托檢測則為81.8%。另外監(jiān)督抽查的1個批次中發(fā)現(xiàn)1例犬瘟熱病毒抗體水平不合格；委托檢測的1個批次中發(fā)現(xiàn)1例犬肝炎病毒抗體不合格，但是這兩個批次的群體免疫抗體合格率均超過70%，群體免疫合格。免疫接種的效果和疫苗質(zhì)量以及免疫接種的方案有很大關(guān)系[13]。本研究發(fā)現(xiàn)有2家單位的實驗犬在第一次監(jiān)督抽查中符合國家標準要求，但是在第二次監(jiān)督抽查時，狂犬病病毒抗體與犬瘟熱病毒抗體群體免疫合格率均未達到70%。

寄生蟲感染是影響實驗動物質(zhì)量的重要因素。普通環(huán)境與外界直接相通，因此普通動物感染寄生蟲的概率更高。根據(jù)我們的檢測，21批次普通級實驗犬寄生蟲總體感染率為4.76%，其中監(jiān)督抽查寄生蟲檢測的總體合格率為90%；委托檢測為100%合格。監(jiān)督抽查中僅1批次1只實驗犬檢出弓形蟲陽性。細菌學質(zhì)量是實驗動物微生物學質(zhì)量的重要組成部分。在所有21批次普通級犬樣品中，所有需要檢測的細菌培養(yǎng)結(jié)果皆為陰性。

統(tǒng)計表明，21批次普通級實驗犬的總體合格率為72.8%，其中監(jiān)督抽查總體合格率為60.0%，委托檢測為81.8%。委托檢測一般是生產(chǎn)單位的自主行為，多會根據(jù)各自的免疫方案和動物種群選擇性送樣，而監(jiān)督抽查的采樣時間和樣品選擇有很大的隨機性。此外，委托檢測只對送檢樣品負責，檢測機構(gòu)無法了解樣品的真實來源。為保證實驗犬的質(zhì)量，除生產(chǎn)單位的委托檢測外，還需要政府加強監(jiān)管，定期開展監(jiān)督抽查，從源頭確保實驗犬的質(zhì)量。

現(xiàn)行國家標準規(guī)定的沙門菌檢測的生化反應(yīng)方法較為繁瑣，目前很多檢驗檢疫機構(gòu)采用了全自動或半自動微生物鑒定儀，雖然前期儀器成本較為昂貴，但可以更為方便、快捷、準確地檢測各種微生物。此外，PCR方法已廣泛運用于沙門菌、皮膚病原真菌、布魯桿菌、弓形蟲等實驗動物病原體的檢測[14-16]。國家標準規(guī)定的布魯桿菌檢測為血清學方法，雖然操作較為簡單，但由于其特異性相對較差，抗原制備比較困難。中國實驗動物學會發(fā)布了布魯桿菌PCR檢測方法的團體標準，可以更為準確地檢測布魯桿菌[17]?？袢〔《?、犬細小病毒、傳染性犬肝炎病毒以及犬瘟熱病毒的檢測方法為血清學方法，所有普通級實驗犬均需要免疫并通過檢測血清中病毒抗體水平來衡量免疫效果。此外，檢測方法和人員的能力差異等均可能會影響檢測結(jié)果，因此，所有檢測不合格項目均需要進行復檢[18]。

質(zhì)量檢測是保證實驗犬質(zhì)量的重要手段[19-20]，但加強飼養(yǎng)管理仍是提升實驗犬質(zhì)量的根本手段。實驗犬的飼養(yǎng)管理應(yīng)符合相關(guān)的操作規(guī)程，籠器具的清洗消毒應(yīng)當徹底，要嚴格防止外來動物與實驗犬相接觸，飼養(yǎng)室門口應(yīng)設(shè)置擋鼠板。新引進或者新購入的實驗犬，應(yīng)隔離飼養(yǎng)2~3周，經(jīng)隔離檢疫合格后方可與其他實驗犬一起飼養(yǎng)[21]。此外，還應(yīng)當根據(jù)實際情況進行疫苗接種、驅(qū)蟲等工作，防止外來病原體進入犬舍。

總體上看，江蘇省及上海市實驗犬生產(chǎn)單位的實驗犬質(zhì)量大多良好，但也應(yīng)加強對免疫接種方案和疫苗來源的管理，以及對飼養(yǎng)場周邊野生動物的防范，進一步提高實驗犬質(zhì)量。目前，市場上的實驗犬均為普通級，還沒有規(guī)?；腟PF級犬用于生產(chǎn)和使用，隨著生物醫(yī)學的發(fā)展，對實驗犬質(zhì)量的要求也會越來越高。對實驗犬的質(zhì)量進行科學化的控制是提高實驗犬質(zhì)量的重要途徑，是保證相關(guān)動物實驗準確性和可靠性的基礎(chǔ)，更是相關(guān)實驗操作人員健康的重要保障[22]。