一例病毒性腹瀉的診斷與防治

李 凡，趙坤坤，劉守川

（洛陽中科基因檢測診斷中心有限公司，河南 洛陽 471000）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic dianthea,PED）是由PEDV引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病[1]，以腹瀉和脫水為典型癥狀。一年四季均可發(fā)病，冬、春季節(jié)多發(fā)。不同日齡、性別和品種的豬均可感染，其中哺乳仔豬的發(fā)病率和死亡率最高，成年豬癥狀較輕。臨床上引起仔豬腹瀉的原因有很多，病毒病、細(xì)菌病、寄生蟲病、營養(yǎng)性以及中毒等因素均可導(dǎo)致豬腹瀉的發(fā)生[2]，其中病毒病的病原主要包括豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒（PoRV）和δ冠狀病毒（PDCoV）。由于PEDV的臨床癥狀與其它病毒性腹瀉類似，臨床和病理變化診斷不能有效地區(qū)分，因此需要借助實(shí)驗室診斷技術(shù)進(jìn)行確診，以進(jìn)行針對性地治療和防控。

1 發(fā)病情況

2018年3月初，河南省安陽市林州市某規(guī)?；i場（存欄母豬120頭左右）部分欄舍暴發(fā)仔豬腹瀉，7日齡仔豬出現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉和脫水癥狀，排出腥臭味灰色或黃色帶有氣泡的糞便，夾有大量未消化的凝乳塊，精神沉郁，且死亡率高于80%。養(yǎng)殖戶使用抗生素進(jìn)行治療，未見好轉(zhuǎn)。該豬場保育豬和肥育豬等豬群未出現(xiàn)明顯臨床癥狀，表明該豬場未發(fā)生豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病等繁殖障礙性傳染病。

2 臨床癥狀與病理變化

2.1 臨床癥狀

經(jīng)過臨床觀察，腹瀉豬為仔豬，臨床表現(xiàn)為：病豬消瘦，精神沉郁，眼窩下陷，拉灰色或黃色水便，腥臭；腹瀉前后嘔吐，嘔吐物為未消化的凝乳塊。病豬腹瀉3～4 d后死亡，嚴(yán)重時整窩死亡。

2.2 病理變化

對死亡和瀕死的仔豬進(jìn)行剖檢，表現(xiàn)為卡他性胃腸炎。胃腺區(qū)黏膜出血，胃內(nèi)充滿黃色或灰色液體，含有泡沫和未消化的凝乳塊。小腸膨脹，腸壁變薄，呈半透明狀，腸壁充血。腸系膜充血，腸系膜淋巴結(jié)水腫。其它實(shí)質(zhì)性器官無明顯病變。

鑒于豬群的發(fā)病特點(diǎn)、臨床癥狀與病理變化，筆者初步判斷該豬場的腹瀉可能是由豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒等腹瀉性病毒引起的。筆者將腹瀉樣品送至洛陽中科基因檢測診斷中心有限公司進(jìn)行病原診斷，以確診發(fā)病原因。

3 實(shí)驗室診斷

將3頭發(fā)病仔豬進(jìn)行無菌剖檢，取病變小腸剪碎后放入無菌試管內(nèi)，加適量無菌水充分研磨，4℃3 000 r/min離心3 min，取上清液按照全自動核酸提取儀說明書進(jìn)行核酸提取，采用RT-PCR技術(shù)分別檢測PEDV、TGEV、PoRV和PDCoV，結(jié)果樣品編號為180366的3份樣品均為PEDV陽性（圖1，A），TGEV、PoRV和PDCoV均為陰性。

將180366-1的小腸樣品進(jìn)行免疫組化試驗，結(jié)果為小腸的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色著染（圖2），為PEDV陽性，TGEV和PoRV均為陰性。該結(jié)果進(jìn)一步證明了是PEDV導(dǎo)致的仔豬腹瀉。

筆者將編號180366-1的S基因部分序列進(jìn)行擴(kuò)增和測序，并對測序結(jié)果進(jìn)行序列核苷酸同源性分析和遺傳進(jìn)化分析，以確定PEDV毒株是否為流行株。結(jié)果表明，該樣品在532 bp處有特異性擴(kuò)增條帶（圖1，B），與預(yù)期相符。該毒株與參考毒株序列（表1）的同源性為82.7%～98.2%（圖3），與XX的同源性最高，為98.2%；與CV777的同源性僅為82.7%。根據(jù)S基因構(gòu)建的進(jìn)化樹分為2個基因群，第一個基因群又分為3個基因亞群，第二個基因群又分為2個基因亞群（圖4）。180366-1屬于第1個基因群的第2亞群，為流行株，與HeN-NY-2016最相似。

表1 PEDV參考毒株信息

4 治療與防控

4.1 隔離、消毒

將患病豬群與其它健康豬群隔離，專人飼養(yǎng)，并對病豬進(jìn)行治療，若無法治愈，則進(jìn)行豬群撲殺并無害化處理。在全場范圍內(nèi)用消毒劑進(jìn)行消毒和衛(wèi)生清理，并且定期更換不同機(jī)制消毒劑，對地面、圈舍、用具、車輛等物品進(jìn)行消毒。

4.2 緊急注射疫苗

該豬場免疫的是TGEV-PEDV二聯(lián)疫苗，其中PEDV疫苗株為CV777毒株，而該豬場暴發(fā)的是流行株，二聯(lián)疫苗對豬群不能提供有效的保護(hù)，若豬群繼發(fā)其它疾病，則會使得免疫效果更差。另外，豬群在后期有可能還會再次發(fā)生PEDV引起的腹瀉。所以，我們選用武漢科前生物股份有限公司的產(chǎn)品—“科瀉寧”對豬群進(jìn)行緊急疫苗接種，它是豬傳染性胃腸炎和豬流行腹瀉二聯(lián)苗，PEDV疫苗株來源為AJ1102株，是基于PEDV流行株研發(fā)的疫苗，對PEDV流行株具有較好的防控效果。

4.3 防控措施

做好豬場的生物安全防控，嚴(yán)格控制人員進(jìn)出[3]。改善豬場衛(wèi)生，保持地面干燥，定期進(jìn)行通風(fēng)換氣，及時做好仔豬的保溫等工作。飼料和飲水要確認(rèn)無PEDV污染后才能進(jìn)行飼喂，飲水中可適量添加電解質(zhì)多維，保證飼料營養(yǎng)豐富，提高生豬免疫力和抵抗力。

通過以上免疫和防控措施，9 d后，豬場內(nèi)的腹瀉疫情得到了有效控制，仔豬的發(fā)病率和死亡率明顯降低。保育豬有少量發(fā)病且無死亡，其它豬群并未發(fā)病。

5 小結(jié)

腹瀉是養(yǎng)豬生產(chǎn)中常見的疾病之一，可造成哺乳仔豬大量死亡，各日齡豬均可發(fā)病。臨床上有多種原因可引起豬腹瀉，而豬流行性腹瀉等病毒病是引起腹瀉的重要病原之一。自2010年底，PED在我國大規(guī)模暴發(fā)，一直未能得到有效控制，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的危害[4-5]。PEDV病毒株，通?？煞譃橐呙缰?、經(jīng)典株和流行株，雖然豬場大多已經(jīng)免疫了TGEV-PEDV（CV777源）二聯(lián)疫苗，但豬場仍會暴發(fā)PEDV引起的腹瀉，并多為流行株引起的，說明二聯(lián)疫苗不能為現(xiàn)有的流行毒株提供有效的保護(hù)，原因是流行株與CV777疫苗株相比，發(fā)生了大量的基因突變[6]，同源性較低，免疫后不能產(chǎn)生保護(hù)性的抗體。所以，豬場可以選擇基于PEDV流行株研發(fā)的滅活苗或弱毒苗進(jìn)行免疫，定期對水樣和飼料等樣品進(jìn)行病原監(jiān)測，在發(fā)生腹瀉等癥狀后，需及時將病料送至實(shí)驗室進(jìn)行檢測和診斷，確定造成腹瀉的原因，并對癥治療，防止繼發(fā)感染。