A型豬塞內(nèi)卡病毒流行病學(xué)、致病性、診斷研究進(jìn)展

劉 存，劉 暢，劉 琪，王 靜，李秀博，崔尚金，梁 琳

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 海淀 100193；2.農(nóng)業(yè)部獸用藥物與獸醫(yī)生物技術(shù)北京科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，北京 海淀 100193）

A型塞內(nèi)卡病毒（Senecavirus A,SVA）又稱為塞內(nèi)卡山谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）是單股正鏈RNA病毒，屬小RNA病毒科塞內(nèi)卡病毒屬。該病毒能夠感染仔豬及母豬并造成仔豬死亡，其對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)效益具有重大的潛在威脅。2002年，在美國(guó)馬里蘭州蓋瑟斯堡，從PER.C6細(xì)胞系中首次分離出SVA，該分離株被命名為SVV-001[1]。之后的研究發(fā)現(xiàn)，SVV-001是一種有效地抗神經(jīng)內(nèi)分泌源性腫瘤的溶瘤病毒，這成為了學(xué)者關(guān)注點(diǎn)[2-4]。SVA自1988年即在美國(guó)的豬群中流行，但是加拿大和美國(guó)分別在2007年和2012年報(bào)道了塞內(nèi)卡病毒相關(guān)的豬水皰病病例[5-7]。2014年之前，可能因其低感染率而未得到廣泛研究，在此期間SVA的分子特征與其在豬群中的流行、傳播以及對(duì)豬的致病性等的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。然而，自2014年底以來(lái)，SVA在北美以外國(guó)家或地區(qū)豬群中暴發(fā)，同時(shí)北美地區(qū)也出現(xiàn)了新的病例，SVA感染的新生仔豬表現(xiàn)出了新的臨床癥狀[8-16]。目前，美國(guó)、加拿大、巴西、泰國(guó)、中國(guó)、哥倫比亞等國(guó)家豬群中檢測(cè)出SVA。SVA是感染豬的一種新病毒，其所致的臨床癥狀與其他致水皰病的疾病相似，影響豬的生產(chǎn)及仔豬的存活率，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)存在重大的潛在威脅。為了進(jìn)一步了解SVA的病原學(xué)特征和感染豬致病特性，本文就SVA的流行病學(xué)、致病性、診斷方法等方面進(jìn)行綜述。

1 SVA的發(fā)現(xiàn)和流行

SVA最初是于2002年在美國(guó)的馬里蘭州蓋瑟斯堡，由Neotropix公司實(shí)驗(yàn)室作為PER.C6細(xì)胞系的污染物分離得到的，已確實(shí)該病毒是通過(guò)被污染的牛血清或者豬胰酶被引入其他細(xì)胞系中的[1]。首株SVA分離毒株被命名為SVV-001。最初研究發(fā)現(xiàn)，SVV-001對(duì)人和動(dòng)物沒(méi)有致病性，也無(wú)證據(jù)表明其與任何有害的疾病有關(guān)系[2]。然而，加拿大和美國(guó)分別在2007年和2012年報(bào)道的豬水皰病病例提供了塞內(nèi)卡病毒可能與豬水皰病有關(guān)的證據(jù)[5，7]。

在2002年于美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)并分離得到第一株SVA毒株。2014年以前，豬特發(fā)性水皰病的報(bào)道較少。2004年，美國(guó)印第安納州發(fā)生豬水皰病，排除了外來(lái)動(dòng)物疫病病原的感染，但其病因未明確[17]。2014年底以來(lái)，豬水皰病在巴西不同地區(qū)的斷奶仔豬和成年豬上暴發(fā)，且據(jù)統(tǒng)計(jì)，1～4日齡的新生仔豬死亡率升高[18-19]。巴西動(dòng)物衛(wèi)生進(jìn)行的官方檢測(cè)排除了口蹄疫病毒、豬瘟病毒和豬流行性腹瀉病毒等動(dòng)物疫病病原的感染，但由其他研究組從不同地區(qū)的發(fā)病豬中檢測(cè)出了SVA[17]。巴西一項(xiàng)10年（2007—2016）豬血清學(xué)回顧性研究表明，在2014年之前SVA并未在巴西豬群循環(huán)，而美國(guó)一項(xiàng)20年豬血清學(xué)回顧性研究表明，SVA在美國(guó)豬群中廣泛分布且一直在豬群中循環(huán)[5]。自2015年初，SVA相關(guān)的水皰病暴發(fā)增多，且發(fā)現(xiàn)SVA感染與新生仔豬的死亡率升高有關(guān)，特別是在母豬發(fā)生過(guò)水皰病的豬場(chǎng)[8-21]。2016年，加拿大、泰國(guó)、哥倫比亞的豬場(chǎng)受到了SVA感染的影響。

我國(guó)在2015年，首次從廣東地區(qū)發(fā)生豬特發(fā)性水皰病的豬場(chǎng)檢測(cè)到SVA，感染母豬發(fā)生水皰癥狀，感染仔豬出現(xiàn)急性死亡[11]。自2015年以來(lái)，SVA已在我國(guó)廣東、福建、河南、湖北等地區(qū)檢測(cè)出SVA。

由于自2015年初以來(lái)，關(guān)于SVA感染所致豬水皰病報(bào)道顯著增多，SVA的許多特征也得到了鑒定，因此2015年被認(rèn)為是SVA感染流行病學(xué)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。SVA感染所致疾病的發(fā)病率和死亡率在不同種豬上存在差異。在首次感染的豬場(chǎng)，依據(jù)豬的日齡和臨床癥狀，發(fā)病率介于4%～70%之間。斷奶仔豬發(fā)病率在0.5%～5%間，肥育豬發(fā)病率在5%～30%間，不同的地區(qū)間存在差異，母豬發(fā)病率高，可達(dá)70%～90%[9，18，22]。然而，這些感染豬的死亡率很低，約為0.2%，且恢復(fù)較快，臨床癥狀持續(xù)10～15 d[11]。對(duì)于新生仔豬，尤其是1～4日齡的新生仔豬發(fā)病率可達(dá)70%，死亡率在15%～30%之間[22]。目前尚無(wú)感染SVA的豬場(chǎng)再次暴發(fā)豬水皰病的報(bào)道。在傳播媒介上，據(jù)Joshi等調(diào)查，鼠、蒼蠅等均檢測(cè)到了SVA，其可能在SVA傳播中起重要作用[23]。發(fā)病豬通過(guò)口、鼻、糞便排毒。尿液也可能是排毒的途徑，帶有病毒的尿液成為豬場(chǎng)重要傳染源[24]。易感動(dòng)物與帶有水皰或水皰破裂發(fā)病豬的直接接觸可能是SVA重要的傳播途徑之一。SVA是否能夠垂直傳播尚需進(jìn)一步的研究。

2 SVA的分子生物學(xué)特性

分離之初，認(rèn)為SVV-001與心病毒屬成員相似，但是經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的深入分析，根據(jù)病毒特征和復(fù)制模式將其列入小RNA病毒科并將其歸入新的病毒屬—塞內(nèi)卡病毒屬。目前，該屬僅有代表種一個(gè)成員。

SVA具有典型的小RNA病毒的L434結(jié)構(gòu)基因組?；蚪M大小約7 200 nt，包括Vpg、666 bp 5'UTR、編碼2180氨基酸的ORF、71 bp 3'UTR和Poly(A)Trailer。其5'UTR區(qū)域具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)，而其406～625 bp區(qū)域丙型肝炎病毒的同源性達(dá)57.3%，這表明SVA核糖體結(jié)合位點(diǎn)為Ⅳ型[25]。SVA病毒基因組特征與心病毒屬的非常相似，尤其是P1、2C、3C、3D，其2B、3A、核糖體結(jié)合位點(diǎn)類型與心病毒屬的不同。然而，SVA的2A、2B、3A、3B與其他小RNA病毒的2A、2B、3A、3B存在明顯差異[5]。

3 SVA的致病性

目前，僅有少數(shù)關(guān)于SVA試驗(yàn)性感染豬的研究。臨床上SVA感染豬表現(xiàn)的臨床癥狀主要為肌肉無(wú)力、嗜睡、跛足、腹瀉，在鼻部和蹄部冠狀帶出現(xiàn)充滿液體的水皰，破潰后形成潰瘍（圖1）。Joshi等和Montiel等分別用當(dāng)前SVA分離株感染9和16周齡的豬復(fù)制了SVA感染豬所致疾病[24，26]。在SVA致病性研究中，感染豬出現(xiàn)嗜睡、跛足和厭食等癥狀，在鼻部、唇部、蹄部冠狀帶及趾間出現(xiàn)水皰。SVA潛伏期為4～5 d；急性感染期，扁桃體是SVA復(fù)制的主要位置；病毒血癥約持續(xù)7 d，在第3天血液中病毒達(dá)到高峰。

4 SVA的檢測(cè)方法

目前，已有多種方法應(yīng)用于SVA的檢測(cè)，包括PCR方法、血清學(xué)方法、分子雜交技術(shù)等。PCR方法中普通PCR和熒光定量RT-PCR（qRT-PCR）均可有效地檢測(cè)SVA。qRT-PCR快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)，應(yīng)用于SVA的快速檢測(cè)、排毒檢測(cè)及病毒載量檢測(cè)中[26]。分子雜交技術(shù)中RNA原位雜交技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于SVA的快速檢測(cè)當(dāng)中。RNA原位雜交是利用雜交探針識(shí)別、靶向經(jīng)固定、包埋和制片的組織樣品中的SVA特異性序列，通過(guò)雜交信號(hào)判定SVA的有無(wú)。血清學(xué)方法中包括間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、間接免疫熒光和病毒中和試驗(yàn)等方法[27-30]。血清學(xué)的方法適于大規(guī)模的流行病學(xué)研究或監(jiān)測(cè)。

5 展望

SVA為小RNA病毒科成員，感染豬所表現(xiàn)的臨床癥狀與口蹄疫病毒、豬水皰病病毒、豬水皰疹病毒所致癥狀非常相似，需進(jìn)行鑒別診斷?？焖勹b別診斷對(duì)快速控制疫情、制定防控措施具有重要意義。SVA危害雖不及口蹄疫病毒，但其感染仔豬導(dǎo)致仔豬死亡率升高，造成經(jīng)濟(jì)損失，給養(yǎng)豬業(yè)高效綠色健康發(fā)展帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。SVA已在我國(guó)多個(gè)省份豬場(chǎng)檢測(cè)到，一方面需要對(duì)SVA進(jìn)行回顧性研究，對(duì)其進(jìn)行溯源；另一方面需要對(duì)其流行病學(xué)、免疫、快速診斷技術(shù)以及遺傳變異機(jī)制進(jìn)行深入研究，以為制定SVA防控方案提供理論依據(jù)。