鐵蛋白定量檢測試劑盒性能評價(jià)

沈宣辛，趙彥慶，陳麗娟，蔡愛華，李偉華

吉林省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 （吉林長春 130000）

目前，檢測血清中鐵蛋白的方法有放射免疫測定法、酶免疫測定法、免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法等。本研究采用了量子點(diǎn)熒光免疫發(fā)光法，以免疫層析結(jié)合雙抗體夾心法為原理。其中涉及的熒光微球，是指將熒光物質(zhì)通過化學(xué)鍵合法、物理吸附法、包埋法等方法吸附或包埋到粒子內(nèi)，形成直徑在納米至微米級范圍內(nèi)，被激發(fā)光源激發(fā)后發(fā)出熒光的固相球體。熒光微球是一種新型的功能性標(biāo)記材料，具有比表面積大、表面反應(yīng)能力強(qiáng)、吸附性強(qiáng)、凝集作用大等特點(diǎn)，并且具有穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)和高效的發(fā)光效率，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中起到重要作用[1]。

本研究討論的以量子點(diǎn)熒光免疫發(fā)光法為原理的鐵蛋白定量檢測試劑盒結(jié)合了量子點(diǎn)熒光微球的優(yōu)勢與免疫層析法操作簡單、檢測快速的特點(diǎn)，提高了檢測的靈敏度，還能根據(jù)熒光強(qiáng)度的大小確定待測物的含量[1]。

本研究將以量子點(diǎn)熒光免疫發(fā)光法為原理的鐵蛋白定量檢測試劑盒與干式熒光免疫分析儀組成一個(gè)分析系統(tǒng)，通過測定試劑盒的線性、準(zhǔn)確度、精密度、分析特異性，評價(jià)其性能。

1 儀器與方法

1.1 儀器

本研究所用干式熒光免疫分析儀及體外診斷試劑由吉林省愛諾德生物工程有限公司提供；體外診斷試劑名稱為鐵蛋白定量檢測試劑盒（量子點(diǎn)熒光免疫發(fā)光法），批號(hào)20170123；鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)，編號(hào)150540，批號(hào)150540-201602，規(guī)格790 ng/支。

1.2 方法

準(zhǔn)備好試劑盒和待測樣品，使用微量移液器吸取待測樣品100 μl，垂直滴入檢測卡的樣品孔中，加樣15 min后，將檢測卡置于干式熒光免疫分析儀，在鐵蛋白的檢測模式下進(jìn)行檢測，在儀器的顯示屏幕上讀取結(jié)果。

儀器的校準(zhǔn)采用多點(diǎn)校準(zhǔn)，使用中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用稀釋液（0.01 M PBS，pH7.2，含10%正常人血清） 進(jìn)行稀釋配制成5個(gè)濃度點(diǎn)，分析線性回歸，得到校準(zhǔn)曲線y=0.0071662x-0.031971，r2=0.99919。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 線性

使用廠家提供的線性高值（400 ng/ml），用稀釋液（0.01M PBS，pH7.2，含10%正常人血清） 進(jìn)行稀釋配制成6個(gè)濃度點(diǎn)（0、200、300、350、375、400 ng/ml），用試劑盒進(jìn)行測試，每個(gè)濃度點(diǎn)測試3次，將重復(fù)測試結(jié)果的平均值與稀釋比例進(jìn)行直線擬合，在1～400 ng/ml范圍內(nèi)得到線性方程y=394.092x+0.182，r=1.00，符合產(chǎn)品技術(shù)要求關(guān)于r≥0.99規(guī)定。

2.2 準(zhǔn)確度

用試劑盒測試中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別計(jì)算相對偏差，測試高值樣品（200 ng/ml），得到相對偏差結(jié)果為-1.7%、-2.8%、-6.8%，測試低值樣品（50 ng/ml），得到相對偏差結(jié)果為2.6%、-3.4%、-0.7%，符合產(chǎn)品技術(shù)要求關(guān)于測量結(jié)果的相對偏差不超過±15.0%的規(guī)定。

2.3 精密度

在滿足我單位質(zhì)量控制的前提下，用同一批號(hào)試劑盒測試高濃度（200 ng/ml）和低濃度（50 ng/ml）的樣品，每個(gè)樣品重復(fù)檢測20次，計(jì)算變異系數(shù)，批內(nèi)精密度結(jié)果為CV高值：2%，CV低值：4%。用3個(gè)批號(hào)試劑盒分別測試高濃度（200 ng/ml）和低濃度（50 ng/ml）的樣品，每個(gè)樣品重復(fù)檢測10次，計(jì)算3批試劑相對極差，批間精密度結(jié)果為R高值：1%，R低值：5%，符合產(chǎn)品技術(shù)要求關(guān)于批內(nèi)精密度變異系數(shù)CV應(yīng)不大于15%，批間相對極差R應(yīng)不大于20%的規(guī)定。

2.4 分析特異性

當(dāng)樣品中含有甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白時(shí)，可能會(huì)對結(jié)果產(chǎn)生干擾，在分析此試劑盒的特異性實(shí)驗(yàn)中，分別測試含有干擾物的質(zhì)控樣本和不含干擾物的質(zhì)控樣本。（1）先使用30個(gè)檢測卡，分成6組，測試分別含有規(guī)定濃度干擾物的高濃度質(zhì)控樣本和低濃度質(zhì)控樣本，第1組為200 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物膽紅素10 mg/dl；第2組為200 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物甘油三酯900 mg/dl；第3組為200 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物血紅蛋白200 mg/dl；第4組為50 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物膽紅素10 mg/dl；第5組為50 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物甘油三酯900 mg/dl；第6組為50 ng/ml的鐵蛋白溶液中加入干擾物血紅蛋白200 mg/dl；每組重復(fù)檢測5次。（2）再使用30個(gè)檢測卡，分成6組，測試不含有干擾物的高濃度質(zhì)控樣本和低濃度質(zhì)控樣本，每組重復(fù)檢測5次。含有干擾物的質(zhì)控樣本測試結(jié)果均值記為M，不含有干擾物的質(zhì)控樣本測試結(jié)果均值記為T，計(jì)算交叉反應(yīng)率B =（M-T）/T×100%。該產(chǎn)品技術(shù)要求中規(guī)定：交叉反應(yīng)率B≤15%。經(jīng)計(jì)算，含干擾物膽紅素10 mg/dl時(shí)，B高：-1%，B低：-3%；含干擾物甘油三酯900 mg/dl時(shí)，B高：0.05%，B低：-0.3%；含干擾物血紅蛋白200 mg/dl時(shí)，B高：-0.4%，B低：-5%。所以，當(dāng)樣品中含有干擾物甘油三酯濃度≤900 mg/dl、膽紅素濃度≤10 mg/dl、血紅蛋白濃度≤200 mg/dl時(shí)，檢測結(jié)果不引起干擾效應(yīng)，符合產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定。

3 討論

鐵蛋白是人體內(nèi)一種貯存鐵的可溶性組織蛋白，參與對造血和免疫系統(tǒng)的調(diào)控。正常人血清中含有少量鐵蛋白，血清中鐵蛋白水平可反映鐵的儲(chǔ)備情況及人體的營養(yǎng)狀況。血清鐵蛋白的測定是監(jiān)測鐵代謝的有效指標(biāo)，鐵蛋白濃度下降并伴有血紅蛋白減少時(shí)，一般認(rèn)為出現(xiàn)了鐵缺乏[2]。鐵蛋白含量低于10～15 ng/ml時(shí)，通常認(rèn)為是缺鐵性貧血[3]。肝內(nèi)鐵過量可能導(dǎo)致肝硬化和肝纖維化，血液檢查會(huì)出現(xiàn)血清鐵蛋白濃度升高的情況[4-5]。由感冒、腸炎、結(jié)核等各種感染性疾病引起的應(yīng)激反應(yīng)也會(huì)使血清鐵蛋白升高[6]。檢測血清中的鐵蛋白，有利于缺鐵性貧血、肝臟疾病及某些腫瘤疾病的診斷。監(jiān)測血清中鐵蛋白的動(dòng)態(tài)變化，對于疾病的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、復(fù)發(fā)，都有積極的作用[7]。

本研究對試劑盒的線性、準(zhǔn)確度、精密度、分析特異性進(jìn)行評價(jià)，研究結(jié)果表明，被檢驗(yàn)鐵蛋白定量檢測試劑盒，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，檢測靈敏快速，測值準(zhǔn)確，可滿足臨床檢測要求。