microRNA在原發(fā)性高血壓病理機(jī)制中的研究進(jìn)展

朱丹，胡大春

(昆明醫(yī)科大學(xué)附屬甘美醫(yī)院 昆明市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，昆明 650011)

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是心血管疾病的重要危險因素，根據(jù)2016年一份關(guān)于全球患高血壓的人口研究報告，2000—2010年全球估計有13.9億人患有高血壓[1]。以往的研究已證明EH的病理過程累及多個器官[2]，隨后針對EH病理機(jī)制和信號通路的藥物和治療策略得到發(fā)展，但EH病理機(jī)制復(fù)雜，目前其確切的病因與病理過程仍不清楚。研究認(rèn)為，EH由基因遺傳、生活行為和環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致血壓升高[3]。有關(guān)EH遺傳病理機(jī)制的研究起初主要集中于基因組中的編碼區(qū)域，但在人類基因組中編碼蛋白區(qū)域在基因組總量中占比不足2%，其研究結(jié)果不足以完全解釋血壓升高的機(jī)制[4]。提示血壓升高的病理機(jī)制中還存在不改變DNA序列但其表達(dá)性狀切實(shí)發(fā)生改變的其他機(jī)制，即表觀遺傳學(xué)改變。表觀遺傳學(xué)的發(fā)生機(jī)制主要包括組蛋白修飾、DNA甲基化、染色質(zhì)重構(gòu)，特別是不編碼蛋白質(zhì)的RNA，即非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)對靶基因的調(diào)控等[5]。近年來，ncRNA作為細(xì)胞功能的基本調(diào)節(jié)因子得到廣泛關(guān)注，在EH病理機(jī)制研究中也取得了許多新的進(jìn)展。使用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)高血壓和正常血壓受試者的腎皮質(zhì)和髓質(zhì)內(nèi)的微RNA(microRNA,miRNA)在全基因組范圍內(nèi)具有差異性，提示ncRNA中miRNA可能在血壓調(diào)節(jié)機(jī)制中發(fā)揮作用[6]?，F(xiàn)就miRNA在EH病理機(jī)制中的可能作用進(jìn)行綜述。

1 miRNA及其作用機(jī)制

1.1ncRNA的分類 ncRNA根據(jù)分子大小不同可分為3種類型[7]：①短鏈ncRNA，其長度約20個核苷酸，包括小干擾RNA、miRNA、與PIWI蛋白相作用的RNA和小向?qū)NA。其中與PIWI蛋白相作用的RNA在動物生殖細(xì)胞中與Argonaute蛋白家族中PIWI蛋白特異性結(jié)合后介導(dǎo)靶mRNA降解[8]。②中長度ncRNA，長度為20～200個核苷酸，包括核仁RNA、與轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)相關(guān)的RNA和啟動子RNA，它們參與蛋白生物合成過程中mRNA的剪接。③長鏈ncRNA，其長度>200個核苷酸。此外，線性RNA的3′端和5′端可以連接形成環(huán)狀RNA，環(huán)狀RNA是新近發(fā)現(xiàn)的一類ncRNA，具有較好的穩(wěn)定性和高度保守性，在許多生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用[9]。以往研究認(rèn)為蛋白質(zhì)編碼基因是細(xì)胞表型和生物學(xué)功能的決定因素，然而隨著對人類基因組及其功能表達(dá)的深入探討與認(rèn)識，發(fā)現(xiàn)ncRNA對基因表達(dá)及其功能實(shí)現(xiàn)發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[5]。

1.2miRNA的生成與作用機(jī)制 在細(xì)胞核內(nèi)RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄miRNA的宿主基因，最初的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為具有帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的原始miRNA，原始miRNA在Drosha核酸酶和其輔助因子的作用下，被處理成含70個核苷酸的具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA，前體miRNA再由RNA-鳥苷三磷酸和輸出蛋白5將其輸送到細(xì)胞質(zhì)中，隨后，由另一個核酸酶Dicer將其剪切，產(chǎn)生約為22個核苷酸長度的雙鏈結(jié)構(gòu)，即miRNA/miRNA*。這種雙鏈很快被引導(dǎo)進(jìn)入RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體中，其中一條成熟的單鏈miRNA保留在RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體中，另一條成熟的miRNA通過堿基配對結(jié)合到其靶mRNA的互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)而促進(jìn)靶mRNA的降解或抑制靶mRNA的翻譯，發(fā)揮調(diào)控蛋白表達(dá)的作用。miRNA抑制靶基因表達(dá)的機(jī)制既復(fù)雜又具有非特異性，即一種miRNA可調(diào)控多個靶mRNA分子，一種mRNA也可被多種miRNA同時調(diào)控[10]。miRNA作為重要的蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)分子，參與生命過程中一系列的重要進(jìn)程，包括胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、病毒防御、脂肪代謝、腫瘤發(fā)生等。研究表明，miRNA分子可作為診斷疾病的分子標(biāo)志物，具有指導(dǎo)臨床治療潛能[11]。

2 EH病理機(jī)制中miRNA對腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)作用的影響

2.1腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin aldosterone system，RAAS)對血壓的調(diào)節(jié)作用 RAAS是調(diào)節(jié)血壓的最重要因素之一。在RAAS中，球旁器上皮細(xì)胞合成前腎素原，其進(jìn)一步加工形成活性腎素，腎素將肝臟釋放的血管緊張素原轉(zhuǎn)換為血管緊張素(angiotensin,Ang)Ⅰ；內(nèi)皮細(xì)胞釋放血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme,ACE)，將AngⅠ轉(zhuǎn)化為AngⅡ；AngⅡ作用于血管緊張素Ⅱ受體1(angiotensin Ⅱ receptor type 1，AT1R)和AT2R；AngⅡ與AT1R結(jié)合，引起水鈉潴留，血管收縮，刺激交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮，刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶釋放醛固酮[12]。醛固酮是RAAS的終末激素，AngⅡ和細(xì)胞外K+濃度增加，促進(jìn)了編碼醛固酮合酶CYP11B2基因的表達(dá)，進(jìn)而刺激醛固酮分泌[13]。醛固酮在遠(yuǎn)曲小管和集合管上皮細(xì)胞通過鈉-氫交換、鈉-鉀交換，促進(jìn)鈉離子和水分子的重吸收，在腎臟的“壓力-鈉利尿現(xiàn)象”中發(fā)揮重要的生理調(diào)節(jié)作用。RAAS異?？蓪?dǎo)致AngⅡ水平升高，從而使血管收縮性增強(qiáng)、水鈉潴留，進(jìn)而導(dǎo)致血壓升高；AngⅡ水平升高也是高血壓腎損傷的重要因素之一。

2.2多種miRNA參與AngⅡ的血壓調(diào)節(jié)及EH并發(fā)癥的病理機(jī)制 多項研究認(rèn)為，AngⅡ水平異常升高可誘導(dǎo)血管損傷，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂和血管重塑，進(jìn)一步促進(jìn)EH的發(fā)生發(fā)展與終末器官損傷[14-15]。Huo等[16]在研究AngⅡ?qū)е卵軗p傷的機(jī)制中發(fā)現(xiàn)，連續(xù)14 d輸注AngⅡ的小鼠，在血壓升高的同時腸系膜動脈受損，使用測序技術(shù)對腸系膜動脈miRNA譜進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)23種miRNAs水平上調(diào)，12種miRNAs水平下調(diào)，其中miR-431-5p是AngⅡ誘導(dǎo)血管損傷和血壓升高的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子，敲除miR-431-5p表達(dá)可延緩AngⅡ誘導(dǎo)的血壓升高并減輕血管損傷。提示miR-431-5p可能參與RAAS異常所致高水平AngⅡ的作用機(jī)制，降低miR-431-5p水平，有助于控制血壓。

腎素受體是近年來受到廣泛關(guān)注的RAAS新成員，高血壓患者血漿腎素受體水平升高。有研究發(fā)現(xiàn)高水平的腎素受體可促進(jìn)AngⅡ產(chǎn)生[17-18]。在對AngⅡ依賴性高血壓動物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，敲除腎素受體基因可抑制AngⅡ的產(chǎn)生及其誘導(dǎo)的血壓升高；對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行研究顯示，腎素受體mRNA的3′非翻譯區(qū)(untranslated region，UTR)是miR-133a的作用部位，可負(fù)調(diào)控腎素受體表達(dá)；同時發(fā)現(xiàn)，miR-133a水平處于下調(diào)狀態(tài)時，AngⅡ可導(dǎo)致收縮壓升高，miR-133a表達(dá)增加，AngⅡ效應(yīng)顯著降低，miR-133a水平與AngⅡ效應(yīng)存在負(fù)相關(guān)[19]。這些結(jié)果提示，miR-133a一方面可能通過調(diào)控腎素受體的表達(dá)調(diào)節(jié)AngⅡ水平；另一方面還可能抑制AngⅡ效應(yīng)的發(fā)揮，對維持正常血壓有重要作用。

有研究顯示，EH患者中miR-126a-3p[20]和miR-150-5p[21]水平降低。Qian等[22]在研究綠茶的主要有效成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯對血壓的調(diào)節(jié)機(jī)制時發(fā)現(xiàn)其能有效降低自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHRs)的血壓，并通過對SHRs頸動脈組織miRNA譜分析發(fā)現(xiàn)給予表沒食子兒茶素沒食子酸酯后miR-126a-3p和miR-150-5p基因表達(dá)增加；但miR-126a-3p的靶基因血管細(xì)胞黏附分子1、miR-150-5p靶基因特異性蛋白1及其下游分子AT1R的mRNA和蛋白表達(dá)均下調(diào)。提示正常情況下，miR-126a-3p和miR-150-5p可能通過降低血管細(xì)胞黏附分子1和特異性蛋白1的表達(dá)下調(diào)AT1R的表達(dá)，具有平衡AngⅡ升高血壓的作用。

有研究顯示，AngⅡ升高可誘導(dǎo)高血壓腎病的發(fā)生發(fā)展[23]。一項對AngⅡ誘導(dǎo)腎損傷的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓腎病患者血漿與尿液中miR-103a-3p水平顯著高于健康對照組，且與尿微量白蛋白呈正相關(guān)，進(jìn)一步的動物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，miR-103a-3p過表達(dá)可引起單核細(xì)胞驅(qū)動因子蛋白1、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8等炎癥因子在mRNA和蛋白水平的表達(dá)增加，提示miR-103a-3p上調(diào)參與AngⅡ誘導(dǎo)腎臟炎癥和損傷過程[24]。經(jīng)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和動物水平的研究均發(fā)現(xiàn)miR-103a-3p以蔗糖非發(fā)酵相關(guān)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(sucrose non-fermentable-related serine/threonine-protein kinase，SNRK)為調(diào)控靶點(diǎn)，負(fù)性調(diào)控SNRK的表達(dá)，SNRK與核因子κB/p65相互作用后具有抗炎作用[24]。上述研究提示，Ang Ⅱ 可能增加miR-103a-3p的表達(dá)，下調(diào)SNRK水平，導(dǎo)致核因子κB/p65通路過度激活，誘發(fā)腎臟炎性損傷，這可能是高水平AngⅡ?qū)е履I損傷的分子病理機(jī)制之一。

3 EH病理機(jī)制中miRNA參與血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化

3.1血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)表型轉(zhuǎn)化在血壓調(diào)節(jié)中的作用 VSMCs高度分化，生理情況下VSMCs處于舒縮表型，以維持血管正常的舒縮活動。在病理條件下，VSMCs增生、肥大并向內(nèi)膜下遷移，導(dǎo)致血管壁變厚、管腔變窄，血管阻力增加，是高血壓形成的重要機(jī)制之一。

VSMCs內(nèi)游離鈣濃度增加，促進(jìn)肌動蛋白-肌球蛋白交聯(lián)橋的形成，使血管平滑肌收縮，血管平滑肌的收縮功能也受RhoA-Rho激酶、蛋白激酶C和促分裂原活化的蛋白激酶信號、活性氧類和肌動蛋白骨架重組的影響；免疫/炎癥通路的激活和ncRNA是血管功能的重要調(diào)節(jié)因子[25]。VSMCs信號紊亂和功能改變可影響血管的反應(yīng)性與張力，這是血管阻力增加和血壓升高的重要決定因素。

3.2不同miRNA以不同機(jī)制影響VSMCs表型轉(zhuǎn)換 鈣調(diào)蛋白和α-平滑肌肌動蛋白是VSMCs舒縮表型標(biāo)志物，骨橋蛋白是VSMCs去分化標(biāo)志物。Liao等[26]通過運(yùn)動降血壓的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動可顯著降低收縮壓，增加鈣調(diào)蛋白水平，降低骨橋蛋白水平，提示運(yùn)動有利于VSMCs向舒縮型轉(zhuǎn)化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)運(yùn)動可恢復(fù)miR-145水平，后者可增加VSMCs鈣調(diào)蛋白和α-平滑肌肌動蛋白的表達(dá)，但降低骨橋蛋白水平。繼續(xù)進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-145可影響蛋白激酶B信號通路中胰島素樣生長因子1受體和胰島素受體底物1表達(dá)，提示miR-145可能通過蛋白激酶B信號通路參與VSMCs舒縮表型的維持，有對抗血壓升高的效應(yīng)。

Wang等[27]研究發(fā)現(xiàn)高血壓患者血漿miR-21-3p水平降低，且與收縮壓或舒張壓水平呈負(fù)相關(guān)，高血壓治療效果不明顯患者的miR-21-3p水平更低，在SHRs中同樣存在此現(xiàn)象，提示miR-21-3p可能參與血壓的調(diào)節(jié)。深入研究發(fā)現(xiàn)α2B-腎上腺素能受體(α2B-adrenergic receptor，ADRA2B)是miR-21-3p重要的生理調(diào)節(jié)靶點(diǎn)，miR-21-3p可直接結(jié)合ADRA2B mRNA 3′UTR，抑制其蛋白表達(dá)。ADRA2B可誘導(dǎo)VSMCs從舒縮型向合成型轉(zhuǎn)變，促使血管VSMCs增生，發(fā)生血管重構(gòu)，致使血壓升高，而miR-21-3p通過抑制ADRA2B蛋白表達(dá)，從而減弱血管重構(gòu)的效應(yīng)，具有對抗血壓升高的作用。

在高血壓血管重構(gòu)中，過度的周期性血管壁牽張是血壓升高的重要原因。過度的周期性血管壁牽張可促進(jìn)VSMCs增殖。Wang等[28]研究發(fā)現(xiàn)增加周期性血管壁牽張，動脈VSMCs中結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)蛋白水平隨之升高；敲低CTGF表達(dá)，VSMCs增殖減弱；注入重組CTGF蛋白可刺激VSMCs向增殖表型轉(zhuǎn)變。深入探討其機(jī)制發(fā)現(xiàn)miR-19b-3p可與CTGF的 mRNA 3′UTR結(jié)合，負(fù)向調(diào)節(jié)CTGF表達(dá)，進(jìn)而減少VSMCs增殖，具有抑制高血壓血管重構(gòu)的作用。

血管外膜成纖維細(xì)胞是維持血管壁功能和結(jié)構(gòu)正常的重要調(diào)控因子。胞外囊泡是細(xì)胞釋放的磷脂膜囊泡，在正常和疾病狀態(tài)下發(fā)揮著細(xì)胞與細(xì)胞之間傳遞信息的關(guān)鍵作用[29-31]。有研究者在正常血壓WKY大鼠和SHRs的主動脈外膜成纖維細(xì)胞中分離出胞外囊泡，在兩種大鼠體內(nèi)注射WKY大鼠的胞外囊泡，發(fā)現(xiàn)可增加SHRs血管內(nèi)的miR-155-5p水平，降低ACE的mRNA和蛋白含量，抑制血管重構(gòu)，有利于降低SHRs的血壓，WKY大鼠的血壓無明顯變化；再在兩種大鼠體內(nèi)注射SHRs的胞外囊泡，發(fā)現(xiàn)可降低兩種大鼠的miR-155-5p水平，升高ACE蛋白含量，促進(jìn)血管重構(gòu)及血壓升高[32]。提示動脈外膜成纖維細(xì)胞中的miR-155-5p和ACE含量與VSMCs增殖有關(guān)，且影響血壓水平。

p27是一種細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑，在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，特別是G1期中起關(guān)鍵作用。p27通過抑制細(xì)胞周期蛋白E-細(xì)胞周期蛋白依賴激酶2和細(xì)胞周期蛋白D-細(xì)胞周期蛋白依賴激酶4等G1期激酶復(fù)合物的活化，阻斷細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而阻滯細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖[33]。Ki-67是一種存在于增殖細(xì)胞的核抗原，與染色質(zhì)相連和細(xì)胞有絲分裂有關(guān)，是目前應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞增殖標(biāo)志物之一。對模型高血壓大鼠胸主動脈VSMCs轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)miR-155可靶向負(fù)調(diào)控p27蛋白表達(dá)，VSMCs的收縮標(biāo)志物α平滑肌肌動蛋白同時降低，而Ki-67水平顯著上調(diào)[34]。提示miR-155可通過下調(diào)細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑促進(jìn)VSMCs增殖，參與高血壓的形成機(jī)制。

4 EH病理機(jī)制中miRNA對內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響

4.1內(nèi)皮細(xì)胞在血壓調(diào)節(jié)中的作用 血管內(nèi)皮功能障礙與高血壓密切相關(guān)，內(nèi)皮細(xì)胞的功能是向血液中釋放血管擴(kuò)張劑以減少血管阻力，其在血管系統(tǒng)的發(fā)育、調(diào)節(jié)和重構(gòu)中發(fā)揮重要作用，血壓升高可改變內(nèi)皮細(xì)胞的表型和功能[35]。隨著內(nèi)皮功能障礙加重，血管舒張能力減弱，炎癥因子的激活和釋放，活性氧類的增加，NO減少，血管硬度和脈壓增加，最終導(dǎo)致血壓持續(xù)升高。內(nèi)皮細(xì)胞表型的維持涉及多種分子機(jī)制，如蛋白激酶、整合素、內(nèi)皮型一氧化氮合酶、NO、血管內(nèi)皮生長因子和miRNA等[36-37]。有證據(jù)表明，miRNA參與血管生成、內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及其內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙[38]。

4.2miRNA影響內(nèi)皮細(xì)胞功能平衡穩(wěn)態(tài)機(jī)制 高血壓可加速血管老化，血管老化是高血壓后期損傷靶器官的基礎(chǔ)。血管老化的病理過程包括血管氧化應(yīng)激增加、血管周圍炎癥增加、內(nèi)皮功能障礙。內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙進(jìn)一步加重血管硬化，與高血壓引起的周圍血管纖維化密切相關(guān)。Nosalski等[39]在高血壓小鼠的血管周圍組織(perivascular tissues，PVAT)中發(fā)現(xiàn)miR-214水平明顯升高，敲除小鼠體內(nèi)miR-214能改善小鼠的內(nèi)皮功能障礙、降低血管氧化應(yīng)激反應(yīng)以及抑制T細(xì)胞進(jìn)入PVAT，以減弱炎癥反應(yīng)；進(jìn)一步研究顯示，敲除miR-214可阻止促纖維化T細(xì)胞因子和趨化因子受體活化，從而減弱T細(xì)胞趨化作用，減輕血管周圍炎癥，提示miR-214通過增加PVAT內(nèi)的T細(xì)胞數(shù)量和促進(jìn)局部促纖維化細(xì)胞因子的釋放，加重內(nèi)皮功能障礙和周圍血管纖維化，導(dǎo)致血壓持續(xù)升高，表明敲除miR-214有利于血壓的穩(wěn)定和內(nèi)皮功能的修復(fù)[39]。

Tian等[40]采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對不同高血壓分級患者外周血miR-199a-5p水平進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，EH患者外周血miR-199a-5p水平明顯高于健康人群，且高血壓分級越高，miR-199a-5p水平升高越顯著，提示miR-199a-5p水平與高血壓進(jìn)展相關(guān)；進(jìn)一步用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-199a-5p可增加細(xì)胞凋亡率，而顯著降低細(xì)胞自噬；且通過腺苷酸激酶/unc-51類似的自噬激活激酶1信號通路可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞自噬，并促進(jìn)其凋亡。提示miR-199a-5p可能通過影響血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬與凋亡機(jī)制，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常新陳代謝，使血管的順應(yīng)性調(diào)節(jié)失衡，促進(jìn)高血壓的發(fā)生發(fā)展。

以往研究表明，miR-122是哺乳動物中具有肝臟特異性的miRNA，來源于前體mRNA，即“hcr基因”，miR-122可與高親和力陽離子氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(cationic amino acid transporter-1，CAT-1)的3′UTR端結(jié)合，從而降低CAT-1表達(dá)[41]。一項病例對照試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，EH患者血漿中miR-122顯著升高，CAT-1水平顯著降低；且在年輕的EH患者(年齡<40歲)中更為明顯。血管內(nèi)皮細(xì)胞中的內(nèi)皮型一氧化氮合酶依賴于CAT-1轉(zhuǎn)運(yùn)L-精氨酸進(jìn)而產(chǎn)生NO[42]?？梢酝茰y，miR-122可能通過抑制CAT-1蛋白的表達(dá)，降低對L-精氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而影響內(nèi)皮細(xì)胞NO合成與釋放，減弱血管的舒緩作用，促使血壓持續(xù)升高。

5 miRNA在EH其他病理機(jī)制中的作用

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrote reductase,MTHFR)在葉酸代謝通路中將5,10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為具有生物學(xué)功能的5-甲基四氫葉酸，后者進(jìn)入甲基傳遞通路，通過同型半胱氨酸的重新甲基化過程間接為DNA甲基化、氨基酸甲基化等提供甲基,并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一個較低的水平。流行病學(xué)研究顯示，MTHFR 677C>T基因變異者患高血壓的風(fēng)險增加24%～87%[43]。Lynch等[44]檢測了75例具有潛在心血管疾病患者的血壓及MTHFR基因多態(tài)性分型，發(fā)現(xiàn)MTHFR 677TT基因型攜帶者血壓均高于MTHFR 677CC基因型，且接近高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)；進(jìn)一步分析75例患者血清中的68個miRNA相對表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在TT基因型與CC基因型樣本中miR-199-5p表達(dá)存在差異，與CC基因型樣本相比，TT基因型樣本中miR-199-5p水平增加了1.47倍，其中，收縮壓低的TT基因型攜帶者miR-199-5p表達(dá)水平高于收縮壓高的TT基因型。提示miR-199a參與MTHFR677C>T基因變異導(dǎo)致的血壓變化。

緊密連接蛋白claudin是細(xì)胞間緊密連接的骨架蛋白，claudin家族有多個成員，且具有組織和器官特異性，claudin缺乏或異常表達(dá)與多種疾病相關(guān)。Matsuoka等[45]的研究顯示，miR-124可與claudin結(jié)構(gòu)域1(claudin domain-containing 1，CLDND1)的3′UTR結(jié)合，并在易患腦卒中SHRs的大腦和小腦中發(fā)現(xiàn)CLDND1 mRNA和蛋白水平明顯高于WKY，而miR-124水平則明顯低于WKY組，CLDND1 mRNA水平隨著miR-124的降低而升高；進(jìn)一步對人腦內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-124可使CLDND1 mRNA水平降低。這些結(jié)果提示，miR-124通過與CLDNL1 mRNA相互作用，負(fù)調(diào)控CLDND1表達(dá)，在高血壓病腦血管并發(fā)癥的發(fā)生中可能發(fā)揮作用。

血管升壓素(arginine vasopressin,AVP)由下丘腦視上核與室旁核的神經(jīng)細(xì)胞分泌。AVP與腎遠(yuǎn)曲小管和集合管的特異性受體結(jié)合形成復(fù)合物，激活腺苷酸環(huán)化酶，使ATP轉(zhuǎn)變成cAMP，在cAMP的作用下激活蛋白激酶，使膜蛋白磷酸化，增加腎小管上皮細(xì)胞對水分子的通透性，水分子沿著滲透梯度被動地重吸收，對血容量的維持有重要作用。有研究顯示，AVP與血管升壓素受體1A(arginine vasopressin receptor 1A，AVPR1A)結(jié)合，可引發(fā)外周血管收縮，導(dǎo)致血壓升高[46]。Nossent等[47]研究發(fā)現(xiàn)AVPR1A 3′UTR的rs11174811多態(tài)性中，TT基因型患者血壓顯著高于GG和GT基因型患者，進(jìn)一步研究顯示hsa-miR-526b和hsa-miR-578能夠抑制AVPR1A的表達(dá)，但AVPR1A的G等位基因突變?yōu)門等位基因時這種抑制作用消失。提示AVPR1A基因rs11174811位點(diǎn)多態(tài)性可能影響miRNA對AVPR1A表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。

6 小 結(jié)

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為編碼蛋白質(zhì)的基因可以調(diào)節(jié)特定細(xì)胞的表型和生物學(xué)功能，但越來越多的證據(jù)表明，ncRNA參與編碼蛋白基因的表達(dá)調(diào)控，已成為影響DNA和表觀遺傳之間相互作用的動態(tài)管理器。因此，ncRNA在許多生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。對EH病理機(jī)制的深入研究顯示，ncRNA中的miRNA廣泛參與EH的病理機(jī)制。miRNA在EH病理機(jī)制中的作用具有雙面性：一方面，部分miRNA有利于血壓的控制，能延緩高血壓病并發(fā)癥的發(fā)生；另一方面，部分miRNA促進(jìn)高血壓的發(fā)生發(fā)展，加重靶器官的損傷。因此，miRNA參與血壓的調(diào)節(jié)機(jī)制錯綜復(fù)雜，不同的miRNA有不同的作用機(jī)制，所對應(yīng)的臨床治療策略也應(yīng)有所差別。