新型PPAR-γ調(diào)控劑VSP-17對(duì)DSS誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎的抑制作用

徐笑天，王宇暉

（桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541004）

0 引言

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種容易反復(fù)發(fā)作并且難以根治的腸道疾病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、便血、體重減輕等[1]，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為UC的發(fā)病與環(huán)境因素、飲食因素、遺傳因素有關(guān)[2-3]。當(dāng)前臨床常使用的羅格列酮不良反應(yīng)較多，因此研究出一種不良反應(yīng)少并且高效的藥物迫在眉睫[4]。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)構(gòu)建小鼠UC模型，探討新型PPAR-γ調(diào)控劑VSP-17對(duì)UC的抑制作用，并比較VSP-17和羅格列酮的抗UC療效和不良反應(yīng)，為VSP-17的臨床應(yīng)用提供有效依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器。XS105DU電子天平（瑞士mettler toledo梅特勒托利有限公司）；GENEX單道可調(diào)移液器（上海寶予德科學(xué)儀器有限公司）；正置成像系統(tǒng)顯微鏡（OIYMPUS DP27上海比目?jī)x器廠）；Medium-S800UVF實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）。

1.2 試劑的配制

1.2.1 2.5%DSS溶液：精密稱取12.0 g DSS，溶于480 mL超純水中，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 0.01MPBS溶液：稱取10 g磷酸緩沖鹽粉劑，溶于1000 mL超純水中。

1.2.3 3%過(guò)氧化氫溶液：取9 mL的雙蒸水，加入1 mL 30%過(guò)氧化氫，混勻。

1.2.4 10 g/L鄰甲苯胺溶液：取8.5 mL的冰醋酸，加入1.5 mL的鄰甲苯胺，混勻，避光保存。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。健康雄性SPF級(jí)C57BL/6小鼠53只，6-8周齡，體重18-22 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK2014-0002。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法。將53只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、美沙拉嗪組（200 mg/kg）、羅格列酮低劑量組（20 mg/kg）、羅格列酮高劑量組（100 mg/kg）、VSP-17組（20 mg/kg），其中正常組6只，模型組15只，其余每組各8只。正常組自由飲用超純水，其余各組給予相同體積的2.5%DSS溶液7d建立模型，隨后更換超純水自由飲用3 d。在建立模型期間，除正常組和模型組外，其余的分組每天灌胃給予相應(yīng)藥物，并且每天對(duì)小鼠進(jìn)行稱重并記錄，收集糞便，觀察糞便性狀及進(jìn)行DAI評(píng)分。在第10 d灌胃后一小時(shí)，頸椎脫臼處死，將小鼠解剖，取小鼠結(jié)腸，測(cè)量并記錄結(jié)腸長(zhǎng)度，隨后用0.01 mol/L PBS溶液清洗結(jié)腸，從遠(yuǎn)心端處取結(jié)腸1 cm置于4%組織細(xì)胞固定液，用于HE染色，作結(jié)腸病理組織學(xué)檢查，在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸病變情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。利用GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 DAI評(píng)分情況。正常組小鼠DAI分?jǐn)?shù)無(wú)明顯浮動(dòng)，與正常組相比較，從第2天開始，模型組由于體重不斷減輕、糞便出現(xiàn)隱血和稀便的情況，DAI分?jǐn)?shù)逐漸上升，至實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第8天達(dá)到高峰值；與模型組相比較，給藥組的DAI分?jǐn)?shù)在第8天達(dá)到高峰值后逐漸下降，其中VSP-17組的下降最為明顯（P＜0.05），其次是羅格列酮低劑量組、美沙拉嗪組、羅格列酮高劑量組。說(shuō)明藥物對(duì)疾病均有抑制作用且VSP-17的抑制作用最明顯，詳見表1。

2.2 小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度變化。與正常組相比較，模型組小鼠由于腸道受到刺激，結(jié)腸有所縮短；與模型組相比較，VSP-17組、美沙拉嗪組和羅格列酮低劑量組的結(jié)腸有所增長(zhǎng)，其中羅格列酮低劑量組的結(jié)腸長(zhǎng)度最長(zhǎng)（P＜0.05），羅格列酮高劑量的結(jié)腸最短。

表1 藥物對(duì)各組小鼠DAI評(píng)分的影響

表1 藥物對(duì)各組小鼠DAI評(píng)分的影響

注：##P＜0.01，模型組vs正常組；?P＜0.05，給藥組vs模型組；??P＜0.01，給藥組vs模型組。

天數(shù) 正常組 模型組 VSP-17組 美沙拉嗪組 羅格列酮低劑量組 羅格列酮高劑量組第一天 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000 0.000±0.000第二天 0.000±0.000 0.337±0.561 0.331±0.179 0.291±0.213 0.374±0.215 0.500±0.182第三天 0.000±0.000 0.889±0.500## 0.293±0.322?? 0.166±0.252?? 0.375±0.452? 0.709±0.376第四天 0.000±0.000 1.533±0.414## 0.334±0.310?? 0.208±0.248?? 0.459±0.435?? 0.959±0.486??第五天 0.000±0.000 1.599±0.362## 0.709±0.376?? 0.541±0.250?? 0.750±0.427?? 1.081±0.387??第六天 0.000±0.000 1.912±0.511## 1.249±0.429?? 1.084±0.387?? 1.415±0.526? 1.665±0.504第七天 0.000±0.000 2.444±0.411## 1.916±0.577? 1.750±0.345?? 1.791±0.307?? 1.876±0.171??第八天 0.000±0.000 3.111±0.483## 2.418±0.529?? 2.625±0.601? 2.459±0.588?? 2.666±0.436?第九天 0.000±0.000 2.868±0.328## 2.290±0.576?? 2.418±0.791 2.333±0.565?? 2.584±0.495第十天 0.000±0.000 2.555±0.450## 2.043±0.330? 2.375±0.654 2.251±0.427 2.458±0.397

2.3 小鼠病理組織學(xué)變化。HE染色后，將小鼠結(jié)腸組織做成切片，在光學(xué)顯微鏡下觀察到正常組小鼠的腸壁組織上有完整的杯狀細(xì)胞，沒有充血、水腫等現(xiàn)象；與正常組相比較，模型組隨著炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，小鼠腸壁上的杯狀細(xì)胞遭到破壞，并且會(huì)伴有糜爛、水腫或充血的現(xiàn)象；與模型組相比較，給藥組隨著藥物的作用小鼠腸壁上原本出現(xiàn)的糜爛、水腫、充血等現(xiàn)象以及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，其中VSP-17的效果較好，羅格列酮高劑量組的效果差[5]。

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)VSP-17能改善小鼠體重下降情況，降低

DAI分?jǐn)?shù)，減少糞便隱血，改善結(jié)腸縮短情況，減小結(jié)腸損傷程度。提示，VSP-17對(duì)DSS誘導(dǎo)UC有抑制作用。