赤峰地區(qū)2 488例女性人乳頭瘤病毒感染特征分析1

馬 成，莫殿軍，崔智慧△，劉金元，李亞波

(赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院：1.中心實(shí)驗(yàn)室；2.檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古赤峰 024005；3.上海鼎晶生物醫(yī)藥科技股份有限公司，上海 201203)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種無(wú)包膜的二十面體衣殼蛋白病毒，屬于一種雙鏈小DNA病毒，由病毒蛋白外殼L1和L2及遺傳物質(zhì)DNA組成[1]，具有明顯的種屬特異性，人是其唯一宿主，HPV主要感染人的皮膚和黏膜，致使人體呼吸道、生殖道和皮膚等出現(xiàn)不同程度的病變。宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出增高和年輕化的趨勢(shì)，許多研究證實(shí)，HPV感染與宮頸癌密不可分。目前，已發(fā)現(xiàn)200多種HPV亞型，依據(jù)其致病力強(qiáng)弱分為高危型和低危型，其中，高危型與多種惡性腫瘤的發(fā)生密不可分，如乳腺癌、結(jié)直腸癌等[2-3]，為宮頸癌和癌前病變的致病因素；低危型主要誘發(fā)外生殖器的尖銳濕疣和子宮頸上皮低級(jí)別的非典型增生(CINI)且不引起惡性病變。另外，HPV感染具有地域和年齡的差異，本文分析赤峰地區(qū)2 488例HPV檢測(cè)結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，為赤峰地區(qū)女性宮頸癌的預(yù)防、診斷和治療提供臨床參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年11月至2019年3月在婦科門診就診及進(jìn)行健康體檢的女性受試者2 488例為研究對(duì)象，排除病歷資料不完整、月經(jīng)期或嚴(yán)重疾病及標(biāo)本細(xì)胞過(guò)少或不合格的患者，對(duì)其以年齡段為分組依據(jù)，分為≤30歲組，31～40歲組，41～50歲組，≥51歲組。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器 可調(diào)試混勻儀(大龍，MS-X)；低溫高速離心機(jī)(eppendorf，Centrifuge 5424R)；恒溫金屬浴(上海滬析，HX-20)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Thermo fisher，ABI 7500)；基因擴(kuò)增儀(杭州晶格，K960)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器，HH-2)；分子雜交儀(興化市分析儀器，F(xiàn)YY-3)；轉(zhuǎn)移脫色搖床(海門其林貝爾，TS-8)。

1.2.2試劑 HPV基因分型(25種分型)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司，可分型檢測(cè)25種HPV亞型，包括14種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73)；3種疑似高危型(HPV26、53、66)；8種低危型(HPV6、11、40、42、43、44、81、83)。

1.3PCR-反向點(diǎn)雜交法原理 試劑盒采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的基因檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)HPV特異引物，擴(kuò)增出25種目的片段，與膜條上特異性探針雜交，依據(jù)雜交信號(hào)判斷HPV基因型。

1.4方法

1.4.1標(biāo)本的采集 醫(yī)護(hù)人員采用擴(kuò)陰器擴(kuò)陰以暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口過(guò)多的分泌物，換取HPV專用采集拭子伸入宮頸，通過(guò)上皮交界處旋轉(zhuǎn)3～4周以獲得足夠的宮頸脫落細(xì)胞，將其放入HPV專用的細(xì)胞保存液中，密封送檢，4 ℃保存，1周內(nèi)完成檢測(cè)。

1.4.2HPV分型檢測(cè) 標(biāo)本的處理：標(biāo)本充分震蕩混勻后吸取1.0 mL于1.5 mL EP管中，12 000 r/min離心5 min，棄掉上清留沉淀；HPV陰性、陽(yáng)性質(zhì)控品和標(biāo)本沉淀分別加入混勻的50 μL核酸提取液，混勻后100 ℃干浴10 min，12 000 r/min離心10 min，上清供PCR擴(kuò)增備用。試劑配制與上樣：依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量配置PCR反應(yīng)液，分別取標(biāo)本、陰性和陽(yáng)性質(zhì)控品上清液5 μL于PCR反應(yīng)液中，按照說(shuō)明書(shū)中PCR反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增。雜交、洗膜、顯色和結(jié)果判讀均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HPV感染率及各亞型分布情況 送檢2 488例標(biāo)本中共檢出HPV陽(yáng)性標(biāo)本730例，總感染率為29.34%(730/2 488)，共檢出24種亞型(高危亞型17種，低危亞型7種)，其中低危亞型HPV83沒(méi)有檢出，高危亞型占前3位的分別為HPV52(132例)、HPV16(129例)和HPV58(107例)，低危亞型占前3位的分別為HPV42(66例)、HPV81(44例)和HPV43(41例)，各亞型分布情況見(jiàn)表1。

表1 HPV各亞型感染分布情況

2.2HPV單一亞型感染與多重亞型感染情況 730例陽(yáng)性標(biāo)本中，單一亞型占479例，陽(yáng)性構(gòu)成比為65.62%；多重亞型占251例，陽(yáng)性構(gòu)成比為34.38%，因此，HPV主要以單一亞型感染為主，見(jiàn)表2。

表2 單一亞型感染和多重亞型感染分布情況

2.3陽(yáng)性標(biāo)本中高危亞型、低危亞型和混合亞型感染情況 730例陽(yáng)性標(biāo)本中，高危亞型519例，陽(yáng)性構(gòu)成比為71.10%；低危亞型105例，陽(yáng)性構(gòu)成比為14.38%；混合亞型106例，陽(yáng)性構(gòu)成比為14.52%，因此，HPV主要以高危亞型感染為主，見(jiàn)表3。

表3 高危、低危和混合亞型分布情況

2.4不同年齡組中HPV感染陽(yáng)性率比較 730例陽(yáng)性標(biāo)本在4個(gè)年齡組陽(yáng)性例數(shù)分布情況為102、258、239和131例；陽(yáng)性構(gòu)成比為13.97%、35.34%、32.74%和17.95%；檢出率分別為29.74%、27.92%、28.25%和34.93%。因此,各年齡段陽(yáng)性構(gòu)成比存在明顯差異,且最高年齡段在31～40歲；檢出率在各年齡組間差異不明顯(χ2=7.065，P=0.07)，見(jiàn)表4。

表4 各年齡段HPV感染亞型分布情況

3 討 論

宮頸癌是臨床最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，嚴(yán)重威脅女性生命與健康，其早期臨床癥狀不典型，一旦出現(xiàn)明顯癥狀與體征時(shí)，臨床提示腫瘤惡性程度較高，死亡風(fēng)險(xiǎn)較大[4]。但是，宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展分為3個(gè)連續(xù)性的階段，即宮頸上皮內(nèi)瘤變、原位癌和浸潤(rùn)癌，經(jīng)歷至少10年甚至更長(zhǎng)時(shí)間。因此，對(duì)宮頸癌的早期篩查、預(yù)防、診斷與治療尤為重要[5]。1996年，世界衛(wèi)生組織認(rèn)為HPV-DNA是引發(fā)宮頸癌的關(guān)鍵致病因子，HPV-DNA的基因分型檢測(cè)可以作為宮頸癌早期篩查的依據(jù)。

HPV感染分布具有地理區(qū)域性和年齡差異，不同國(guó)家和地區(qū)的宮頸癌發(fā)生與HPV不同型別感染具有相關(guān)性，且宮頸癌的檢出率呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)。

本文對(duì)赤峰地區(qū)2 488例標(biāo)本進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，感染率為29.34%，單一亞型陽(yáng)性構(gòu)成比為65.62%，高危亞型感染以HPV52、16、58、53、51為主，與洪萍等[6]2019年3月報(bào)道的HPV感染譜分布特點(diǎn)基本一致，說(shuō)明相近時(shí)間段北方地區(qū)HPV感染譜具有趨同性。

對(duì)比本院檢驗(yàn)科李樹(shù)敏等[7]2016年的報(bào)道，報(bào)道顯示，赤峰地區(qū)HPV陽(yáng)性率(23.21%)、單一亞型陽(yáng)性構(gòu)成比(37.14%)和高危亞型感染優(yōu)勢(shì)型別(HPV16、18、31、33、52)與本研究結(jié)果存在差異，原因可能與時(shí)間、季節(jié)、受檢人群和標(biāo)本量有關(guān)。在我國(guó)HPV感染和宮頸癌發(fā)病率每年呈上升趨勢(shì)；且有報(bào)道稱各季節(jié)高危亞型HPV感染略有差異，HPV16、58、52四季中常見(jiàn)，HPV31春季常見(jiàn)，HPV18夏季常見(jiàn)，HPV33秋季常見(jiàn)[8]。本文選取標(biāo)本時(shí)間主要集中在冬季，因此，HPV18、31、33高危亞型相對(duì)較少；且李樹(shù)敏等[7]入組人群為婦科就診患者，不包括體檢人群，大多存在婦科炎癥問(wèn)題和不同程度的宮頸病變，與宮頸腺癌相關(guān)的HPV18所占比例升高[9-11]，HPV多重亞型感染與宮頸上皮內(nèi)病變呈正相關(guān)[12]，所以李樹(shù)敏等[7]報(bào)道以多重亞型感染為主。既往研究證實(shí)，女性宮頸疾病的嚴(yán)重程度與HPV感染亞型、多重感染亞型和感染持續(xù)時(shí)間成正相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，HPV陽(yáng)性率(29.34%)高于內(nèi)蒙古自治區(qū)中西部的23.3%[13]，低于邯鄲地區(qū)的36.26%[14]；感染優(yōu)勢(shì)型別(HPV52、16、58、53、42)與任妹等[15]報(bào)道我國(guó)常見(jiàn)HPV感染型別(HPV16、18、52、58、33)存在差異，以上數(shù)據(jù)顯示，HPV感染分布存在時(shí)間、季節(jié)、人群和地理區(qū)域性差異。

本研究將女性受試者按年齡分為4組，陽(yáng)性構(gòu)成比占比較高的為31～40歲和41～50歲年齡組，且31～40歲最高。因此，加強(qiáng)本年齡組的篩查有利于宮頸癌的防治；各年齡組間檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P=0.07)，因?yàn)檠芯繉?duì)象以來(lái)院就診患者居多，存在不同程度癥狀，檢出率在各年齡組間趨于一致。

本地區(qū)HPV高危亞型、低危亞型和混合亞型陽(yáng)性構(gòu)成比分別為71.10%、14.38%和14.52%，高危亞型中前3位為HPV52、16和58，與邯鄲地區(qū)HPV感染高危亞型前3位存在差異[14]，而HPV16、58和52亞型在亞洲人群中，尤其是中國(guó)高發(fā)地區(qū)具有重要指導(dǎo)意義。

綜上所述，隨著宮頸癌項(xiàng)目篩查的進(jìn)行，HPV疫苗的普及，公眾健康意識(shí)的提高，就醫(yī)人群結(jié)構(gòu)和目的發(fā)生變化，區(qū)域性HPV感染譜呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)過(guò)程。本研究進(jìn)一步更新和補(bǔ)充了區(qū)域性數(shù)據(jù)庫(kù)，為本地區(qū)HPV最新流行情況、宮頸癌的篩查、預(yù)防和治療提供理論依據(jù)，具有重要的指導(dǎo)意義。