非小細(xì)胞肺癌患者血清Tenascin-C水平及診斷價(jià)值

黃 婧,溫維勤

(武漢協(xié)和紅十字會(huì)醫(yī)院老年病科,湖北武漢 430000)

肺癌是世界范圍內(nèi)癌癥死亡的主要原因之一，大多數(shù)肺癌患者診斷時(shí)已處于疾病晚期[1]，中晚期肺癌患者常失去手術(shù)機(jī)會(huì)，5年生存率不足15%。早期診斷、干預(yù)和治療是提高肺癌患者生存率的關(guān)鍵。血清腫瘤標(biāo)志物研究有助于肺癌早期診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后、監(jiān)測(cè)特定治療方法反應(yīng)和療效[2]。臨床常用的腫瘤標(biāo)志物包括癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段、碳水化合物抗原12-5等，但靈敏度和特異度較低[3]。

腫瘤發(fā)生發(fā)展過程是癌細(xì)胞和周圍微環(huán)境相互作用的結(jié)果，部分細(xì)胞外基質(zhì)蛋白與癌癥細(xì)胞存活和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。Tenascins是一組細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，在炎癥、組織損傷、腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移等過程中高表達(dá)。Tenascin-C僅在病理?xiàng)l件下表達(dá)，在調(diào)節(jié)血管生成和腫瘤發(fā)展中起決定性作用[5]。對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的支氣管上皮內(nèi)層液進(jìn)行分析，Tenascin-C顯著升高，其可能是早期癌癥檢測(cè)的潛在診斷工具[6]。盡管如此，NSCLC患者血清Tenascin-C水平及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系和診斷價(jià)值尚不清楚，本研究旨在探討NSCLC患者血清Tenascin-C水平及診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究納入本院2017年1月至2019年1月就診的NSCLC患者和健康體檢者為研究對(duì)象。采用痰細(xì)胞學(xué)檢查、細(xì)針穿刺、支氣管鏡檢查初步診斷，通過如下檢查最終確定臨床分期：胸部、腹部和大腦的計(jì)算機(jī)斷層掃描，腹部超聲檢查，骨掃描和正電子發(fā)射斷層掃描[7]。所有患者均經(jīng)病理學(xué)確診為肺癌新發(fā)病例,共80例，其中腺癌42例，鱗癌38例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均初診為NSCLC；(2)所有患者未經(jīng)放化療或生物治療；(3)所有患者均經(jīng)病理學(xué)確診；(4)患者除肺癌外，不存在其他部位的惡性腫瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往惡性腫瘤; (2)存在嚴(yán)重心、肝、腎功能異常和嚴(yán)重惡性免疫系統(tǒng)和血液系統(tǒng)疾病; (3)抽血前2周存在感染證據(jù)。最終納入80例NSCLC患者作為NSCLC組，其中男42例，女38例，年齡31～81歲，平均(60.71±10.62)歲。對(duì)照組80例健康者均來自體檢人群，無心血管系統(tǒng)及消化系統(tǒng)疾患，肝腎功能及腫瘤標(biāo)志物未見異常，心電圖和胸片未見異常。其中男45例，女35例，年齡44～91歲，平均(57.11±12.09)歲。2組研究對(duì)象年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 Tenascin-C 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) Ready-SET-Go試劑盒(eBioscience，San Diego，USA)，德國(guó)羅氏公司的ELECYS 2010 型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定儀。

1.3方法 在開始任何治療措施(手術(shù)、化療或放射)前，在懷疑診斷時(shí)，采集患者清晨空腹外周血5 mL，將樣品在4 ℃下以1 500×g離心10 min。將上清液儲(chǔ)存在-80 ℃待測(cè)定Tenascin-C水平。通過夾心ELISA法，用商業(yè)Tenascin-C ELISA Ready-SET-Go試劑盒測(cè)定Tenascin-C水平，最低檢測(cè)水平為0.01 ng/mL，組間和組內(nèi)變異系數(shù)為5.2%和4.8%，所有測(cè)定均重復(fù)3次。采用德國(guó)羅氏公司的ELECYS 2010 型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定儀檢測(cè)CEA水平，其上限值為CEA≥3.6 ng/mL。

2 結(jié) 果

2.12組患者血清Tenascin-C水平比較 NSCLC組血清Tenascin-C水平顯著高于對(duì)照組[(5.08±3.33)ng/mLvs.(1.51±1.07)ng/mL,P=0.001],NSCLC組血清CEA水平顯著高于對(duì)照組[(15.64±7.18)vs. (3.58±1.72)ng/mL,P=0.003]，見表1。

表1 2組血清Tenascin-C和CEA水平比較

2.2NSCLC組患者血清Tenascin-C水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 NSCLC組患者血清Tenascin-C水平與年齡、性別和組織類型無顯著相關(guān)性(P>0.05),患者TNM分期越高、存在淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清Tenascin-C水平顯著性增高(P<0.05),見表2。

2.3血清Tenascin-C水平對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值 當(dāng)臨界值為2.07 ng/mL時(shí)，血清Tenascin-C水平診斷NSCLC的ROC曲線下面積為0.743(95%CI:0.688～0.817,P<0.001)，靈敏度和特異度分別為71.1%和76.0%。當(dāng)臨界值為4.40 ng/mL時(shí)，血清CEA診斷NSCLC的曲線下面積為 0.715(95%CI:0.683～0.838，P<0.001)，靈敏度和特異度分別為54.7%和87.0%。二者聯(lián)合使用診斷NSCLC的ROC曲線下面積為0.892(95%CI：0.788～0.917，P<0.001),靈敏度和特異度為81.0%和91.0%,見圖1和表3。

表2 不同臨床病理特征的NSCLC患者血清Tenascin-C水平比較

圖1 血清Tenascin-C和CEA對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值ROC曲線

表3 血清Tenascin-C和CEA診斷NSCLC的效能比較

注：-表示此項(xiàng)無數(shù)據(jù)。

2.4血清Tenascin-C水平對(duì)早期(Ⅰ+Ⅱ期)NSCLC診斷價(jià)值 Ⅰ+Ⅱ期NSCLC患者血清Tenascin-C水平顯著高于對(duì)照組(3.12±2.87)ng/mLvs. (1.51±1.07)ng/mL,P<0.001)。ROC曲線顯示，當(dāng)臨界值為1.73 ng/mL時(shí)，血清Tenascin-C診斷早期(Ⅰ+Ⅱ期)NSCLC的ROC曲線下面積為0.743(95%CI:0.688～0.846,P<0.001)，靈敏度和特異度分別為68.6%和83.0%，見圖2。

圖2 血清Tenascin-C對(duì)早期NSCLC診斷價(jià)值的ROC曲線

3 討 論

肺癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤，其中NSCLC占全部肺癌的80%以上[7]。大部分NSCLC患者診斷時(shí)處于中晚期，常因失去手術(shù)最佳時(shí)間而導(dǎo)致預(yù)后不佳，盡管CT檢查的廣泛使用增加了肺癌早期檢出率，但仍缺乏有效的血清標(biāo)志物用于早期診斷和篩查[8]。

癌癥發(fā)生和發(fā)展是個(gè)多步驟過程，除了癌細(xì)胞本身基因突變外，細(xì)胞外基質(zhì)和周圍微環(huán)境在癌細(xì)胞存活、新生微血管生成和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[4-5]。Tenascin-C是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)家族成員，其存在4種不同形式，其中Tenascin-C除在胚胎發(fā)育過程中表達(dá)外，其在成人生理狀態(tài)下極少表達(dá)[9]。本研究初步探討了NSCLC患者血清Tenascin-C水平和臨床病理因素的關(guān)系及診斷價(jià)值。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者血清Tenascin-C水平顯著高于健康對(duì)照者，更重要的發(fā)現(xiàn)是在早期NSCLC患者(Ⅰ+Ⅱ期)中，血清Tenascin-C水平顯著高于對(duì)照組，研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，文獻(xiàn)報(bào)道NSCLC患者血清Tenascin-C范圍在1.05～7.09，顯著高于健康對(duì)照者[10]。在體外研究肺癌細(xì)胞系中，觀察到分泌型Tenascin-C水平顯著升高,且是鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后分子標(biāo)志物[11]。研究結(jié)果提示在NSCLC患者中，即使是早期NSCLC患者中，可能來自于癌細(xì)胞的Tenascin-C分泌進(jìn)入血液循環(huán)而被檢測(cè)。

本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清Tenascin-C水平與患者年齡、性別和組織類型不存在相關(guān)性，但是TNM分期越高、存在淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清Tenascin-C水平顯著增高(P<0.05),提示血清Tenascin-C水平與患者腫瘤負(fù)荷相關(guān)或侵襲程度相關(guān)，表明血清Tenascin-C水平可能是潛在的NSCLC患者血清標(biāo)志物[12]，但確切機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究。

本研究采用ROC曲線分析顯示，當(dāng)臨界值為2.07 ng/mL時(shí)，血清Tenascin-C水平診斷NSCLC的ROC曲線下面積為0.743，靈敏度和特異度分別為71.1%和76.0%；其對(duì)NSCLC患者診斷效能高于臨床上常用的腫瘤標(biāo)志物CEA，后者診斷NSCLC患者ROC曲線下面積為0.715，靈敏度和特異度分別為54.7%和87.0%。鑒于對(duì)NSCLC患者具有診斷功能的血清標(biāo)志物均一定程度上存在特異度和靈敏度不高問題[13]，本研究聯(lián)合使用血清Tenascin-C和CEA，可將NSCLC診斷效能提高至靈敏度和特異度為87.0%和91.0%。

NSCLC早期診斷對(duì)改善預(yù)后尤為重要，本研究發(fā)現(xiàn)血清Tenascin-C水平對(duì)Ⅰ+Ⅱ期NSCLC的ROC曲線下面積為為0.743，靈敏度和特異度分別為68.6%和84.0%，具有很好的早期診斷效能,但是鑒于Tenascin-C和CEA 診斷NSCLC的ROC曲線下面積均較低(<0.80)，其可能不適于NSCLC患者篩查。

細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白因參與癌癥發(fā)生、發(fā)展、血管生成和轉(zhuǎn)移而受到廣泛的關(guān)注，盡管NSCLC患者血清Tenascin-C增加的確切分子機(jī)制尚不清楚，其可能原因如下：(1)腫瘤細(xì)胞在增殖和進(jìn)展過程中，破壞細(xì)胞外基質(zhì)成分，導(dǎo)致Tenascin-C表達(dá)水平增加和釋放進(jìn)入血液循環(huán)而被檢測(cè)[14]； (2) 新生腫瘤組織形成新微血管成分，而Tenascin-C是調(diào)節(jié)新生微血管的重要分子，其可能表達(dá)水平增加[15]；(3)Tenascin-C參與癌癥細(xì)胞分子信號(hào)傳導(dǎo)，參與腫瘤細(xì)胞上皮間皮的化生過程，在乳腺癌和直腸癌中均可發(fā)現(xiàn)其參與癌變過程，并與患者預(yù)后密切相關(guān)[16]；(4) 最近研究顯示Tenascin-C可能參與癌癥免疫，為癌癥治療的潛在靶標(biāo)[17]。

本研究存在如下不足：(1)本研究為單中心研究，納入病例數(shù)目較少，需要多中心大樣本研究證實(shí)本結(jié)論；(2)本研究并未深入探討NSCLC患者血清Tenascin-C水平增加的確切分子機(jī)制；(3)本研究并未探討NSCLC患者血清Tenascin-C水平對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，其為未來研究方向。

4 結(jié) 論

NSCLC患者血清Tenascin-C水平顯著高于健康人群，對(duì)NSCLC患者具有一定早期診斷功能，是潛在的NSCLC早期診斷血清分子標(biāo)志物。