APTT ACTIN FSL試劑對APTT及Ⅷ因子檢測的影響

劉艷紅，謝東平，董小瑜

(武漢大學人民醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430060)

活化部分凝血活酶時間(APTT)是內源性凝血系統(tǒng)功能缺陷較為靈敏和常用的篩選指標，在監(jiān)測肝素抗凝治療中被廣泛應用[1-4]。凝血因子Ⅷ是存在于血漿中的一種球蛋白，曾被稱為抗血友病因子或抗血友病球蛋白，是內源性凝血途徑中一種重要的凝血因子[5-6]。自2018年以來，Siemens公司陸續(xù)將APTT ACTIN試劑更換升級為APTT ACTIN FSL試劑，然而隨著試劑成分發(fā)生變化，可能會導致檢驗結果隨之改變，是否會影響APTT及Ⅷ因子的檢測結果甚至影響臨床診療判斷，APTT及Ⅷ因子是否需要重新建立新的生物參考區(qū)間，是凝血專業(yè)工作者困惑和爭議的話題，也是醫(yī)學實驗室需要重點關注的問題。因此，本文進行了相關試驗研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇 2018年8月3月至2018年9月10日武漢大學人民醫(yī)院住院患者及體檢者共250例為研究對象，其中為建立參考區(qū)間收集體檢者120例，年齡22～68歲，男67例，女53例。納入、排除標準：過去5 d內未服用阿司匹林或含阿司匹林的藥物、口服避孕藥藥物、抗血栓類藥物(如巴曲酶等)，排除妊娠期或哺乳期、月經(jīng)期，7 d內未做過手術，7 d內未獻過血，1個月內未接受過輸血，無溶血性貧血、再生障礙性貧血、凝血功能障礙等血液系統(tǒng)疾病，無胃癌、食管癌、肺癌、白血病等惡性腫瘤，無泌尿及生殖系統(tǒng)疾病，無紅斑狼瘡、風濕性關節(jié)炎等免疫系統(tǒng)疾病，無肝硬化、肝癌等嚴重肝臟疾病[7]。

1.2儀器與試劑 使用日本Sysmex 公司CS-5100 全自動血凝分析儀，試劑均為Siemens公司配套生產，包括APTT ACTIN(LOT：557248A)，APTT ACTIN FSL(LOT：556942)，氯化鈣(LOT：563828)，質控品由Bio-Rad公司提供(LOT：78470)。由廠家授權的工程師每半年對儀器加樣系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)及光學系統(tǒng)進行校準。參加湖北省衛(wèi)生健康委員會室間質評成績均合格，每日標本檢測前對所有項目進行質控分析，確保所有項目均在控后再進行標本檢測。

1.3方法

1.3.1標本采集 采用BD公司凝血專用0.109 mol/L 枸櫞酸鈉抗凝管抽靜脈血至2.7 mL處,立即顛倒5～8次混勻,1 600 g 離心10 min，分離血漿。排除有凝塊、溶血、脂血等異常情況。及時上機檢測，在室溫下進行檢測并在4 h內完成[8]。

1.3.2指標檢測 使用APTT ACTIN試劑檢測患者血漿APTT，按照實驗室APTT ACTIN原用參考區(qū)間20.0～40.0 s進行判斷，選取20例標本(<20.0 s 7例，20.0～40.0 s 6例，>40.0 s 7例)，使用APTT ACTIN FSL試劑重新檢測APTT。使用APTT ACTIN試劑檢測患者血漿Ⅷ因子，按照實驗室Ⅷ ACTIN原用參考區(qū)間70%～150% 進行判斷，選取70例標本(<70% 2例，70%～150% 49例，>150% 19例)，使用APTT ACTIN FSL試劑重新檢測Ⅷ因子。

1.3.3生物參考區(qū)間的建立 參照衛(wèi)生行業(yè)標準[9]和臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI) C28-A3 文件推薦的方法[10],將120 例體檢者血漿分別進行 APTT和Ⅷ因子檢測，將所有測定結果先做數(shù)據(jù)離群點的判斷，將疑似離群點和其鄰點的差值D與數(shù)據(jù)全距R相除，求D/R比值，D/R=1/3為臨界值，若D/R≥1/3，則該疑似離群點為離群值，應予以剔去。若有2個或以上的疑似離群點，將最小的疑似離群點作上述處理，若D/R≥1/3，則均為離群值，全部剔去；若D/R<1/3，則保留所有數(shù)據(jù)，剔除后須另外補齊體檢健康者例數(shù)至120例[11-13]。

1.3.4新建參考區(qū)間的驗證

1.3.4.1隨機收集20例體檢標本，統(tǒng)計各參考個體檢測值，與新建立的參考區(qū)間比較，計算比率R

若R值≥95%，則生物參考區(qū)間或臨床決定值被驗證[14-15]。

1.3.4.2采用1.3.2中的70例患者及20例確診靜脈血栓或血友病的患者標本驗證新建參考區(qū)間的適用性。

2 結 果

2.12種試劑檢測APTT和Ⅷ因子的結果進行正態(tài)性檢驗分析 回顧性分析本實驗室近期1 824例數(shù)據(jù)，運用SPSS軟件進行正態(tài)性檢驗，結果顯示,APTT ACTIN、APTT FSL和Ⅷ FSL均不符合正態(tài)分布，因此,2組間采用χ2檢驗進行百分率的比較。

2.2APTT和Ⅷ因子分別使用2種試劑檢測陽性率的比較 取20例標本分別使用APTT ACTIN和APTT ACTIN FSL試劑檢測APTT，采用APTT-ACTIN的參考區(qū)間20.0～40.0 s作為判斷標準，APTT FSL和APTT ACTIN的陽性率分別為15.0%和60.0%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，二者的陰陽性符合率為55.0%。取70例標本分別使用APTT ACTIN和APTT ACTIN FSL試劑檢測Ⅷ因子，采用Ⅷ ACTIN的參考區(qū)間70%～150%作為判斷標準，Ⅷ FSL和Ⅷ ACTIN的陽性率分別為61.4%和30.0%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，二者的陰陽符合率為68.6%。見表1。

表1 2種試劑檢測APTT和Ⅷ因子陽性率的比較(使用原參考區(qū)間)[%(n/n)]

注：與ACTIN試劑比較，aP<0.01。

2.3APTT和Ⅷ因子使用APTT ACTIN FSL試劑檢測后分別重新建立新的生物參考區(qū)間 按照實驗室原用APTT ACTIN檢測的參考區(qū)間20.0～40.0 s和Ⅷ ACTIN檢測的參考區(qū)間70%～150%進行判斷，計算120 例入選合格體檢者APTT的R值為100.0%(120/120)，Ⅷ因子的R值僅為79.2%(95/120)。采用百分位數(shù)法2.5%和97.5%的參考限作為生物參考區(qū)間，確定APTT FSL的新生物參考區(qū)間為25.2～32.6 s， Ⅷ FSL的新生物參考區(qū)間為60%～189%。

2.4使用APTT ACTIN FSL試劑及新生物參考區(qū)間進行性別分組比較R值 67例男性體檢者及53例女性體檢者2組之間APTTT FSL的R值分別為98.5%和96.2%，Ⅷ FSL的R值分別為95.5%和96.2%，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 使用APTT ACTIN FSL試劑及新生物參考區(qū)間進行性別分組比較R值[%(n/n)]

注：男女性比較，aP>0.05。

2.5隨機選取20例體檢標本驗證新參考區(qū)間的適用性 隨機選取20例體檢標本使用新參考區(qū)間進行驗證，APTT FSL的R值為95.0%(19/20),Ⅷ FSL的R值為100.0%(20/20)，所有驗證的R值均≥95.0%。

2.6用普通患者標本驗證參考區(qū)間的適用性 使用APTT ACTIN試劑采用原參考區(qū)間20.0～40.0 s及70%～150%，使用APTT ACTIN FSL試劑采用新生物參考區(qū)間25.2～32.6 s及60%～189%，分別重新對2.2中標本APTT和Ⅷ因子的檢測結果進行陰陽性判斷，20例標本APTT FSL和APTT ACTIN的陽性率分別為55.0%和60.0%,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且二者陰陽符合率達到95.0%，顯著升高(P<0.01)；70例標本Ⅷ FSL和Ⅷ ACTIN的陽性率為40.0%和30.0%，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，二者陰陽性符合率為90.0%，明顯升高(P<0.01)。見表3。

表3 2種試劑檢測APTT和Ⅷ因子陽性率的比較(使用新參考區(qū)間)[%(n/n)]

注：aP>0.05，bP<0.01。

2.7用確診疾病患者的結果驗證參考區(qū)間是否合適 采用新的參考區(qū)間對15例靜脈血栓及5例血友病患者APTT及Ⅷ因子結果進行分析判斷，結果顯示，所有靜脈血栓患者的APTT均<25.2 s，Ⅷ因子均>189%；所有血友病患者的APTT均>32.6 s，Ⅷ因子均<60%，且無漏診病例出現(xiàn)。

3 討 論

2018年以來，Siemens公司為了更好地提升產品的品質，陸續(xù)將APTT ACTIN試劑升級為APTT ACTIN FSL試劑，試劑成分的主要變化是在APTT ACTIN原有的磷脂成分兔腦粉中增添了提純的大豆粉。廠家聲明，APTT ACTIN FSL試劑與APTT ACTIN相比較具有更好的因子靈敏度和狼瘡抗凝物靈敏度等優(yōu)點。然而，試劑成分的變化是否會影響APTT及Ⅷ因子的檢測結果，使用APTT ACTIN試劑檢測APTT及Ⅷ因子時的生物參考區(qū)間是否仍然適用于新試劑，是每位檢驗工作者需要重點關注的事情，本實驗室為APTT ACTIN FSL試劑對APTT及Ⅷ因子檢測結果的影響進行了相關試驗研究。

回顧性分析本實驗室近期1 824例數(shù)據(jù)后發(fā)現(xiàn)，APTT ACTIN、APTT FSL和Ⅷ FSL均不符合正態(tài)分布，因此，2組間的比較均采用百分率進行比較。研究表明，當試劑升級為FSL之后，如果仍然使用原來APTT ACTIN和Ⅷ ACTIN的生物參考區(qū)間(分別為20.0～40.0 s及70%～150%)，2種試劑檢測結果的陰陽性符合率太低(分別為55.0%和68.6%)，將會嚴重影響臨床診療判斷，無法滿足臨床需求。為此，實驗室選取120例符合納入標準的健康體檢者，雖然APTT的R值達到了100.0%，但Ⅷ因子的R值僅為79.2%，必須重新建立新的生物參考區(qū)間。

重新建立APTT FSL和Ⅷ FSL的生物參考區(qū)間分別為25.2～32.6 s和60%～189%。改用新參考區(qū)間之后，2種試劑檢測結果的陰陽性符合率均明顯升高(P<0.01)，且均≥90.0%，120例健康體檢者男女兩組之間的R值亦無差異(P>0.05)。選取20例體檢者對新參考區(qū)間進行驗證，R值均≥95.0%，20例確診靜脈血栓或血友病的患者標本均無漏診/誤診病例，經(jīng)驗證，新建參考區(qū)間適用有效。另外，在比較分別使用2種試劑后APTT及Ⅷ因子的生物參考區(qū)間時發(fā)現(xiàn)，當將試劑升級為APTT ACTIN FSL之后，APTT的參考區(qū)間范圍比使用APTT ACTIN試劑時明顯變窄，而Ⅷ因子的參考區(qū)間范圍明顯變寬，說明APTT ACTIN FSL試劑在正常標本的反應性較APTT ACTIN試劑更為穩(wěn)定，凝固時間的變化對應于Ⅷ因子的幅度變化也更為合適，進而導致Ⅷ因子的參考范圍更寬一些，由此也證實廠家聲明的APTT ACTIN FSL試劑具有更好的因子靈敏度的優(yōu)點。

4 結 論

為了降低臨床漏診及誤診風險，在使用Siemens公司APTT ACTIN試劑升級后的APTT ACTIN FSL試劑時，實驗室檢測APTT及Ⅷ因子時應修改或重新建立新的生物參考區(qū)間，并進行驗證。