胃功能三項(xiàng)、腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合13 C呼氣試驗(yàn)在胃早癌篩查體檢中的臨床價(jià)值

茅溢恒，陸維，劉燕

胃癌居全世界最常見癌癥死亡第2位的消化道惡性腫瘤，在我國(guó)是癌癥相關(guān)性死亡數(shù)的第3位。據(jù)資料顯示，經(jīng)手術(shù)治療后我國(guó)胃癌患者的5年生存率低于50%，若胃癌早期被診斷，黏膜和黏膜下層的癌細(xì)胞經(jīng)對(duì)癥治療后，患者的5年生存率高于90%［1-2］。故早診斷、早治療能有效降低胃癌患者的死亡率。電子胃鏡活檢雖是胃癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其侵入性篩查成本高，很難大范圍普查及進(jìn)行隨訪工作。近年來發(fā)現(xiàn)胃黏膜病變標(biāo)記物血清胃蛋白酶原（PG）在胃癌早期表現(xiàn)出特異性變化，有較高的篩查價(jià)值。其中，PGⅠ、PGⅡ能反映胃黏膜的病變狀態(tài)，而PGⅠ/PGⅡ（PGR）值能反映胃黏膜形態(tài)和功能［3-4］，同時(shí)胃泌素（G-17）會(huì)造成高胃泌素血癥繼而引發(fā)胃癌。故胃功能三項(xiàng)（PGⅠ、PGⅡ、G-17）被用來篩選早期胃癌、評(píng)估術(shù)后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的情況，彌補(bǔ)了胃鏡的不足。此外，血清腫瘤標(biāo)志物（TM）檢測(cè)也被胃癌早期篩查普遍應(yīng)用。目前常用檢查指標(biāo)有癌胚抗原（CEA）、糖類抗原199（CA199）、糖類抗原242（CA242）［5］。本研究基于血清胃功能三項(xiàng)與TM相關(guān)指標(biāo)輔助胃癌患者13C呼氣試驗(yàn)，探討其在胃癌篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

通過我院體檢信息管理系統(tǒng)以及醫(yī)院科研平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)，選取2016年8月至2018年3月在我院體檢篩查的166例體檢者，均在體檢中心經(jīng)胃鏡檢查確診的胃癌患者38例為胃癌組。其中男26例，女12例，年齡45～74歲，平均（56.23±8.48）歲。選取同期胃良性疾病患者78例為對(duì)照組，其中男54例，女24例，年齡44～76歲，平均（55.35±8.76）歲；病情類型：淺表性胃炎24例，萎縮性胃炎20例，胃潰瘍10例，其他24例。同時(shí)選取胃黏膜正常的健康者70例為正常組，其中男48例，女32例，年齡45～75歲，平均（55.58±8.29）歲。以上所有患者均行胃鏡與胃黏膜活檢組織病理學(xué)檢查確認(rèn)每位入選者胃部情況。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬同意并簽署知情同意書。三組的年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡25～80歲，性別不限；②未服用消化道系統(tǒng)的藥物或抗腫瘤治療者；③每組入選者均確診對(duì)應(yīng)的胃部情況；④無(wú)消化道手術(shù)史者。

（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①心肺功能嚴(yán)重障礙者；②有肝、腎功能衰竭史者；③臨床資料不完整者，或中途退出者。

1.3 方法

所有體檢者均嚴(yán)格按要求空腹12 h以上，進(jìn)行清晨靜脈采血5 mL，血清3 500 r/min離心5 min分離后，在檢驗(yàn)室嚴(yán)格按照操作說明以及標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行，各儀器運(yùn)行良好.

（1）胃功能三項(xiàng)：采用ELISA法定量測(cè)定血清中的G-17含量（上海美谷分子儀器有限公司提供的SpectraMax iD5型多功能酶標(biāo)儀），采用時(shí)間分辨熒光免疫法對(duì)PGⅠ、PGⅡ（上海新波公司Anytest 2000半自動(dòng)時(shí)間分辨熒光測(cè)定儀）進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)算PGR。PGⅠ、PGⅡ定量檢測(cè)試劑盒（批準(zhǔn)文號(hào)：2400024、2400282）。詳細(xì)操作步驟：將目標(biāo)抗體包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)抗體，將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記和親和素，再次徹底洗滌后加入3，3′，5，5′-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

（2）腫瘤標(biāo)志物：采用發(fā)光法檢測(cè)TM相關(guān)指標(biāo)（CEA、CA199、CA242）（上海勤翔提供的CHTN-0657型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑）。詳細(xì)操作步驟：已包被了抗體的塑料微珠試劑中，加入待測(cè)標(biāo)本后，經(jīng)溫育，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體、形成“抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物”。然后將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維柱上，用緩沖液洗滌，沒有結(jié)合的抗原、酶標(biāo)抗體被洗掉，結(jié)合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜的上方。這時(shí)再加入底物：4-甲基傘型酣磷酸鹽（4-Mup）。酶標(biāo)抗體上的堿性磷酸酶將4-Mup分解，脫磷酸后形成甲基傘型酣（4-Mu），它在365 nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448 nm的熒光，經(jīng)過熒光讀數(shù)儀的記錄、放大，計(jì)算出所測(cè)物質(zhì)的含量。

（3）采用北京賽爾福知心科技有限公司生產(chǎn)的WLD-600C型呼氣試驗(yàn)測(cè)試儀進(jìn)行13C呼氣試驗(yàn)，其超基準(zhǔn)值（delta over baseline，DOB）正常參考值為4‰。

1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參考試劑（中核海得威生物提供試劑）說明書標(biāo)準(zhǔn)：PGⅠ＜60 ng/mL、PGR＜6.0、G-17＞7 pmol/L或＜2 pmol/L、CEA＞5.0 ng/mL、CA199＞35 U/mL、CA242＞22 U/mL判為陽(yáng)性，PGI＜60 ng/mL且PGR＜6.0判為PG陽(yáng)性。13C呼氣試驗(yàn)測(cè)試值＞本底值的超基底值（DOB）5.0為陽(yáng)性。對(duì)于聯(lián)檢中至少2個(gè)指標(biāo)陽(yáng)性即判為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)水平用表示，多組間比較采用單因素方差分析；兩組間比較采用t檢驗(yàn)。13C呼氣試驗(yàn)、臨床分期、分化程度及相關(guān)指標(biāo)的診斷效能用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血清胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)水平比較

胃癌組的胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)水平與對(duì)照組、正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組與正常組以上指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 3組血清胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)水平比較（±s）

表1 3組血清胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)水平比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與對(duì)照組比較，＃P＜0.05

2.2 13 C呼氣試驗(yàn)與觀察組胃功能三項(xiàng)水平關(guān)系

胃癌組經(jīng)13C呼氣試驗(yàn)陽(yáng)性患者的PG II、G-17水平均高于陰性患者，而PG I、PGR值低于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 13 C呼氣試驗(yàn)與胃癌組胃功能三項(xiàng)水平關(guān)系（±s）

表2 13 C呼氣試驗(yàn)與胃癌組胃功能三項(xiàng)水平關(guān)系（±s）

注：*與陰性患者比較，P＜0.05

2.3 胃癌多項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)的診斷效能比較

13C呼氣試驗(yàn)、胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)各單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)早期胃癌的診斷效能均較低，但胃功能三項(xiàng)與TM相關(guān)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能明顯提高（P＜0.05），尤其是13C呼氣試驗(yàn)＋胃功能三項(xiàng)＋TM相關(guān)指標(biāo)聯(lián)合的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確率分別高達(dá)89.47%、97.97%、96.23%（P＜0.05），故臨床上可聯(lián)合多種單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)有助于提高胃癌早期診斷結(jié)果的準(zhǔn)確率。見表3。

3 討論

胃癌是病發(fā)于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，我國(guó)胃癌發(fā)病率、病死率均較高，患者年齡多40～60歲分布，但早期胃癌的檢出率為5%～20%［6］。這是由于胃癌早期無(wú)顯著臨床表現(xiàn)，在確診時(shí)病情已發(fā)展至晚期，錯(cuò)失了最佳的治療時(shí)機(jī)，嚴(yán)重地影響患者的生命安全與增加家庭、社會(huì)的負(fù)擔(dān)［7］。

血清PG由PGI、PGII 2種亞型組成，是一種天門冬氨酸蛋白酶前體的特異性指標(biāo)；PGI主要由胃底主細(xì)胞、頸黏液細(xì)胞分泌，PGⅡ還可由賁門腺、胃竇幽門腺等消化道分泌腺分泌，故PG的主要來源于胃［8］。胃部病變的重要特征為胃黏膜萎縮，提高早期胃癌發(fā)病率，同時(shí)胃黏膜也會(huì)出現(xiàn)相關(guān)病理變化，引起PG水平隨之改變。胃黏膜萎縮會(huì)降低主細(xì)胞與腺體數(shù)量，引起其分泌PG I能力下降，同時(shí)胃黏膜的結(jié)構(gòu)改變，加重PGⅠ分泌能力降低，而成熟腺細(xì)胞代償分泌PGⅡ變化較小，導(dǎo)致PGR值減?。?］。由胃竇部區(qū)域G細(xì)胞合成的一種多肽激素G-17可刺激胃酸分泌，影響幽門部的功能，在胃癌的診斷中不可或缺。故血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、G-17被認(rèn)為是“血清學(xué)活檢”，反映胃黏膜功能和狀態(tài)。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料顯示，胃功能三項(xiàng)指標(biāo)篩查胃癌早期發(fā)揮重要的作用，將早期胃癌診斷率提高至80% 以上［10-11］。魏華等［12］研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清PGⅠ、PGR水平明顯低于健康者，G-17水平較高，同時(shí)楊闊等［13］定量檢測(cè)早期胃癌患者血清PGⅠ、PGR水平明顯低于胃潰瘍組、健康組，而PGⅡ與G-17水平明顯較高。本研究顯示，胃癌患者的胃功能PGⅠ、PGR水平明顯低于胃良性疾病患者與健康者，而PGⅡ與G-17水平明顯高于胃良性疾病患者與健康者，同時(shí)胃良性疾病患者與健康者的胃功能三項(xiàng)指標(biāo)比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與以上研究結(jié)果一致。基于以上結(jié)果，本研究引入13C呼氣試驗(yàn)評(píng)估胃癌患者陽(yáng)性率情況，結(jié)果顯示經(jīng)13C呼氣試驗(yàn)陽(yáng)性患者的PGⅡ及G-17水平均高于陰性患者，而PG I、PGR值低于陰性患者，進(jìn)一步提高胃功能三項(xiàng)指標(biāo)的診斷率，有較高的臨床指導(dǎo)價(jià)值。

表3 胃癌相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)的診斷效能比較［n（%）］

近年來，隨著TM在惡性腫瘤診斷方面明顯提高了臨床診斷的準(zhǔn)確率而受到廣泛關(guān)注?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，TM在腫瘤發(fā)生、增生或與宿主相互作用過程中生成、釋放的一種物質(zhì)，分布于機(jī)體組織、體液，定性地反映腫瘤情況，給腫瘤診斷提供一定的依據(jù)［14］。目前，TM主要包括CEA、CA199、CA242。在腫瘤疾病的患者血清CEA水平會(huì)隨病情嚴(yán)重程度而逐漸上升，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于健康人，是一種比較重要的TM［15-18］；CA199多分布在腸、胰腺等上皮細(xì)胞的糖蛋白中，胰腺癌、結(jié)腸癌等患者的CA199水平會(huì)異常升高，故CA199多被臨床選擇為TM，故通過CA199水平值可評(píng)估患者是否患腫瘤疾?。?5-18］。大量資料表明，腫瘤疾病患者的CA242水平高于健康者［15-18］。故TM相關(guān)指標(biāo)CEA、CA242、CA199作為臨床診斷癌癥的一種有效方法，有效評(píng)估患者病情，具有較高的診斷價(jià)值。本研究顯示，胃癌患者的TM 相關(guān)指標(biāo)CEA、CA242、CA199水平明顯高于胃良性疾病患者與健康者，而胃良性疾病患者與健康者的TM相關(guān)指標(biāo)比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

最后，本研究針對(duì)以上診斷指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)13C呼氣試驗(yàn)、胃功能三項(xiàng)、TM相關(guān)指標(biāo)各單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)早期胃癌的診斷效能均較低，但PG I＋PGR與TM相關(guān)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能明顯提高，尤其是13C呼氣試驗(yàn)＋胃功能三項(xiàng)＋TM相關(guān)指標(biāo)聯(lián)合的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確率分別高達(dá)89.47%、97.97%、96.23%，結(jié)果表明臨床上可聯(lián)合多種單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)有助于提高胃癌早期診斷結(jié)果的準(zhǔn)確率。同時(shí)也有利于部分腫瘤疾病的后續(xù)監(jiān)測(cè)，以及預(yù)后評(píng)估，指導(dǎo)臨床對(duì)癥治療，有較高的應(yīng)用價(jià)值［19-20］。

綜上所述，胃功能三項(xiàng)、腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合13C呼氣試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)早期胃癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確率均較低，而臨床上聯(lián)合多種單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)有助于提高胃癌早期診斷結(jié)果的準(zhǔn)確率并評(píng)估病情進(jìn)展。