蜈蚣草化學(xué)成分的研究

韋 迪 李 倩袁名睿萬近福李月婷王永林?

（1.貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽550004； 2.云南省藥物研究所，云南 昆明650111； 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴安新區(qū)550025； 4.貴州益佰制藥股份有限公司，貴州 貴陽550008）

蜈蚣草Pteris vittataL.為蕨類植物門、鳳尾蕨科、鳳尾蕨屬植物，別名牛肋巴、舒筋草、長葉甘草蕨、蜈蚣蕨，生長在山坡、路邊的鈣質(zhì)土或石灰?guī)r壁縫中，廣范分布于中國熱帶和亞熱帶?！度珖胁菟巺R編》 記載，其性味淡、平，具有祛風(fēng)活血、解毒殺蟲的作用；主要用來防治流行性感冒、跌打損傷、風(fēng)濕疼痛、痢疾；外用于治蜈蚣咬傷、疥瘡［1］。目前國內(nèi)外關(guān)于蜈蚣草的研究主要圍繞著其對砷富集及環(huán)境的治理作用［2］，而對蜈蚣草化學(xué)成分的研究則較少，僅侯遠(yuǎn)鑫［3］、殷帥文［4］對其化學(xué)成分進(jìn)行報(bào)道，本課題組利用多種色譜技術(shù)對其化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，最終從其乙醇提取物中分離得到11 個化合物，其中，化合物1～4為黃酮類，化合物7～11 為酚酸類，化合物2～11均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Bruker-600 MHz 核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；MAT-95 型質(zhì)譜儀（美國Thermo Finnigan公司）；高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；半制備HPLC 色譜柱YMC-Pack ODS-A 色譜柱、C18反向材料（美國YMC 公司）；葡聚糖凝膠（瑞典Ge healthcare Bio-Sciences AB 公司）；聚酰胺樹脂（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；HPD-100 和D941大孔吸附樹脂（滄州寶思吸附材料有限公司）；柱色譜用硅膠（200～300 目）、薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）。

蜈蚣草全草2014 年8 月12 日采于昭通威信，自然陰干，經(jīng)云南省藥物研究所資源室邱斌副高級工程師鑒定為蜈蚣草Pteris vittataL.的全草，標(biāo)本（wgc-20140812） 收藏于云南省藥物研究所資源研究室。

2 提取與分離

自然干燥的蜈蚣草全株（15 kg） 用60%乙醇160 L 回流提取2 h，分別提取3 次，合并提取液后濃縮至無醇，通過HPD-100 型大孔吸附樹脂柱層析后濃縮干燥，得水流份1 006.5 g、30% 乙醇流份560.3 g、70%乙醇流份460.7 g。取70%乙醇流份100 g，采用聚酰胺柱色譜分離，依次用乙醇-水（1 ∶10、3 ∶10、5 ∶10、7 ∶10、9.5 ∶10） 梯度洗脫，合并相同流份，濃縮得到5 個流份（WJ1～WJ5）。WJ2 （20 g） 經(jīng)硅膠柱色譜分離、重結(jié)晶后得化合物2 （216.9 mg）、3 （19.8 mg）；WJ2 （20 g） 通過硅膠柱、凝膠柱色譜分離得化合物4（493.7 mg）、1 （93.7 mg）；WJ9 （12.4 g） 經(jīng)ODS 柱色譜粗分離后進(jìn)行半制備HPLC 分離，得化合物8 （20.0 mg）、9 （15.0 mg）；30%乙醇流份120 g 用D941 大孔吸附樹脂進(jìn)行脫色處理，得到樣品80 g，用硅膠柱色譜分離，依次用氯仿-甲醇（25 ∶1、20 ∶1、15 ∶1、10 ∶1、8 ∶1、5 ∶1、3 ∶1、2 ∶1、1 ∶1、0 ∶1） 梯度洗脫，合并相同流份得到 16 個組分 （WD1～WD16）。WD3（4.9 g）、WD5 （9.6 g） 分別用半制備HPLC 分離，得化合物10 （21 mg）、11 （30.7 mg）；WD8通過ODS 柱色譜分離后經(jīng)半制備HPLC 分離，得化合 物 5 （21.9 mg）、6 （19.8 mg）。WD12（3.76 g） 運(yùn)用凝膠柱色譜分離后進(jìn)行半制備HPLC 純化，得化合物10 （14.6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 淡黃色粉末；分子式C27H30O16，ESI-MSm／z： 611 ［M+H］+。1H-NMR （DMSO-d6，500 MHz）δ：12.59 （1H，s，-OH），7.53 （1H，brd，J＝8.3 Hz，H-6′），7.51 （1H，brs，H-2′），6.82（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5′），6.37 （1H，brs，H-8），6.17 （1H，brs，H-6），5.33 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1″），4.40 （1H，brs，Rha-H-1），0.97 （3H，d，J＝6.0 Hz，Rha-H-6）；13C-NMR （DMSO-d6，125 MHz）δ： 156.4 （C-2），133.2 （C-3），177.4 （C-4），156.6 （C-5），98.7 （C-6），164.1 （C-7），93.6 （C-8），121.6 （C-1′），115.2 （C-2′），144.7 （C-3′），148.4 （C-4′），116.2 （C-5′），121.1 （C-6′），74.1（C-2″），76.4 （C-3″），70.5 （C-4″），76.4 （C-5″），67.0 （C-6″），101.1 （C-1?），70.5 （C-2?），70.4（C-3?），71.8 （C-4?），68.3 （C-5?），17.8 （C-6?）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］ 基本一致，故鑒定為蘆丁。

化合物2： 黃色針狀結(jié)晶；分子式C21H20O11，ESI-MSm／z： 471 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，CH3OD）δ：8.05 （1H，d，J＝9.75 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J＝8.9 Hz，H-3′），6.88 （1H，d，J＝8.9 Hz，H-5′），8.05 （1H，d，J＝9.75 Hz，H-6′），6.38（1H，s，H-8），6.19 （1H，s，H-6），5.24 （1H，d，J＝7.45 Hz，H-1″），3.69 （1H，dd，J＝11.8，2.3 Hz，H-6″a），3.53 （1H，dd，J＝11.9，5.6 Hz，H-6″b）；13C-NMR （125 MHz，CH3OD）δ：158.5 （C-2），135.4 （C-3），179.5 （C-4），163.1 （C-5），99.9（C-6），166.0 （C-7），94.7 （C-8），159.0 （C-9），105.7 （C-10），122.8 （C-1′），132.3 （C-2′），116.1 （C-3′），161.5 （C-4′），116.1 （C-5′），132.3（C-6′），104.0 （C-1″），75.7 （C-2″），78.0 （C-3″），71.3 （C-4″），78.4 （C-5″），62.6 （C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3： 淡黃色粉末；分子式C27H30O15，ESI-MSm／z： 617 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，CH3OD）δ：8.06 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，H-6′），6.90 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，H-5′），6.42 （1H，brs，H-8），6.21 （1H，brs，H-6），5.09 （1H，d，J＝7.2 Hz，H-1″），4.51 （1H，brs，H-1?），3.80（1H，d，J＝9.6 Hz，H-6″），1.12 （3H，d，J＝6.2 Hz，H-6?）；13C-NMR （125 MHz，CH3OD，）δ：159.6 （C-2），135.5 （C-3），179.4 （C-4），163.0（C-5），100.1 （C-6），166.2 （C-7），94.9 （C-8），158.6 （C-9），105.7 （C-10），122.7 （C-1′），132.4（C-2′），116.2 （C-3′），161.5 （C-4′），116.2 （C-5′），132.4 （C-6′），104.6 （C-1″），75.6 （C-2″），78.0 （C-3″），71.4 （C-4″），77.2 （C-5″），68.7（C-6″），102.4 （C-1?），72.0 （C-2?），72.2 （C-3?），73.8 （C-4?），69.7 （C-5?），17.9 （C-6?）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物4： 黃色粉末；分子式C21H18O12，ESIMSm／z： 485 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 12.51 （1H，s，5-OH），10.3 （1H，s，7-OH），9.80 （1H，s，4′-OH），8.03 （2H，d，J＝8.9 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J＝8.9 Hz，H-3′，5′），6.42 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.20（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），5.48 （d，J＝7.3 Hz，H-1″）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 156.4 （C-2），132.9 （C-3），177.2 （C-4），161.2 （C-5），98.8 （C-6），164.3 （C-7），93.8 （C-8），156.4 （C-9），103.4 （C-10），120.6 （C-1′），130.9 （C-2′），115.2 （C-3′），115.2 （C-4′），115.2 （C-5′），130.9（C-6′），101.1 （C-1″），73.9 （C-2″），75.7 （C-3″），71.5 （C-4″），75.8 （C-5″），170.0 （C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

化合物5： 白色粉末；分子式C19H32O7，ESIMSm／z： 395 ［M+Na］+，411 ［M+K］+。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ： 4.30 （1H，M，Glc-1′），2.04 （3H，s，H-10），1.48 （3H，s，H-13），0.91（6H，s，H-11，12）；13C-NMR （125 MHz，C5D5N）δ： 39.4 （C-1），46.9 （C-2），71.8 （C-3），37.8（C-4），125.1 （C-5），136.7 （C-6），22.1 （C-7），44.2 （C-8），207.7 （C-9），29.7 （C-10），28.1 （C-11），29.5 （C-12），19.7 （C-13），102.5 （C-1′），75.4 （C-2′），78.6 （C-3′），71.4 （C-4′），78.7 （C-5′），62.9 （C-6′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］ 基本一致，故鑒定為淫羊藿次苷B6。

化合物6： 白色蠟狀物；分子式C7H14O5，ESIMSm／z： 177 ［M-H］-。1H-NMR （500 MHz，C5D5N）δ： 1.18 （3H，t，J＝7.0 Hz），3.67 （1H，dq，J＝9.5，7.0 Hz），4.06 （dq，J＝9.5，7.0 Hz），4.69 （1H，d，J＝7.6 Hz，C1′-H），3.67 （1H，brd，J＝11.3 Hz，C5′-Ha），4.32 （1H，dd，J＝11.2，5.1 Hz，C5′-Hb）；13C-NMR （125 MHz，C5D5N）δ：65.1 （C-1），15.6 （C-2），105.2 （C-1′），75.0 （C-2′），78.5 （C-3′），71.2 （C-4′），67.3 （C-5′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［10］ 基本一致，故鑒定為ethyl β-D-xylopyranoside。

化合物7： 白色晶體；分子式C14H18O6，ESIMSm／z： 305 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，C5D5N）δ： 7.42 （2H，d，J＝7.5 Hz，H-2，6），7.36 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-3，5），6.72 （1H，q，J＝10.9，17.6 Hz，H-7），5.68 （2H，m，H-8），5.12 （1H，d，J＝10.8 Hz）；13C-NMR （125 MHz，C5D5N）δ： 132.3 （C-1），128.3 （C-2），117.4 （C-3），158.9 （C-4），117.4 （C-5），128.3 （C-6），137.1 （C-7），112.7 （C-8），102.5 （C-1′），75.4（C-2′），79.4 （C-3′），71.7 （C-4′），78.9 （C-5′），62.8 （C-6′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］ 基本一致，故鑒定為苯乙烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8： 白色晶體；分子式C9H11NO2，ESIMSm／z： 166 ［M+H］+。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 2.82 （1H，q，J＝8.4 Hz，14.3 Hz，H-2），3.16 （1H，d，J＝4.8 Hz，H-3a），3.13 （1H，d，J＝4.4 Hz，H-3b），7.21 （2H，m，H-5，9），7.27 （2H，m，H-6，8），7.25 （1H，m，H-7）；13CNMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 169.2 （C-1），55.6（C-2），37.1 （C-3），137.8 （C-4），129.3 （C-5），128.3 （C-6），126.4 （C-7），128.3 （C-8），129.3（C-9）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 基本一致，故鑒定為苯丙氨酸。

化合物9： 白色蠟狀物；分子式C12H16O6，ESI-MSm／z： 279 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，C5D5N）δ： 7.40 （1H，m H-2），7.31 （1H，m，H-3），7.31 （1H，m，H-5），7.40 （1H，m，H-6），Glu： 5.65 （1H，dJ＝7.5 Hz，H-1），4.39 （1H，m，H-2），4.60 （1H，m，H-3），4.18 （1H，m，H-4），4.47 （1H，m，H-5），4.43 （2H，m，H-6）；13CNMR （500 MHz，C5D5N）δ： 159.2 （C-1），130.4（C-2），117.4 （C-3），122.7 （C-4），117.4 （C-5），130.4 （C-6），62.8 （C-1′），79.4 （C-2′），79.0（C-3′），75.4 （C-4′），71.7 （C-5′），62.8 （C-6′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］ 基本一致，故鑒定為phenyl-β-D-glucopyranoside。

化合物10： 白色蠟狀物；分子式C13H18O8，ESI-MSm／z： 325 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，C5D5N）δ： 7.17 （1H，dd，J＝1.4 Hz，4.2 Hz，H-2），7.56 （1H，d，J＝8.7 Hz），7.07 （H-5，1H，d，J＝2.7 Hz，H-6），3.70 （1H，d，J＝3.7，-OCH3），Glu： 5.58 （1H，d，J＝7.31 Hz，H-1′），4.42 （1H，m，H-2′），4.62 （1H，m，H-3′），4.14 （1H，m，H-4′），4.54 （1H，m，H-5′），4.38 （2H，m，H-6′）；13C-NMR （125 MHz，C5D5N）δ： 143.8 （C-1），103.8 （C-2），149.5 （C-3），152.6 （C-4），109.8（C-5），116.9 （C-6），56.3 （-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］ 基本一致，故鑒定為4-羥基-2-甲氧基-苯基-β-D-葡萄糖苷。

化合物11： 白色粉末；分子式C26H32O11，ESIMSm／z： 543 ［M+Na］+。1H-NMR （500 MHz，C5D5N）δ： （H-1），7.25 （1H，m，H-2），3.78（1H，s，H-3），7.02 （1H，m，H-5），7.28 （1H，m，H-6），4.17 （1H，m，H-7），3.21 （1H，m，H-8），4.03 （2H，m，H-9），7.30 （1H，m，H-2′），3.80 （1H，s，H-3′），7.62 （1H，J＝13.4 Hz，H-5′），7.30 （1H，m，H-6′），4.59 （1H，m，H-7′），3.22 （1H，m，H-8′），4.43 （2H，m，H-9′），Glu：5.73 （1H，d，J＝6.8 Hz，H-1″）；13C-NMR （125 MHz，C5D5N）δ： 133.6 （C-1），111.4 （C-2），147.9 （C-3），148.4 （C-4），116.7 （C-5），116.9（C-6），86.6 （C-7），56.4 （C-8），71.8 （C-9），136.6 （C-1′），111.6 （C-2′），149.3 （C-3′） 148.4（C-4′），119.5 （C-5′），120.2 （C-6′），86.9 （C-7′），56.5 （C-8′），72.4 （C-9′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］ 基本一致，故鑒定為松脂醇-4″-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。