三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)在腫瘤中的研究進(jìn)展①

溫少迪 陳 云 沈 波

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，江蘇省腫瘤醫(yī)院，江蘇省腫瘤防治研究所，南京 210009)

隨著人類壽命的延長(zhǎng)，腫瘤日漸威脅人類健康，科學(xué)家對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制、致病因素以及腫瘤治療手段的研究也日漸深入，腫瘤的治療手段從手術(shù)、化療、放療、靶向治療進(jìn)入到免疫治療時(shí)代。雖然在臨床治療過(guò)程中有許多方案及藥物可以選擇，但不可避免地會(huì)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，且藥物更新速度遠(yuǎn)低于腫瘤耐藥的速度。多篇文獻(xiàn)報(bào)道腫瘤根治的困難性、臨床預(yù)后的轉(zhuǎn)歸及腫瘤的耐藥性與腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment，TME)密切相關(guān)[1,2]。三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(tertiary lymphoid structures,TLS)是位于非典型淋巴器官部位的異位淋巴組織，存在于腫瘤、感染性疾病、自身免疫疾病和器官移植等慢性炎癥組織周圍，但慢性炎癥部位形成的TLS不盡相同，發(fā)揮的功能也各有差異。在腫瘤中，TLS的形成象征免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)及對(duì)腫瘤的殺傷作用的增強(qiáng)，是患者生存和預(yù)后的積極因素。但在某些其他病理生理情況下，TLS形成則會(huì)導(dǎo)致不良預(yù)后，如在移植物抗排斥反應(yīng)中，免疫細(xì)胞浸潤(rùn)增多意味著對(duì)移植物的排斥和殺傷作用的增強(qiáng)，對(duì)移植物功能的發(fā)揮具有抑制作用。同樣的情況在自身免疫性疾病中也存在[3]。本文主要探討TLS在腫瘤中的作用，TLS是組成TME的重要因素，是腫瘤免疫應(yīng)答的直接啟動(dòng)部位，可以更好地誘導(dǎo)T細(xì)胞啟動(dòng)，防止T細(xì)胞衰竭或無(wú)能，其密度對(duì)腫瘤的預(yù)后有預(yù)測(cè)作用[4]。此外，腫瘤的治療對(duì)TLS也有一定影響。本文將對(duì)TLS的組成與結(jié)構(gòu)、識(shí)別與檢測(cè)、對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)作用及治療對(duì)TLS影響的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1 TLS的組成與結(jié)構(gòu)

1.1TLS的組成 TLS是異位淋巴細(xì)胞聚集形成的組織，有許多免疫細(xì)胞參與其組成，包括B細(xì)胞、濾泡狀樹突細(xì)胞(follicular dendritic cells，F(xiàn)DCs)、漿細(xì)胞、T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維網(wǎng)狀細(xì)胞(fibroblastic reticular cells，F(xiàn)RCs)等。不同細(xì)胞在免疫組化中可以被不同的標(biāo)記物染色，可用于對(duì)TLS的鑒定和識(shí)別。盡管對(duì)于最低有功能的TLS結(jié)構(gòu)的定義尚不明確，但Silva-Sanchez等[5]將間質(zhì)中的淋巴細(xì)胞聚集體(包括FDC,FRC,HEV)定義為TLS。事實(shí)上，TLS的發(fā)展經(jīng)歷了連續(xù)的成熟階段。已經(jīng)有文獻(xiàn)對(duì)TLS的發(fā)育過(guò)程有了初步的定義，認(rèn)為TLS可分為早期TLS、初級(jí)TLS及次級(jí)TLS。把含有高內(nèi)皮小靜脈(high endothelial venule，HEV)的TLS稱為早期TLS，含有HEV及FDC的TLS稱為初級(jí)TLS，含有HEV、FDC及生發(fā)中心(germinal center，GC)的TLS稱為次級(jí)TLS。在肺鱗癌中，只有含有GC的次級(jí)TLS具有對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)功能[6,7]。TLS與次級(jí)淋巴器官(secondary lymphoid organs，SLO)的形成有相似之處。TLS是由于感染、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、同種異體移植物識(shí)別和其他條件引發(fā)的持續(xù)性局部炎癥，被稱為TLS的組織在出生后在不可預(yù)測(cè)的位置形成，即TLS出現(xiàn)的部位并不確定，只有發(fā)生炎癥才會(huì)刺激TLS在局部產(chǎn)生；而SLO則形成于胚胎發(fā)育過(guò)程中的特定的位置，與抗原或炎癥無(wú)關(guān)，具有明確的細(xì)胞和分子間的作用機(jī)制[5,8]。已有多篇文獻(xiàn)證明TLS與SLO結(jié)構(gòu)類似，功能相近。

1.2TLS的形成過(guò)程 人類癌癥周圍的淋巴細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞局部產(chǎn)生CXC-趨化因子配體13(CXC- chemokine ligand 13,CXCL13)和細(xì)胞因子-7(IL-7)，CXCL-13和IL-7將淋巴組織誘導(dǎo)劑(lymphoid tissue inducer,LTi)募集到腫瘤組織部位[9]。T輔助細(xì)胞17 (T helper 17 cells，TH17)已被證明能夠在各種病理情況下替代LTi細(xì)胞啟動(dòng)TLS形成。這些細(xì)胞與局部基質(zhì)細(xì)胞相互作用，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)趨化因子募集淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞表達(dá)腫瘤壞死因子及維持基質(zhì)細(xì)胞分化的腫瘤壞死因子超家族第14個(gè)成員(the 14th member of tumor necrosis factor superfamily，TNFSF14)。LTi與基質(zhì)細(xì)胞通過(guò)淋巴毒素-α1β2配體(lymphotoxin-α1β2，LTα1β2)與淋巴毒素β受體(lymphotoxin-β receptor，LTβR)結(jié)合，基質(zhì)細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C，從而促進(jìn)高內(nèi)皮微靜脈(HEV)的發(fā)育[10]。HEV可以允許趨化因子、細(xì)胞因子等招募到的淋巴細(xì)胞進(jìn)入炎癥局部發(fā)揮作用。該信號(hào)通路還可促進(jìn)黏附分子分泌，如血管細(xì)胞黏附分子1、細(xì)胞間黏附分子1或黏膜尋址細(xì)胞黏附分子1。LTβ-LTβR信號(hào)和IL-17的共同作用導(dǎo)致多種趨化因子產(chǎn)生，特別是CXCL12、CXCL13、CC-趨化因子配體19(CC-chemokine ligand 19，CCL19)和CCL21。這些趨化因子共同誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞上LTα1(lymphotoxin-α1，LTα1)和LTβ2(Lymphotoxin-β2，LTβ2)表達(dá)，從附近的HEV招募淋巴細(xì)胞，并調(diào)控其進(jìn)入T細(xì)胞和B細(xì)胞區(qū)[11]。其中CD3+T細(xì)胞區(qū)主要含有DC-溶酶體相關(guān)膜糖蛋白(DC-lysosome-associated membrane glycoprotein，DC-LAMP)和成纖維細(xì)胞網(wǎng)狀細(xì)胞(fibroblastic reticular cells，F(xiàn)RC);CD20+的B細(xì)胞區(qū)具有生發(fā)中心、漿細(xì)胞、抗體與腫瘤抗原和FDCs形成的免疫復(fù)合物。此外，雖然沒有證據(jù)表明TLS中存在有組織的淋巴傳入系統(tǒng)，但小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，TLS中存在向引流淋巴結(jié)排放抗原和免疫細(xì)胞的傳出淋巴管[12]。

1.3與TLS形成相關(guān)的趨化因子和細(xì)胞因子 與TLS形成相關(guān)的趨化因子和細(xì)胞因子有許多，誘導(dǎo)和刺激這些因子的產(chǎn)生可使TLS在腫瘤周圍形成，導(dǎo)致更多的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，這種對(duì)TME的改變會(huì)轉(zhuǎn)化為治療的有效性和良好的預(yù)后。以下將對(duì)幾個(gè)功能明確的趨化因子和細(xì)胞因子進(jìn)行闡述。Silina等[6]通過(guò)免疫熒光的方法發(fā)現(xiàn)CXCL13是由TLS周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞及75%的腫瘤細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，其可將LTi招募至腫瘤組織部位發(fā)揮作用。IL-7與CXCL13有相同的作用，IL-7的系統(tǒng)表達(dá)可在多個(gè)組織中觸發(fā)TLS(甚至是額外的SLO)產(chǎn)生[9]。IL-17被證明也與TLS形成相關(guān)，可直接觸發(fā)成纖維細(xì)胞表達(dá)CXCL13和CCL19，二者分別是形成B細(xì)胞濾泡和T細(xì)胞區(qū)所必需的趨化因子[13]；IL-17還可促進(jìn)CXCL8、CXCL9和CXCL10表達(dá)，這些炎癥趨化因子可有效地招募中性粒細(xì)胞。任何炎癥刺激產(chǎn)生TLS幾乎都通過(guò)LTi進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展，Rangel-Moreno等[14]發(fā)現(xiàn)阻斷IL-17對(duì)已經(jīng)產(chǎn)生的TLS幾乎沒有影響，但對(duì)淋巴毒素信號(hào)進(jìn)行阻斷會(huì)導(dǎo)致TLS溶解，說(shuō)明IL-17對(duì)TLS的啟動(dòng)很重要，但對(duì)TLS的維持卻沒有影響。CCL21由TLS內(nèi)的HEV分泌；CXCL12則由肺泡、穩(wěn)定的支氣管上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及TLS附近的上皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生。上述趨化因子在TLS從附近的HEV中招募淋巴細(xì)胞發(fā)揮重要作用。研究者對(duì)TLS組成和結(jié)構(gòu)的探索仍在繼續(xù)，與TLS相關(guān)的趨化因子、細(xì)胞、組織結(jié)構(gòu)之間的“秘密”正在被破譯。

2 TLS的識(shí)別及檢測(cè)

與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的細(xì)胞類型較多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同類型的腫瘤具有不同的TME。如何從組織中識(shí)別檢測(cè)和量化TLS是目前的熱點(diǎn)問(wèn)題，多篇文獻(xiàn)對(duì)此已有探索。目前的識(shí)別方式主要有通過(guò)HE染色后顯微鏡下識(shí)別致密淋巴組織聚集物；通過(guò)免疫組化對(duì)TLS的免疫細(xì)胞選擇性地顯示和定量；通過(guò)定量病理學(xué)方法對(duì)TLS進(jìn)行分析；通過(guò)免疫熒光分析TLS；以及用激光捕獲纖維切割TLS選擇基因表達(dá)譜。

對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色后，將致密的淋巴細(xì)胞組織聚集體定義為TLS，其密度計(jì)為每瘤周或每瘤內(nèi)TLS數(shù)量/mm2。TLS主要是腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumor-infiltrating lymphocytes，TILs)的聚集體，TILs的評(píng)估主要基于國(guó)際免疫腫瘤生物標(biāo)記物工作組的指南。由于TLS主要存在于腫瘤周圍，因此對(duì)TLS的評(píng)估主要通過(guò)侵襲腫瘤邊界內(nèi)的TILs水平，TILs評(píng)估排除了腫瘤內(nèi)的特定區(qū)域外，有壞死、壓碎偽影、纖維化和先前活檢部位的區(qū)域也被排除在外[15]。除顯微鏡下直接計(jì)數(shù)外，前沿(間質(zhì)-腫瘤交界線)總周長(zhǎng)的百分比也可用于腫瘤TLS數(shù)量的評(píng)估[16]。TLS由許多淋巴細(xì)胞組成，對(duì)TLS的識(shí)別、檢測(cè)和定位也可通過(guò)對(duì)淋巴細(xì)胞標(biāo)志物的染色來(lái)實(shí)現(xiàn)。雙重免疫組化通過(guò)CD20染色濾泡B細(xì)胞、CD21染色濾泡輔助DC、DC-LAMP染色mDC(mature dendritic cells，mDC)、CD3染色T細(xì)胞區(qū)域、PD-1染色濾泡輔助T細(xì)胞，之后將組織切片數(shù)字化為全切片圖像(whole-slide image，WSI)，用圖像分析軟件對(duì)這些WSI進(jìn)行分析，通過(guò)對(duì)大量組織切片上的細(xì)胞計(jì)數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)TLS的高通量定量研究。最后也可以從不同的WSI研究不同細(xì)胞類型之間的空間關(guān)系，并進(jìn)行圖像配準(zhǔn)步驟[17,18]。但對(duì)腫瘤組織中完全活躍的TLS的完整表征可能需要在同一組織切片上同時(shí)識(shí)別、定位和量化幾個(gè)免疫細(xì)胞群和亞群。免疫熒光法更容易獲得TLS的完整表征，在已報(bào)道的多篇文獻(xiàn)中，對(duì)TLS的鑒別、定位以及結(jié)構(gòu)的探索都使用了免疫熒光的方法[6,18-21]。如果進(jìn)行多色免疫熒光方法，則需要用光譜分解軟件處理所獲取的多光譜數(shù)據(jù)。這種方法可以同時(shí)檢測(cè)6個(gè)與核反染色相關(guān)的熒光生物標(biāo)志物，但這種方法過(guò)程耗時(shí)，試劑和圖像采集設(shè)備昂貴。定量病理學(xué)的方法對(duì)TLS進(jìn)行識(shí)別和定位可分析不同成熟階段的TLS，結(jié)合其他相關(guān)的TLS相關(guān)細(xì)胞類型，包括HEV和DC。為了區(qū)分不同的TLS成熟階段，需要分析CD20、CD21和CD23表達(dá)的最小有功能的組合。配體外周結(jié)節(jié)尋址蛋白和DC-LAMP可用來(lái)評(píng)估TLS中血管系統(tǒng)的位置以及mDC的表達(dá)[22]。

以上TLS檢測(cè)是深入研究TLS在不同解剖部位和病理背景下結(jié)構(gòu)、組成和免疫功能的手段。然而，原位確定TLS的存在并破譯其在局部微環(huán)境中的細(xì)胞和分子相互作用仍然是一個(gè)主要挑戰(zhàn)，因?yàn)檫@些無(wú)包膜的結(jié)構(gòu)會(huì)在炎癥條件下自發(fā)地出現(xiàn)在非淋巴組織和/或鄰近非淋巴組織內(nèi)。為了全面了解TLS在體內(nèi)與其環(huán)境之間的相互作用，需要特定的方法允許TLS在原位，即在其固有的組織微生態(tài)的背景下進(jìn)行分子表征。激光捕獲顯微解剖(laser capture microdissection，LCM)為此提供了一種相對(duì)快速和準(zhǔn)確的方法。它可在直接顯微可視化下將感興趣的組織區(qū)域從其自然組織微環(huán)境中分離出來(lái)并進(jìn)行常規(guī)分析。目前已有一種通用的LCM方法成功應(yīng)用于人肺腫瘤組織的TLS RNA圖譜分析。實(shí)驗(yàn)順序如下：冰凍組織制備；LCM分離；RNA提?。籖NA完整性評(píng)估；反轉(zhuǎn)錄cDNA生成；定時(shí)定量PCR分析[19]。該方法可以為不同類型哺乳動(dòng)物組織進(jìn)行廣泛的LCM和TLS分子分析提供基礎(chǔ)。

3 TLS與腫瘤預(yù)后的關(guān)系

腫瘤的預(yù)后與其分期、分級(jí)、惡性程度等因素密切相關(guān)。隨著人類癌癥進(jìn)入免疫治療時(shí)代，人們對(duì)TME的探索逐漸深入，發(fā)現(xiàn)TME中免疫細(xì)胞浸潤(rùn)是腫瘤預(yù)后的有利因素，TME中淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度反映該患者的預(yù)后及疾病的轉(zhuǎn)歸。TLS是腫瘤等慢性炎癥刺激部位淋巴細(xì)胞的聚集體，其密度等對(duì)腫瘤的預(yù)后具有預(yù)測(cè)作用。基于PD-1/PD-L1通路的免疫檢查點(diǎn)抑制劑的免疫治療也與TLS有關(guān)，Weinstein等[23]在小鼠肉瘤模型中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后的DC過(guò)表達(dá)T-bet及IL-36γ，將轉(zhuǎn)染后的DC治療性導(dǎo)入TME中可延緩腫瘤進(jìn)展，促進(jìn)TLS形成并抑制PD-1、CTLA-4和TIM-3表達(dá)。TLS對(duì)腫瘤預(yù)后有利，但腫瘤存在異質(zhì)性，不同類型腫瘤的免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度也存在差異。下文將以人類不同類型的腫瘤為例，綜述TLS與腫瘤預(yù)后的關(guān)系。

3.1TLS與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系 在乳腺癌中，Gu-Trantien等[24]在未經(jīng)治療的具有侵襲性的原發(fā)腫瘤中分離了浸潤(rùn)的CD4+T細(xì)胞進(jìn)行了全面的分子圖譜分析，發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)的T細(xì)胞亞群包括濾泡輔助T細(xì)胞(follicular helper T cell，Tfh)、Th1、Th2、Th17效應(yīng)記憶細(xì)胞和Treg細(xì)胞(regulatory T cells，Tregs)等，T細(xì)胞信號(hào)通路改變的特征使細(xì)胞因子/趨化因子的產(chǎn)生受到限制。Tfh(CD200，CXCL13，ICOS)和Th1(CD38，CXCL9，CXCL10，CXCL11，T-bet)的8個(gè)基因的表達(dá)在廣泛淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的腫瘤中具有明顯傾斜，有力地預(yù)測(cè)了生存期或術(shù)前對(duì)化療的反應(yīng)，表明TLS在乳腺癌中是一個(gè)有利的預(yù)后因素。Liu等[25]回顧性分析了248例乳腺癌患者TLS與預(yù)后的關(guān)系，該研究表明，TLS與TIL的臨床病理特征和生物標(biāo)志物的關(guān)系相似，其存在與TIL水平無(wú)關(guān)，可能是HER2+乳腺癌患者重要的有利預(yù)后指標(biāo)。Martinet等[26]在146例浸潤(rùn)性乳腺癌患者的回顧性隊(duì)列中發(fā)現(xiàn)高密度的腫瘤HEV與T、B淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)，且與較長(zhǎng)時(shí)間的無(wú)轉(zhuǎn)移、無(wú)病生存率和總生存率顯著相關(guān)。另外一項(xiàng)針對(duì)乳腺癌患者的研究分析了原發(fā)和轉(zhuǎn)移部位和4個(gè)轉(zhuǎn)移部位(肺、肝、腦和卵巢)LTi的百分比及TLS的存在情況。該研究表明，原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶激素受體陽(yáng)性、轉(zhuǎn)移灶腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞水平高且TLS陽(yáng)性的患者總體生存率明顯提高[27]。對(duì)TLS與乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)性的研究是在相對(duì)大的樣本中進(jìn)行的，多篇文獻(xiàn)表明乳腺癌患者的預(yù)后與TLS顯著相關(guān)。

3.2TLS與肺癌預(yù)后的關(guān)系 在肺癌中，Dieu-Nosjean等[28]采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)74例早期非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)石蠟包埋標(biāo)本染色后進(jìn)行回顧性研究，發(fā)現(xiàn)成熟DC的密度與良好的臨床結(jié)果(總體、疾病特異性和無(wú)病生存期)高度相關(guān)。DC在肺癌中主要存在于腫瘤誘導(dǎo)的支氣管相關(guān)淋巴組織中(tumor inducible bronchus associated lymphoid tissue， Ti-BALT)，提示Ti-BALT可能參與抗腫瘤免疫。在mDC浸潤(rùn)少的腫瘤中，腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞密度明顯降低，尤其是CD4+和T-bet+的Th1細(xì)胞密度明顯降低，mDC密度與TLS存在的結(jié)合是更好的肺癌臨床預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)[28]。Germain等[29]的研究提示，無(wú)論是手術(shù)治療的早期NSCLC患者還是接受化療的晚期NSCLC患者，高密度的濾泡B細(xì)胞都與長(zhǎng)期生存相關(guān)，濾泡B細(xì)胞和mDC密度相結(jié)合可確定具有最佳臨床結(jié)果的患者。B細(xì)胞與DC一起被T細(xì)胞包裹形成成熟的TLS，表明TLS與患者的長(zhǎng)期預(yù)后存在一定的相關(guān)性。在肺癌中只有存在生發(fā)中心的成熟TLS對(duì)患者預(yù)后有預(yù)測(cè)作用[6]。肺癌的預(yù)后與B細(xì)胞、mDC及T細(xì)胞密切相關(guān)，而這些細(xì)胞聚集成團(tuán)組成TLS，提示了肺癌中TLS對(duì)塑造TME的免疫特征的重要性以及TLS對(duì)良好預(yù)后的預(yù)測(cè)作用[6,30]。

3.3TLS與大腸癌預(yù)后的關(guān)系 在大腸癌中，一項(xiàng)涉及351名Ⅱ期和Ⅲ期大腸癌患者的連續(xù)隊(duì)列研究利用結(jié)直腸癌臨床前模型評(píng)估了TLS在淋巴細(xì)胞募集中的作用。結(jié)果顯示，人類結(jié)直腸癌和小鼠結(jié)直腸癌模型都存在組織化的TLS和HEV。在Ⅱ期結(jié)直腸癌患者中，TLS密度和TIL的浸潤(rùn)在預(yù)測(cè)較好的患者預(yù)后方面具有相關(guān)性和協(xié)調(diào)性[31]。TLS在識(shí)別低危險(xiǎn)因素的早期結(jié)直腸癌患者時(shí)有協(xié)同抗腫瘤免疫功能，提示了一種新的結(jié)直腸癌預(yù)后生物標(biāo)記物。此外，在對(duì)大腸癌預(yù)后預(yù)測(cè)因素的分析中發(fā)現(xiàn)，TLS分子譜的12個(gè)趨化因子(CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL8、CCL18、CCL19、CCL21、CXCL9、CXCL10、CXCL11和CXCL13)的基因亞集與TLS顯著相關(guān)，是獨(dú)立于腫瘤分期、位置、微衛(wèi)星不穩(wěn)定或穩(wěn)定性等導(dǎo)致患者存活率較長(zhǎng)的因素而存在的。上述研究表明TLS密度高的結(jié)腸癌患者相較TLS密度低的患者預(yù)后更好[31-35]。

TLS在乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、惡性黑色素瘤、卵巢癌、胃癌、胰腺癌和頭頸部鱗癌中均發(fā)揮預(yù)后預(yù)測(cè)的作用，TLS密度越高，浸潤(rùn)程度越高，成熟度越高，患者預(yù)后越好[36-43]。以上關(guān)于TLS的研究均為回顧性研究，筆者期待關(guān)于TLS的前瞻性研究的報(bào)道。

4 腫瘤的治療對(duì)TLS的影響

目前腫瘤的治療手段有手術(shù)、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，無(wú)論哪種治療手段，都會(huì)對(duì)TME造成一定的影響，包括殺傷腫瘤、釋放更多抗原激活免疫或調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活性等。TLS作為TME的主要組成結(jié)構(gòu)，也會(huì)隨著腫瘤的治療發(fā)生不同的變化，然而關(guān)于腫瘤治療與TLS之間關(guān)系的報(bào)道較少。

Silina等[6]報(bào)道了TLS與化療的關(guān)系，在肺癌中，化療后TLS的密度不變，但存在GC的TLS明顯減少。在該研究中，存在GC的TLS對(duì)預(yù)后具有預(yù)測(cè)作用，破壞GC后，這種預(yù)測(cè)作用隨之消失。在TLS與放療關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，放射治療后TLS相關(guān)的腫瘤細(xì)胞凋亡增加。體內(nèi)TLS對(duì)放療高度敏感，在小鼠腫瘤模型中，TLS在接受放射治療后面積減小，與TLS相關(guān)的細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，但在放療14 d后，TLS將再次出現(xiàn)，為優(yōu)化TLS功能提供了機(jī)會(huì)[19]。

在腫瘤的免疫治療時(shí)代，放療可以殺傷腫瘤細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞以凋亡等方式釋放更多抗原，從而為免疫細(xì)胞提供更多抗原，因此放療聯(lián)合免疫治療一直是研究的熱點(diǎn)之一。目前關(guān)于放療聯(lián)合免疫治療的臨床研究均顯現(xiàn)出良好的療效和安全性。2018 年美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(national comprehensive cancer network，NCCN)指南根據(jù) PACIFIC研究結(jié)果做出重要更新：推薦 Durvalumab 用于完成同步放化療、一般狀況良好的不可切除的Ⅲ期局部進(jìn)展期NSCLC患者。同期放化療后Durvalumab 顯著延長(zhǎng)患者無(wú)進(jìn)展生存期(progression-free survial，PFS)，mPFS延長(zhǎng)11.2個(gè)月；12個(gè)月和18個(gè)月的PFS率明顯提高(55.9%∶35.3%；44.2%∶27.0%)[44]。放療后對(duì)TLS的重塑提示TLS可能為免疫治療聯(lián)合放療的新的治療位點(diǎn)。TLS作為腫瘤TME的重要組成部分啟動(dòng)腫瘤免疫，目前尚無(wú)對(duì)免疫治療前后TLS的形成及密度變化情況的相關(guān)報(bào)道。

5 總結(jié)與展望

TLS存在于慢性炎癥周圍，可為免疫細(xì)胞提供抗原提呈及應(yīng)答的場(chǎng)所，與患者對(duì)治療的反應(yīng)及預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)人為給予各種細(xì)胞因子、趨化因子等方式在小鼠等臨床模型中誘導(dǎo)TLS形成，對(duì)TLS組成及結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，在不同類型腫瘤患者及小鼠模型中驗(yàn)證了TLS與患者預(yù)后及患者對(duì)藥物的反應(yīng)相關(guān)。這些實(shí)驗(yàn)對(duì)于了解TME、破譯腫瘤與機(jī)體免疫的關(guān)系具有重要意義。此外，誘導(dǎo)TLS的形成還可將冷腫瘤轉(zhuǎn)換為熱腫瘤，使部分對(duì)治療不敏感的患者受益于不同的治療手段。TLS作為機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的重要組成部分，與腫瘤免疫治療有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，探索免疫治療與TLS的關(guān)系不僅能夠精準(zhǔn)選擇對(duì)免疫治療敏感的患者，還可以對(duì)TLS進(jìn)行誘導(dǎo)，增加腫瘤組織部位淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，解除免疫耗竭，使對(duì)免疫治療不敏感的患者也受益于免疫治療。TLS的存在是患者良好預(yù)后的指標(biāo)，誘導(dǎo)TLS能否直接轉(zhuǎn)換為腫瘤患者的臨床收益還有待證實(shí)，筆者期待更多的關(guān)于TLS誘導(dǎo)及TLS與腫瘤免疫之間關(guān)系的探索。