滇南開(kāi)唇蘭化學(xué)成分研究

錢麗萍 闕慧卿 彭華毅 李 唯 陳阿虹 郭舜民 李援朝 林 綏*

1.福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院 福建省醫(yī)學(xué)測(cè)試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350001；2.福州海關(guān)技術(shù)中心(福建省檢驗(yàn)檢疫技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)，福建 福州 350003；3.中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所，上海 201203

滇南開(kāi)唇蘭AnoectochilusburmannicusRolfe為蘭科(Orchidaceae)開(kāi)唇蘭屬(Anoectochilus)植物，主要生長(zhǎng)在云南南部至西南部，有研究報(bào)道[1]滇南開(kāi)唇蘭水提物具有抗炎和胰島素抵抗作用。前期已報(bào)道[2]滇南開(kāi)唇蘭揮發(fā)油成分，比較了不同采收期的揮發(fā)油成分，成分和含量均有差別。本研究對(duì)滇南開(kāi)唇蘭植物全草進(jìn)行了化學(xué)成分的研究，從滇南開(kāi)唇蘭的正丁醇及乙酸乙酯提取部位中分離到13個(gè)化合物，根據(jù)理化性質(zhì)、光譜數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，經(jīng)鑒定13個(gè)化合物依次為：蘆丁(1)，山奈酚(2)，棕櫚酸(3)，槲皮素(4)，anoectosterol(5)，β-D-glucopyranosyl-(3R)-hydroxybutanolide(kinsenoside)(6)，anoectochine(7)，石杉?jí)A甲(8)，ginsenine(9)，硬脂酸(10)，異鼠李素(11)，8-對(duì)羥基芐基槲皮素(12)，5,4′-二羥基-6,7,3′-三甲氧基黃酮(cirsilineol)(13)。1～13化合物均為首次滇南開(kāi)唇蘭植物全草中提取分離到的。

1 儀器與藥材

1.1 儀器 APAⅡ自動(dòng)探針熔點(diǎn)分析儀(德國(guó)Schorpp Geratelechik 公司)，Avatar-330型紅外光譜儀(美國(guó)Thermo Electron Wrporation 公司)，UV-300型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，Unity-500型核磁共振儀(美國(guó) Varaina 公司)，F(xiàn)innigan MAT-312 型質(zhì)譜儀(美國(guó) Finnigan 公司)，WFH-201B 暗箱式紫外透射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)，LC-20A 型島津半制備高效液相色譜儀(日本島津公司)，RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市江南儀器廠)。

1.2 材料 實(shí)驗(yàn)用藥材為種植 6個(gè)月的滇南開(kāi)唇蘭AnoectochilusburmannicusRolfe，由福建省華芝韻生物科技有限公司提供,經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)(藥用植物學(xué)/中藥鑒定)楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定為滇南開(kāi)唇蘭AnoectochilusburmannicusRolfe。實(shí)驗(yàn)用高效薄層板、薄層用色譜硅膠G、柱層析硅膠(100-200目，200-300目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品，其余化學(xué)試劑均為市售色譜純和分析純。

2 提取與分離

種植6個(gè)月的滇南開(kāi)唇蘭全草20 kg用75%乙醇浸泡24 h，提取2次，過(guò)濾提取液，減壓濃縮得粗浸膏1961 g，用適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液，分別減壓濃縮得各部位浸膏。乙酸乙酯部位浸膏730 g，正丁醇部位浸膏690 g，取正丁醇及乙酸乙酯部位浸膏分別經(jīng)硅膠柱層析反復(fù)色譜分離，用不同比例的石油醚：乙酸乙酯和三氯甲烷：甲醇洗脫，得到化合物1(1995 mg)，化合物2(189 mg)，化合物3(156 mg)，化合物4(159 mg)，化合物5(95 mg)，化合物6(89 mg)，化合物7(81 mg)，化合物8(105 mg)，化合物9(83 mg)，化合物10(235 mg),化合物11(155 mg)，化合物12(129 mg)，化合物13(103 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1，淡黃色粉末，mp 184～187 ℃，紫外燈下呈亮淺藍(lán)色熒光，HCl-Mg 粉反應(yīng)陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)陽(yáng)性，F(xiàn)eCl3反應(yīng)陽(yáng)性，EI-MS m/z：610 [M]+，分子式C27H30O16。UVλmax nm(MeOH)：363，251，210。IRυmax cm-1(KBr)：3430(OH)，1655(C=O)，1607，1509，1456(苯環(huán))，1365，1300，1205。1HNMR(DMSO)δ：6.18(1H，d，J=1.8Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.8Hz，H-8)，7.56(2H，m，H-2′，6′)，6.86(1H，d，J=8.8Hz，H-5′)，5.36(1H，d，J=7.38Hz，H-1″)，5.08(1H，d，J=6.0Hz，H-1?)，1.01( 3H，d，J=6.4Hz，CH3-6?),12.61(1H，s，OH-5)，10.87(1H，s，OH-7)，9.69(1H，s，OH-4′)，9.19(1H，s，OH-3′)，糖部分其它質(zhì)子δ：3.05-5.28。13C-NMR(DMSO-d6)δ：157.1(C-2)，133.3(C-3)，177.3(C-4)，161.7(C-5)，99.1(C-6)，163.8(C-7)，93.9(C-8)，157.2(C-9)，105.3(C-10)，121.5(C-1′)，115.5(C-2′)，145.3(C-3′)，149.1(C-4′)，116.7(C-5′)，122.1(C-6′)，101.7(C-1″)，75.2(C-2″)，77.1(C-3″)，70.5(C-4″)，75.9(C-5″)，67.5(C-6″)，101.1(C-1?)，70.9(C-2?)，71.1(C-3?)，72.3(C-4?)，68.6(C-5?)，18.1(C-6?)。與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3-5]報(bào)道的蘆丁一致，確認(rèn)化合物1為蘆丁。

化合物2，黃色針狀結(jié)晶，mp263～265 ℃，HCl-Mg粉和AlCl3反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MS m/z：286 [M]+，分子式：C15H10O6。UVλmax nm(MeOH)：255，369。IRυmax cm-1(KBr)：3180，1675，1605，1580。1HNMR(acetone-d6)δ：6.23(1H，d，H-6)，6.53(1H，d，J=2.0Hz，H-8)，6.97(2H，d，J=9.2Hz，H-3′，5′)，8.11(2H，d，J=9.2Hz，H-2′，6′)，8.03，9.11，9.75，12.18(-OH)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：146.9(C-2)，136.5(C-3)，176.3(C-4)，157.6(C-5)，99.1(C-6)，164.9(C-7)，94.5(C-8)，162.1(C-9)，103.9(C-10)，123.3(C-1′)，116.3(C-3′ 和C-5′)，130.3(C-2′和C-6′)，159.9(C-4′)。與山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[6-8]報(bào)道的山奈酚(kaempferol)一致，確認(rèn)化合物2為山奈酚。

化合物3，為白色顆粒狀結(jié)晶(石油醚-乙酸乙酯)，mp 61～63 ℃，EI-MS m/z：256 [M]+。分子式：C16H32O2。IRυmax cm-1(KBr)：3500(寬峰，COOH中的OH)，1705(C=O)。1HNMR(CDCl3)δ：2.36(2H，t，J=7.6Hz，O=C-CH2)，1.64(2H，m，CH2)，1.26(24H，brs，-CH2-×12)，0.89(3H，t，J=6.8Hz，CH3)。13C-NMR(CDCl3)δ：180.72(C-1)，34.03(C-2)，31.91(C-3)，29.78(C-4)，29.71(C-5)，29.65(C-6)，29.59(C-7)，29.51(C-8)，29.48(C-9)，29.42(C-10)，29.35(C-11)，29.19(C-12)，29.03(C-13)，24，65(C-14)，22.68(C-15)，14.11(C-16)。根據(jù)理化性質(zhì)及在MS中一系列失去CH2的碎片峰如：143，129，115，101，87，73，69，57，與棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，跟據(jù)以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[9-12]報(bào)道的棕櫚酸(palmitic acid)一致，確認(rèn)化合物3為棕櫚酸。

化合物4，黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp 313～315 ℃，HCl-Mg粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)陰性性，示為黃酮類化合物，EI-MS m/z：302 [M]+，273，153，137，分子式：C15H10O7。UVλmax nm(MeOH)：208，256，369。IRυmax cm-1(KBr):：3435(OH)，1645(C=O)，1610，1515，1430(Ar)。1HNMR(DMSO)δ：6.19(1H，d，J=2.0Hz，H-6), 6.38(1H，d，J=2.2Hz，H-8)，6.89(1H，d，J=8.6Hz，H-5′)，7.57(1H，dd，J=8.6Hz，J=2.2Hz，H-6′)，7.71(1H，d，J=2.2Hz，H-2′)，示有A環(huán)5，7取代，B 環(huán)為ABX 系統(tǒng)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：147.3(C-2)，135.9(C-3)，175.9(C-4)，160.1(C-5)，98.5(C-6)，163.7(C-7)，93.8(C-8)，158.3(C-9)，103.3(C-10)，122.5(C-1′)，115.7(C-2′)，145.1(C-3′)，147.6(C-4′)，115.5(C-5′)，120.7(C-6′)。與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13-15]報(bào)道的槲皮素(quercetin)一致，確認(rèn)化合物4為槲皮素。

化合物5，針狀結(jié)晶，mp 139～141 ℃(CHCL3-MeOH)，EI-MS m/z：424 [M]+，分子式：C30H48O。UVλmax nm(MeOH): 253，371。IRυmax cm-1(KBr): 3430(OH)，2920(CH)，1460(C=C)。1HNMR(CDCl3)δ：1.09(1H，m，H-1)，1.87(1H，m，H-1)，1.51(1H，m，H-2)，1.85(1H，m，H-2)，3.53(1H，m，H-3)，2.23(1H，m，H-4)，2.29(1H，m，H-4)，5.36(1H，brd，J=5.4Hz，H-6)，1.53(1H，m，H-7)，1.99(1H，m，H-7)，1.47(1H，m，H-8)，0.95(1H，m，H-9)，1.49(2H，m，H-11)，1.18(1H，m，H-12)，2.01(1H，m，H-12)，1.01(1H，m，H-14),1.53(2H，m，H-15)，1.26(1H，m，H-16)，2.21(1H，m，H-16)，1.16(1H，brd，J=4.0Hz，H-17)，0.69(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-19)，2.05(1H，m，H-20)，1.00(3H，d，J=6.2Hz，H-21)，5.23(1H，dd，J=15.4Hz，J=8.0Hz，H-22)，5.15(1H，dd，J=15.4Hz，J=7.6Hz，H-23)，2.42(1H，ddd，J=7.0Hz，J=7.0Hz，J=7.0Hz，H-24)，1.41(1H，m，H-241)，1.51(1H，m，H-241)，0.85(3H，t，J=7.4Hz，H-242)，1.98(2H，m，H-26)，1.03(3H，t，J=7.6Hz，H-261)，4.73(2H，dd，J=1.4Hz，J=1.2Hz，H-27)。13C-NMR(CDCl3)δ：37.3(C-1)，31.8(C-2)，71.9(C-3)，42.3(C-4)，140.9(C-5)，121.9(C-6)，31.9(C-7)，32.1(C-8)，50.3(C-9)，36.7(C-10)，21.3(C-11)，39.9(C-12)，42.3(C-13)，57.1(C-14)，24.3(C-15)，28.9(C-16)，56.1(C-17)，12.3(C-18)，19.5(C-19)，40.3(C-20)，20.9(C-21)，137.3(C-22)，130.7(C-23)，51.3(C-24)，26.3(C-241)，12.3(C-242)，154.9(C-25),27.1(C-26)，12.5(C-261)，107.1(C-27)。根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的[anoectosterol(26-Methylstigmasta-5,22,25,(27)-trien-3β-ol)]一致，確認(rèn)化合物5為anoectosterol。

化合物6，油狀物，EI-MS m/z：264 [M]+，分子式：C10H16O8。UVλmax nm(MeOH):218，258，370。IRυmax cm-1(KBr):3400(OH)，2970(CH)，1775(C=O)。1HNMR(pyridine-d5)δ：2.88(1H，dd，J=17.6Hz，J=2.8Hz，H-2)，2.93(1H，dd，J=17.6Hz，J=5.2Hz，H-2)，4.89(1H，dddd，J=5.2Hz，J=4.6Hz，J=2.8Hz，J=1.6Hz，H-3)，4.43(1H，dd，J=10.4Hz，J=4.6Hz，H-4)，4.71(1H，dd，J=10.4Hz，J=1.6Hz，H-4)，4.91(1H，d，J=8.0Hz，G-H-1)，3.99(1H，t，J=8.0Hz，G-H-2)，4.25(1H，m，G-H-3)，4.23(1H，m，G-H-4)，3.97(1H，m，G-H-5)，4.37(1H，dd，J=11.8Hz，J=5.8Hz，G-H-6)，4.56(1H，dd，J=11.8Hz，J=2.4Hz，G-H-6)。13CNMR(pyridine-d5)δ：176.3(C-1)，35.8(C-2)，75.6(C-3)，74.9(C-4)，104.5(G-C-1)，75.1(G-C-2)，78.7(G-C-3)，71.5(G-C-4)，78.3(G-C-5)，62.9(G-C-6)。根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17-18]報(bào)道的kinsenoside(β-D-glucopyranosyl-(3R)-hydroxybutanolide)一致，確認(rèn)化合物6為kinsenoside。

化合物7，黃色固體，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)為生物堿類化合物，EI-MS m/z：216 [M]+。分子式：C12H12N2O2。UVλmax nm(MeOH)：220，270，277，280。IRυmax cm-1(KBr)：3350(NH)，3085，3020(-CH)，2925，2850，2795(C-H)，1790(C=O)，1635(C=C)，1615，1550，1480，1450。1HNMR(DMSO-d6)δ：7.44(1H，d，J=8.0Hz，H-4)，6.99(1H，dd，J=7.0Hz，J=8.0Hz，H-5)，7.07(1H，dd，J=7.0Hz，J=8.0Hz，H-6)，7.33(1H，d，J=8.0Hz，H-7)，4.19(1H，d，J=16.0Hz，H-8)，4.23(1H，d，J=16.0Hz，H-8)，3.61(1H，dd，J=5.0Hz，J=10.6，H-11)，2.81(1H，dd，J=10.6Hz，J=16.0Hz，H-12)，3.13(1H，dd，J=5.0Hz，J=16.0Hz，H-12)，10.9(1H，s，N1-H)，8.78(1H，brs，OH)，6.05(1H，s，N9-H)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：126.3(C-2)，106.7(C-3)，127.8(C-3a)，117.9(C-4)，118.7(C-5)，121.3(C-6)，111.1(C-7)，136.3(C-7a)，40.3(C-8)，169.3(C-10)，56.8(C-11)，23.0(C-12)。根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的anocetochine一致，確認(rèn)化合物7為anocetochine。

化合物8，結(jié)晶顆粒，mp229～231 ℃(丙酮)，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)為生物堿類化合物，EI-MS(m/z)：242 [M]+，分子式：C15H18N2O。UVλmax nm(MeOH)：230，313。IRυmax cm-1(KBr)：3485，3185，1650，1550。1HNMR(CDCl3)δ：6.39(1H，d，J=9.0Hz，H-2),7.83( 1H，d，J=9.0Hz，H-3)，2.77(2H，dd，J=16.0Hz，J=3.0Hz，H-6),3.57(1H，m，H-7)，5.39(1H，d，J=5.0Hz，H-8),1.62(3H，d，J=7.0Hz，H-10),5.47(1H，q，J=7.0Hz，H-11),2.11(2H，s，H-14)，1.47(3H，s，H-16),13.20(1H，br.s，N-H)。13C-NMR(CDCl3)δ：165.5(C-1)，117.1(C-2)，140.3(C-3)，133.0(C-4)，142.6(C-5)，35.3(C-6)，33.2(C-7)，124.5(C-8)12.7(C-10)，111.3(C-11)，143.5(C-12)，54.8(C-13)，49.7(C-14)，134.6(C-15)23.1(C-16)。根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20-22]報(bào)道的石杉?jí)A甲一致，確認(rèn)化合物8為石杉?jí)A甲。

化合物9，白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)為生物堿類化合物，EI-MS m/z：230 [M]+，分子式：C13H14N2O2。UVλmax nm(MeOH)：221，278，289。IRυmax cm-1(KBr)：3370(NH)，3300(OH)，2985，1650(C=O)。1HNMR(DMSO-d6)δ：4.53(1H，d，J=6.6Hz，H-3),3.62(1H，dd，J=4.8Hz，J=11.8Hz，H-6),3.17(1H，ddd，J=2.6Hz，J=4.8Hz，J=15.2Hz，H-7),2.78(1H，ddd，J=2.6Hz，J=11.8Hz，J=15.2Hz，H-7),7.46(1H，d，J=8.0Hz，H-10),7.01(1H，ddd，J=2.0Hz，J=7.6Hz，J=8.0Hz，H-11),7.09(1H，ddd，J=2.0Hz，J=7.6Hz，J=8.0Hz，H-12),7.35(1H，d，J=8.0Hz，H-13),1.63(3H，d，J=6.6Hz，H-15),11.11(1H，s，N-H),8.77(1H，s，O-H)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：133.1(C-2)，49.2(C-3)，169.7(C-5)，58.1(C-6)，23.3(C-7)，107.3(C-8)，126.5(C-9)，118.2(C-10)，118.9(C-11)，121.5(C-12)，111.5(C-13)，136.7(C-14)，17.3(C-15)。根據(jù)理化性質(zhì)及以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道的ginsenine一致，確認(rèn)化合物9為ginsenine，是首次從開(kāi)唇蘭科植物中分離得到的。

化合物10，白色固體顆粒，mp 71～73 ℃，EI-MS m/z：284 [M]+，分子式：C18H36O2。IRυmax cm-1(KBr)：3500(寬峰，COOH中的OH)，1705(C=O)。1HNMR(CDCl3)δ：2.33(2H，t，J=7.6Hz，H-2)，1.63(2H，m，H-3)，1.28(多個(gè)H，m，H-4-17)，0.88(3H，t，J=6.6Hz，H-18)。13C-NMR(CDCl3)δ：179.6(C-1)，33.9(C-2)，31.9(C-3)，29.9-29(C-4-14)，28.8(C-15)，24.7(C-16)，22.7(C-17)，14.3(C-18)。與硬脂酸標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，跟據(jù)以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[17，24]報(bào)道的硬脂酸(stearic acid)一致，確認(rèn)化合物10為硬脂酸。

化合物11，黃色結(jié)晶性粉末，mp 283～285 ℃(MeOH)，HCl-Mg 反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)呈陰性，EI-MS m/z：316[M]+，分子式：C16H12O7。UVλmax nm(MeOH)：255，265，368。IRυmax cm-1(KBr):：3450(OH)，1650(C=O)，1610，1515，1430(Ar)。1HNMR(DMSO-d6)δ：7.75(1H，s，H-2′)，7.69(1H，d，J=8.6Hz，H-6′)，6.95(1H，d，J=8.6Hz，H-5′)，6.19(1H，d，J=2.0Hz，H-6)，6.49(1H，d，J=2.0Hz，H-8)，9.41(1H，s，3-OH)，9.71(1H，s，4′-OH)，10.75(1H，s，7-OH)，12.43(1H，s，5-OH)，3.81(3H，s，-OCH3)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：147.3(C-2)，135.9(C-3)，175.9(C-4)，160.7(C-5)，98.3(C-6)，163.9(C-7)，93.8(C-8)，156.3(C-9)，103.1(C-10)，121.9(C-1′)，115.6(C-2′)，146.7(C-3′)，148.9(C-4′)，111.8(C-5′)，121.6(C-6′)，55.9(C-OCH3)。與異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，跟據(jù)以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[25-26 ]報(bào)道的異鼠李素一致，確認(rèn)化合物11為異鼠李素。

化合物12，黃色固體顆粒，mp 251～253 ℃(MeOH)，HCl-Mg 反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)呈陰性，示為黃酮類化合物，EI-MS m/z：408[M]+，分子式：C22H16O8，UVλmax nm(MeOH)：255，265，373。IRυmax cm-1(KBr)：3455(OH)，1655(C=O)，1615，1520，1435(Ar)。1HNMR(DMSO-d6)δ：6.33(1H，s，H-6)，7.73(1H，d，H-2′)，6.86(1H，d，H-5′)，7.47(1H，dd，H-6′)，7.04(2H，d，H-2″，H-6″)，6.58(2H，d，H-3″，H-5″)，3.96(2H，s，H-7″)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：146.9(C-2)，135.7(C-3)，176.1(C-4)，161.6(C-5)，97.9(C-6)，158.9(C-7)，106.3(C-8)，153.6(C-9)，103.1(C-10)，122.3(C-1′)，115.3(C-2′)，145.3(C-3′)，147.9(C-4′)，115.7(C-5′)，120.6(C-6′)，130.9(C-1″),129.3(C-2″,6″),115.5(C-3″,5″),155.6(C-4″),27.4(C-7″)。與8-對(duì)羥基芐基槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，跟據(jù)以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[27 ]報(bào)道的8-對(duì)羥基芐基槲皮素一致，確認(rèn)化合物12為8-對(duì)羥基芐基槲皮素。

化合物13，黃色針狀結(jié)晶，mp 205～207 ℃，HCl-Mg 反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)呈陰性，示為黃酮類化合物，EI-MS m/z：344[M]+，分子式：C18H16O7，UVλmax nm(MeOH)：275，345。IRυmax cm-1(KBr):：3455(OH)，1645(C=O)，1615，1510，1435(Ar)。1HNMR(DMSO-d6)δ：8.05(1H，d，J=1.60Hz，H-2′)，7.31(1H，dd，J=1.6Hz，J=8.0Hz，H-6′)，7.16(1H，d，J=8.0Hz，H-5′),6.81(1H，s，H-8)，6.37(1H，s，H-3)。13C-NMR(DMSO-d6)δ：148.5(C-2)，137.5(C-3)，176.3(C-4)，162.6(C-5)，167.5(C-6)，164.9(C-7)，95.1(C-8)，156.9(C-9)，103.7(C-10)，122.3(C-1′)，116.9(C-2′)，146.9(C-3′)，149.4(C-4′)，111.9(C-5′)，121.9(C-6′)，56.4(C-3′-OCH3)，61.1(C-6-OCH3)，57.1(C-7-OCH3)。與5，4′-二羥基-6，7，3′-三甲氧基黃酮標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，多個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)的Rf值一致，跟據(jù)以上檢測(cè)所得數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[14，26]報(bào)道的5,4′-二羥基-6,7,3′-三甲氧基黃酮一致，確認(rèn)化合物13為5,4′-二羥基-6,7,3′-三甲氧基黃酮(cirsilineol)。

4 討論

林下種植6個(gè)月的金線蓮和滇南開(kāi)唇蘭全草提取的有效部位進(jìn)行初步體外抗癌活性的篩選，用MTT法在體外對(duì)人肺癌細(xì)胞NCI-H446，spc-A1 進(jìn)行抑瘤實(shí)驗(yàn)，金線蓮、滇南開(kāi)唇蘭在濃度為100/μg·mL-1時(shí)，對(duì)人肺癌細(xì)胞NCI-H446抑制率分別為89%和93%,對(duì)spc-A1 肺腺癌細(xì)胞抑制率分別為90%和95%。 Studen’s t檢驗(yàn)，與對(duì)照組相比，P<0.001。發(fā)現(xiàn)滇南開(kāi)唇蘭的抗癌活性比金線蓮略強(qiáng)，因此對(duì)滇南開(kāi)唇蘭進(jìn)行了化學(xué)成分研究，探索該植物中抗癌有效的先導(dǎo)化合物。

從滇南開(kāi)唇蘭植物全草中提取分離得到13個(gè)化合物，1～13化合物是首次從滇南開(kāi)唇蘭植物全草中分離得到，其中，4個(gè)生物堿：anoectosterol(5)，anoectochine(7)，石杉?jí)A甲(8)，ginsenine(9)；6個(gè)黃酮：蘆丁(1)，山奈酚(2)，槲皮素(4)，異鼠李素(11)，8-對(duì)羥基芐基槲皮素(12)，5,4′-二羥基-6,7,3′-三甲氧基黃酮(cirsilineol)(13)；2個(gè)有機(jī)酸：棕櫚酸(3)，硬脂酸(10)，1個(gè)內(nèi)酯苷類化合物：kinsenoside(6)。化合物(5)、(9)在金線蓮植物中未見(jiàn)報(bào)道。本研究可為完善滇南開(kāi)唇蘭的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及進(jìn)一步的研究開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。