微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

張士躍

北京市通州區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 101100

新生兒溶血病發(fā)病機(jī)制是由于母親與嬰兒間血型無(wú)法吻合造成新生兒或胎兒伴免疫性溶血疾病，臨床中普遍以ABO新生兒溶血病為主[1-2]。輸血治療是臨床主要治療方法之一，但輸血安全問(wèn)題是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)，因此輸血前采取有效的檢驗(yàn)是必須的[3]。微孔板凝聚胺技術(shù)(MPT)與微柱凝膠技術(shù)(MGT)是國(guó)內(nèi)常用的兩種檢測(cè)技術(shù)，為進(jìn)一步驗(yàn)證兩者的準(zhǔn)確性與敏感性[4]。本文重點(diǎn)探討了ABO新生兒溶血病患兒輸血前采取微柱凝膠技術(shù)檢驗(yàn)的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2018年1月本院收治的ABO新生兒溶血病患兒40例作為研究對(duì)象，所有患兒血清膽紅素水平升高，伴黃疸，黃疸改善后伴嚴(yán)重貧血，所有母體血型皆為O型，患兒目前RHD血型為陽(yáng)性，其中男患兒18例，女患兒22例，年齡1～4 d，平均(2.3±0.6)d；體質(zhì)量2.42～3.25 kg，平均體質(zhì)量(3.08±0.12)kg；所有入選患兒排除藥物過(guò)敏史、精神疾病家族史、心臟病家族史；所有患兒家屬均自愿參與本研究，且簽署知情同意書。

1.2方法 (1)采集患兒血液標(biāo)本，2 000×g離心10 min，將血清與紅細(xì)胞進(jìn)行分離，應(yīng)用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，同時(shí)選用一些紅細(xì)胞采用生理鹽水制作3%細(xì)胞懸液，進(jìn)行血清學(xué)3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)。取患兒紅細(xì)胞懸液1 mL，加入等體積的生理鹽水，56 ℃水浴7 min，經(jīng)2 000×g離心3 min，將上清收集后作為放散液。(2)采用MPT進(jìn)行主側(cè)交叉配血，采集患兒血液標(biāo)本，與標(biāo)準(zhǔn)同型紅細(xì)胞血液標(biāo)本同時(shí)展開(kāi)配血，取試管1支，置入患兒血清或紅細(xì)胞放散液2滴、配型紅細(xì)胞懸液1滴、低離子介質(zhì)0.7 mL，均勻混置，聯(lián)合聚凝胺溶液2滴，給予離心機(jī)離心10 s(1 000×g)，將上清液處理干凈后，搖晃試管，檢查紅細(xì)胞有無(wú)凝集，若未凝集需再做一次，凝集后聯(lián)合重懸液2滴，混合后觀察結(jié)果。(3)采取MGT展開(kāi)主側(cè)交叉配血，收集患兒血液標(biāo)本，采用微柱凝膠試劑卡進(jìn)行標(biāo)記，把血液標(biāo)本同時(shí)置入凝膠試管中，采取專用離心機(jī)離心5 min，觀察結(jié)果。全部操作均以《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[5]中交叉配血試驗(yàn)流程為標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1血清學(xué)3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 40例患兒經(jīng)3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)后，皆確診為ABO新生兒溶血病，直接抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性21例(52.50%)，血清游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性34例(85.00%)，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性40例(100.0%)。見(jiàn)表1。

表1 患兒血清學(xué)3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

2.2ABO新生兒溶血病患兒直接抗人球蛋白類型與血清交叉配血結(jié)果 40例患兒血清交叉配血227次后，血清MPT檢測(cè)不合格113次(49.78%)，放散液MPT檢測(cè)不合格97次(42.73%)，血清MGT檢測(cè)不合格23次(10.13%)，放散液MGT檢測(cè)不合格19次(8.37%)，兩種方法不合格率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2ABO新生兒溶血病患兒直接抗人球蛋白類型與血清交叉配血結(jié)果

2.3MGT與MPT配血結(jié)果分析 血清MPT檢測(cè)與放散液MPT檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的MGT檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，兩種技術(shù)在血清及放散液交叉配血檢驗(yàn)中結(jié)果一致性較差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3、4。

表3 放散液MGT與MPT配血結(jié)果分析(n)

表4 血清MGT與MPT配血結(jié)果分析(n)

3 討 論

從遺傳學(xué)方面分析，新生兒溶血病發(fā)病機(jī)制是在胎兒階段從父親基因方面遺傳了母體不存在的抗原，母體抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒體中，抗體抗原無(wú)法互相容納，發(fā)生免疫作用，使紅細(xì)胞損傷[6-8]。新生兒溶血病患兒發(fā)病時(shí)的臨床表現(xiàn)為黃疸、貧血、水腫等，病情加劇者可繼發(fā)膽紅素腦病，是影響患兒生命安全的危險(xiǎn)因素[9]。所以，對(duì)新生兒溶血病患兒進(jìn)行早期評(píng)估，并進(jìn)行有效治療對(duì)于患兒預(yù)后具有重要價(jià)值。

新生兒溶血病患兒體內(nèi)含母源溶血性IgG抗體，患兒體內(nèi)的部分該抗體從中分離出來(lái)進(jìn)入血液，剩余部分與紅細(xì)胞有機(jī)結(jié)合并附著于紅細(xì)胞中，所以新生兒溶血診斷鑒別過(guò)程中常采用直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)[10-11]。本研究中3項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性21例(52.50%)，血清游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性34例(85.00%)，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性40例(100.0%)。紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率最高，其他依次為血清游離抗體試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)，與KUMAWAT等[12]研究一致，進(jìn)而說(shuō)明紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)對(duì)新生兒溶血病檢出率最高，所以診斷過(guò)程中應(yīng)結(jié)合3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果，使診斷的可信度更高。在交叉配血試驗(yàn)期間采用的標(biāo)本包含了患兒血清與紅細(xì)胞放散液，便于掌握患兒體內(nèi)溶血性抗體與供血紅細(xì)胞間表達(dá)的不相容特征。既往交叉配血檢驗(yàn)中還包括鹽水法、酶法，其中由于鹽水法準(zhǔn)確性較低，漏檢率高，而酶法需要較長(zhǎng)時(shí)間驗(yàn)證，所以臨床應(yīng)用受限[13-14]。

在臨床中廣泛應(yīng)用MPT技術(shù)，利用凝聚胺本身帶正電荷的特點(diǎn)，與紅細(xì)胞結(jié)合減少紅細(xì)胞表層中的電荷數(shù)，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝聚，通過(guò)相對(duì)溶液中和凝聚胺正電荷，讓非特性凝集紅細(xì)胞分散開(kāi)，但特異性的抗原抗體凝集功能散開(kāi)難，所以檢測(cè)抗原時(shí)采用MPT需耗費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，且在抗體水平無(wú)法達(dá)到額定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，假陽(yáng)性率與漏檢率高[15-16]。

MGT技術(shù)為血型血清學(xué)技術(shù)，特異性強(qiáng)，且靈敏度高，主要應(yīng)用于輸血前血清學(xué)篩查。MGT是把符合血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的稀釋液制作為凝膠后，采取微管柱灌注，紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)微柱中凝膠顆粒分子過(guò)濾，讓每個(gè)紅細(xì)胞過(guò)濾時(shí)保留發(fā)生凝集的紅細(xì)胞，確定不同的凝集反應(yīng)結(jié)果[17]。MGT結(jié)果較直觀，并不依賴于顯微鏡，經(jīng)離心后，如凝膠上層或中間分散表明結(jié)果是陽(yáng)性，在凝膠底部的是陰性，同時(shí)結(jié)果準(zhǔn)確性高[18]。MGT方法最大的不足是檢測(cè)需要較長(zhǎng)的時(shí)間，無(wú)法滿足急診配血要求，難以辨別出紅細(xì)胞中存在的不完全抗體。本研究發(fā)現(xiàn)，40例患兒血清交叉配血227次后，血清MPT檢測(cè)不合格113次(49.78%)，放散液MPT檢測(cè)不合格97次(42.73%)，血清MGT檢測(cè)不合格23次(10.13%)，放散液MGT檢測(cè)不合格19次(8.37%)，兩種方法不合格率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MPT檢測(cè)血清及放散液的陽(yáng)性率明顯低于MGT，與LOZAR-KRIVEC等[19]研究結(jié)果相符。張保萍[20]對(duì)MGT與MPT檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩種交叉配血結(jié)果一致性較差。本研究結(jié)果中，血清MPT檢測(cè)與放散液MPT檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的MGT檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，兩種技術(shù)在血清及放散液交叉配血檢驗(yàn)中結(jié)果一致性較差，與文獻(xiàn)[20]研究結(jié)果相符，提示MPT靈敏度不高。

綜上所述，MGT在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)中的靈敏度明顯優(yōu)于MPT，由于MGT存在不足，無(wú)法直接取締MPT技術(shù)，所以應(yīng)在輸血檢驗(yàn)前增加直接抗人球蛋白試驗(yàn)輔助，并結(jié)合患兒免疫學(xué)與生理特征，通過(guò)不同方法聯(lián)合診斷排查抗原抗體，盡量降低輸血事故率。