豬人工授精實(shí)驗(yàn)室要求及精液生產(chǎn)

卓衛(wèi)杰

（濮陽(yáng)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南 濮陽(yáng)457100）

人工授精可以大大提高公豬的利用率，減少公豬的飼養(yǎng)量；另外，人工授精技術(shù)在減少疾病傳播、優(yōu)良基因的迅速擴(kuò)散、提高母豬受胎率方面有著積極意義。為了充分利用公豬精液，建立合格的人工授精實(shí)驗(yàn)室是豬人工授精技術(shù)中的關(guān)鍵所在。

1 豬人工授精實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與環(huán)境要求

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)與采精室相鄰，并且實(shí)驗(yàn)室與采精室之間的隔墻上應(yīng)當(dāng)設(shè)置高約40 cm，寬約60 cm 的窗口。窗口應(yīng)設(shè)計(jì)為2 層可推拉的透明玻璃，而且窗內(nèi)溫度控制在室溫25℃左右。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)干濕分離，干燥區(qū)用于精液品質(zhì)檢查、精液稀釋液配制、精液稀釋和分裝等工作；潮濕區(qū)用于安裝水管和水槽、清洗器具和設(shè)備。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)制定有衛(wèi)生制度，工作人員應(yīng)當(dāng)按照制定好的衛(wèi)生制度保持實(shí)驗(yàn)室干凈、整潔、衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)室門(mén)口應(yīng)當(dāng)設(shè)置消毒盆，每天更換消毒液，人員進(jìn)出必須腳踏消毒盆。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)當(dāng)安裝紫外線燈，每天下班的時(shí)候開(kāi)啟，整晚照射。

2 豬人工授精實(shí)驗(yàn)室設(shè)備要求

2.1 顯微鏡

顯微鏡放大的倍數(shù)可以在100～400 倍之間調(diào)節(jié)，而且實(shí)驗(yàn)室最好配備2 個(gè)目鏡，以方便檢查精子的形態(tài)。豬人工授精實(shí)驗(yàn)室所需的顯微鏡應(yīng)當(dāng)配備恒溫加熱板，以便預(yù)熱載玻片和蓋玻片。

2.2 精子密度儀和恒溫水浴鍋

精子密度儀，顧名思義是為了檢查公豬精液的精子密度，并以此為依據(jù)來(lái)決定精液的稀釋倍數(shù)。該儀器能夠迅速檢測(cè)出精液的精子密度，從而減少對(duì)精液的影響。實(shí)驗(yàn)室配備的恒溫水浴鍋?zhàn)詈镁哂袛?shù)字顯示器，以便更好地控制溫度，從而能夠更精確地加熱精液稀釋液和控制精液稀釋液的溫度。

2.3 電子臺(tái)秤和恒溫保溫箱

電子臺(tái)秤的目的是為了稱量精液等的質(zhì)量。恒溫保溫箱是為了更好地保存稀釋好的精液，恒溫保溫箱最好帶有數(shù)字顯示屏，并能調(diào)至17 ℃的恒定溫度。

2.4 溫度計(jì)

實(shí)驗(yàn)室最好配備2 支溫度計(jì)，可以同時(shí)測(cè)量精液和稀釋液溫度，需要注意的是，要確保這2 支溫度計(jì)在測(cè)定同一液體時(shí)所顯示的溫度是一致的，只有這樣，才能確保精液和精液稀釋液溫度一致。

2.5 其他器具

豬人工授精實(shí)驗(yàn)室還需要玻璃杯、玻璃棒、濾紙、蒸餾水、空調(diào)、量筒或量杯、輸精瓶、封口機(jī)等。

3 精液的生產(chǎn)

3.1 精液量的測(cè)定

按照規(guī)范的采精操作，公豬的采精量一般100～500 ml，平均在220 ml。而每頭公豬的精液量則是相對(duì)固定的。如果公豬的采精量與日常的明顯不同，應(yīng)當(dāng)注意查找原因。公豬的精液密度約為1.02g/ml，接近于1，所以，可以直接采取稱重的方法來(lái)測(cè)量精液的體積，即1 g 精液的體積約為1 ml。

3.2 精液品質(zhì)的檢查

通過(guò)精液品質(zhì)的檢查，能夠保證每份用于輸精的精液中含有足量的有效精子，確保了人工授精的受胎率。精液品質(zhì)的檢查包括直觀檢查和微觀檢查兩個(gè)方面。

3.2.1 精液直觀檢查

豬精液被采集后，首先要對(duì)其進(jìn)行直觀檢查，直觀檢查包括檢查精液的色澤、氣味、凝集度和射精量等。

色澤：正常公豬精液從淺灰白色到乳白色。色澤越白，說(shuō)明精子密度越高；色澤越透明，則說(shuō)明精子密度越低。精液呈現(xiàn)紅色、褐色或褐紅色則說(shuō)明精液中混有鮮血或陳血。精液量少而呈現(xiàn)褐黃色，說(shuō)明混有尿液。透明度高，紅色、褐色、褐黃色等不正常的色澤都提示精液品質(zhì)有問(wèn)題。

氣味：正常公豬精液會(huì)有淡淡的腥味。如果有腥臭味則說(shuō)明精液中混有膿液；有腥臊味則說(shuō)明精液中混有尿液或包皮液，這些都是不合格的精液。

凝集度：正常的精液應(yīng)該質(zhì)地均勻，如果精液中可以看到小顆?；蛐鯛钗?，則說(shuō)明有嚴(yán)重的精子凝集現(xiàn)象，應(yīng)判定為不合格精液。

射精量：每頭公豬的采精量是基本恒定的，與正常的精液量差異過(guò)大，則提示著所采集的精液有可能不合格。

3.2.2 精液微觀檢查

精液微觀檢查的目的是為了檢查精子的活力。顯微鏡下，能夠前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子稱為有效精子，前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分比叫做精子活力，這是精液微觀檢查的重要指標(biāo)。

十級(jí)評(píng)分制評(píng)定精液活力，精子活力檢查應(yīng)在37～39 ℃的溫度下檢查，先使用100 倍檢查，即用10 倍的目鏡和10 倍的物鏡進(jìn)行整體觀察，然后再把物鏡調(diào)成40倍，進(jìn)行觀察。按照十級(jí)評(píng)分制進(jìn)行評(píng)分，90%的精子呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精液活力評(píng)定為0.9，80%的呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)則評(píng)定為0.8，以此類(lèi)推。按照此評(píng)分制，合格精液的精子活力不低于0.7。

五級(jí)評(píng)分制評(píng)定精子活力，新鮮精液應(yīng)當(dāng)在100 倍下進(jìn)行整體觀察，整個(gè)視野中有明顯大的運(yùn)動(dòng)波，評(píng)定為5 分；視野中 一些運(yùn)動(dòng)波和精子的成群運(yùn)動(dòng)，評(píng)定為4分；出現(xiàn)成群運(yùn)動(dòng)，評(píng)定為3 分；沒(méi)有成群運(yùn)動(dòng)，部分呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)定為2 分；只有蠕動(dòng)，評(píng)定為1 分；無(wú)精子活動(dòng)，評(píng)定為0 分。按照五級(jí)評(píng)分制，合格精液的精子活力應(yīng)不低于3分。

3.3 精液的稀釋

精液采集后不能放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，最好不要超過(guò)30 min。稀釋的時(shí)候，一般按照每個(gè)輸精袋或輸精瓶中含有40 億個(gè)有效精子來(lái)進(jìn)行稀釋。

精液稀釋時(shí)，一定要保證原精液與稀釋液的溫度一致，兩者溫差不能超過(guò)2 ℃。根據(jù)計(jì)算所得的稀釋后總精液體積，緩緩加入稀釋液，稀釋液加入時(shí)應(yīng)當(dāng)沿著杯壁倒入，嚴(yán)禁將稀釋液從高處倒入，形成沖擊力。稀釋液最終加入量應(yīng)使精液和稀釋液的總體積達(dá)到所計(jì)算的稀釋后體積。加入稀釋液過(guò)程中，應(yīng)一邊加入稀釋液，一邊輕輕搖動(dòng)燒杯或用潔凈的玻璃棒攪拌。

3.4 精液分裝與標(biāo)記

精液稀釋5 min 后，應(yīng)當(dāng)再一次檢查精子活力，如果活力沒(méi)有下降，方可進(jìn)行分裝。分裝時(shí)，實(shí)驗(yàn)室室溫要控制在25℃左右，以防止精液受到溫度的影響。因?yàn)榭諝庵械难鯕獠焕诰拥谋４?，因此在分裝時(shí)，要注意排凈精液袋或精液瓶中的空氣。

分裝好的精液，要做好標(biāo)記，以便確認(rèn)精液的來(lái)源、保質(zhì)期等信息，從而方便進(jìn)行人工授精時(shí)信息的登記。不同品種的精液使用不同顏色的精液袋或精液瓶區(qū)分，并貼上標(biāo)簽，標(biāo)明公豬耳號(hào)、采精日期、有效期、精子活力等信息。

3.5 精液的降溫與保存

分裝好的精液應(yīng)當(dāng)先放置在一個(gè)保溫箱中，使精液溫度緩慢下降，等到精液溫度下降到室溫左右時(shí)，再放入恒溫箱中。

保存精液時(shí)，恒溫箱內(nèi)的溫度應(yīng)當(dāng)保持在17 ℃。并且每隔12 h 輕輕翻動(dòng)精液袋或精液瓶，防止精子發(fā)生沉淀而導(dǎo)致死亡。稀釋好的精液在恒溫箱中可以保存約3 d，一旦超過(guò)3 d，精液的活力將達(dá)不到配種的要求。

3.6 精液復(fù)檢與運(yùn)輸

在使用精液前，應(yīng)當(dāng)再次檢查精液活力，只有當(dāng)精液活力不小于0.7 時(shí)，方可使用。復(fù)檢時(shí)，向干凈試管中抽取1～2 ml 精液，之后將試管放入37～38 ℃的恒溫水浴箱中加熱5 min，取出精液輕輕搖勻，使用滴管取出一滴放在已經(jīng)預(yù)熱好的載玻片上，置于37 ℃的恒溫板片刻后，使用顯微鏡觀察精子活力。

精液在運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候，應(yīng)當(dāng)有專用的保溫箱，并且保溫箱溫度保持在16～18℃，運(yùn)輸過(guò)程中避免強(qiáng)烈晃動(dòng)。