家蠶微粒子病的檢測方法及防治對策

吳彩娟，錢榮花，程彩花，張炎林，胡光明，朱木富

（杭州蠶種場，浙江 杭州 310021）

在我國已經(jīng)建立了以生產(chǎn)“無毒”（未感染家蠶微粒子?。┬Q種為關(guān)鍵，防治病原污染擴(kuò)散為基礎(chǔ)，有效消毒為重點(diǎn)的綜合防治家蠶微粒子病技術(shù)體系。但是，隨著我國城市化的發(fā)展，農(nóng)村經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，蠶種生產(chǎn)形式的變遷，以及原蠶區(qū)農(nóng)村勞動力的短缺，導(dǎo)致蠶種生產(chǎn)轉(zhuǎn)型升級過程中，家蠶微粒子病流行的防控遭遇諸多新的問題，主要表現(xiàn)為原有微粒子病防控技術(shù)規(guī)程中的相關(guān)技術(shù)，對現(xiàn)有生產(chǎn)形式的不適應(yīng)和到位率低兩大問題。通過對不同流行狀態(tài)和生產(chǎn)條件下的原蠶生產(chǎn)點(diǎn)的生產(chǎn)過程監(jiān)控檢測；采用不同強(qiáng)度的遲眠蠶和種繭淘汰率、桑葉葉面消毒和桑園治蟲技術(shù)措施，比較和分析流行因子與檢疫結(jié)果（國家強(qiáng)制實施的蠶種質(zhì)量檢驗與檢疫結(jié)果）的關(guān)聯(lián)，初步解明流行因子與檢疫結(jié)果及微粒子病防控主要技術(shù)措施及強(qiáng)度間的關(guān)系，建立基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程。為提高蠶種生產(chǎn)安全性、經(jīng)濟(jì)效益和保障蠶種供應(yīng)提供先進(jìn)技術(shù)或支撐。

蠶桑產(chǎn)業(yè)是杭州市的優(yōu)勢和特色農(nóng)業(yè)之一，現(xiàn)有桑園約3333.33hm2，養(yǎng)蠶農(nóng)戶約5萬戶，年總飼養(yǎng)蠶種量約為10萬張蠶種，年蠶繭產(chǎn)量約5000t，年蠶繭產(chǎn)值約2億多元。杭州西部縣市（淳安、建德、桐廬和臨安）作為浙江省“東桑西進(jìn)工程”的實施縣市，蠶桑產(chǎn)業(yè)已成為農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一，也是其中一大批農(nóng)戶的主要經(jīng)濟(jì)來源。在提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入的同時，栽桑養(yǎng)蠶在維系區(qū)域生態(tài)方面發(fā)揮了重要的作用。杭州蠶種場每年生產(chǎn)雜交蠶種約10萬張，年產(chǎn)值約500萬元，更為重要的是為保障杭州市5萬戶蠶農(nóng)生產(chǎn)蠶繭用種提供了安全足量用種的需要。高效生態(tài)農(nóng)業(yè)是浙江省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的必然途徑，也是蠶種制造業(yè)必須遵循的發(fā)展道路，高效的家蠶微粒子病綜合防治技術(shù)不僅可以減少蠶種場的直接經(jīng)濟(jì)損失，也可提高勞動工效和減低材料和能源消耗，更為重要的是保障蠶農(nóng)蠶繭生產(chǎn)的安全。該項研究不僅在杭州市蠶種生產(chǎn)具有良好的市場需求，以及良好的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益，對全省或全國的蠶種生產(chǎn)都有積極影響。

家蠶微粒子病檢測技術(shù)是該病防治中的一項關(guān)鍵性技術(shù)，隨著PCR技術(shù)的發(fā)展，使該項技術(shù)在家蠶微粒子病的檢測中應(yīng)用成為可能。綜述了有關(guān)應(yīng)用PCR技術(shù)檢測家蠶微粒子病的研究，從模板核酸制備和引物設(shè)計等方面分析提高靈敏度和解決特異性問題的途徑。提出蠶種生產(chǎn)單位承擔(dān)母蛾的微粒子病檢驗，省級檢驗檢疫機(jī)構(gòu)承擔(dān)蠶種（成品卵）的家蠶微粒子病的監(jiān)督檢驗檢疫，是PCR技術(shù)在蠶種生產(chǎn)質(zhì)量檢驗中實用化的重要前提。

1 家蠶微粒子病檢測技術(shù)的研究和實用化方案

主要研究適用于大規(guī)模常規(guī)PCR檢測遲眠蠶、桑蟲和種繭（蛹或蛾）等樣本的制作技術(shù)，為高效實施檢測和獲取較大規(guī)模數(shù)據(jù)，增強(qiáng)流行因子分析的準(zhǔn)確性提供有效基礎(chǔ)；解決復(fù)雜樣本（遲眠蠶、桑蟲和種繭）條件對PCR檢測技術(shù)靈敏度的影響，以及檢測穩(wěn)定性的評估；在上述兩方面研究的基礎(chǔ)上建立熟化技術(shù)。

在具體細(xì)節(jié)上，包括核酸獲取方法、引物設(shè)計和擴(kuò)增效果評價、靈敏度和穩(wěn)定性的測試等。

2 遲眠蠶、桑蟲和環(huán)境樣本等流行相關(guān)因子的檢測和流行程度分析

研究和建立抽樣技術(shù)，主要包括不同流行狀態(tài)原蠶點(diǎn)（或原蠶飼養(yǎng)戶）遲眠蠶、桑蟲和環(huán)境樣本等的抽取方案制定；并根據(jù)每季蠶種生產(chǎn)中，對流行因子分布規(guī)律、采取不同強(qiáng)度控制技術(shù)、生產(chǎn)蠶種的母蛾檢疫結(jié)果三者之間的進(jìn)行協(xié)同分析，在據(jù)此調(diào)整流行因子控制技術(shù)強(qiáng)度；實施2～3個輪回修正完善。

3 研究生產(chǎn)過程流行因子控制技術(shù)的實施強(qiáng)度

研究和確定遲眠蠶淘汰、桑葉葉面消毒、環(huán)境消毒和種繭淘汰的技術(shù)選定，在消毒方面包括消毒藥劑、消毒時間和消毒方法等；在淘汰方面包括不同時間段和與檢測監(jiān)控的及時配套等。采用分等級與頻率為參數(shù)的防控技術(shù)強(qiáng)度實施策略，并制定各單項防控技術(shù)的技術(shù)實施細(xì)則。

同時，利用研發(fā)的檢測技術(shù)對防控技術(shù)實施進(jìn)行過程性效果評價。

4 研究基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控的家蠶微粒子病防控生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

在實現(xiàn)高效快速檢測的基礎(chǔ)上，根據(jù)流行因子與防控技術(shù)相互關(guān)系研究的主要技術(shù)參數(shù)及變化規(guī)律，制定基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控的家蠶微粒子病防控生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程。

5 技術(shù)路線

采用家蠶微粒子病流行病學(xué)、PCR檢測技術(shù)、桑園蟲害治理和消毒防病技術(shù)、原種試驗和蠶種制造等新技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)有機(jī)結(jié)合的技術(shù)路線。具體參見下圖：