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    熒光法測定水中葉綠素a的影響因素分析

    2020-01-03 04:19:58鞏元帥宋靜靜2古小超
    水資源開發(fā)與管理 2020年10期
    關(guān)鍵詞:熒光法藻類葉綠素

    鞏元帥 宋靜靜2 古小超

    (1.天津市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心,天津 300191;2.天津市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院,天津 300191)

    富營養(yǎng)化是國內(nèi)河流湖泊普遍面臨的主要環(huán)境問題,對藻類等浮游植物生長及藻華暴發(fā)具有重要的影響[1]。葉綠素a是藻類等浮游植物光合作用色素,是表征水體中浮游植物生物量的重要監(jiān)測指標(biāo)之一,廣泛應(yīng)用于河流湖泊水質(zhì)評價和富營養(yǎng)化評價。目前葉綠素a 的測定方法有熒光法、分光光度法、高效液相色譜法、遙感法等,其中分光光度法是國內(nèi)測定葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)方法,該方法測定簡單,但人工提取葉綠素和測定過程較為繁瑣[2]。與分光光度法相比,熒光法可以不受采樣時間和地點的限制,消除取樣、保存、測量過程中人為因素的影響,可實現(xiàn)現(xiàn)場大批量、連續(xù)快速測定葉綠素a的含量[3]。目前,在湖泊、海洋水質(zhì)在線監(jiān)測中,基于熒光法的葉綠素a監(jiān)測儀應(yīng)用較為廣泛。

    1 熒光法基本原理

    葉綠素是一種酯類化合物,是由葉綠酸和甲醇、葉醇酯化反應(yīng)而生成。葉綠素作為一種熒光物質(zhì),受光照后,其分子吸收了和它特征頻率相一致的光,躍遷到能量較高的激發(fā)態(tài),激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定,返回能量較低的基態(tài)時,釋放相應(yīng)的能量產(chǎn)生熒光。當(dāng)葉綠素a經(jīng)波長為450nm左右的藍(lán)光照射后,會激發(fā)出波長為680nm左右的紅光,通過檢測激發(fā)光的熒光強(qiáng)度,來計算葉綠素a的含量[4]。

    2 熒光法影響因素

    2.1 外界環(huán)境因素的影響

    2.1.1 濁度

    熒光法是通過測定水樣經(jīng)過光照后產(chǎn)生熒光的強(qiáng)度計算葉綠素a的濃度。水樣中顆粒物、懸浮物等物質(zhì)會影響光在水樣中的傳播,使激發(fā)光和熒光發(fā)生反射、散射等,對熒光測定結(jié)果造成影響。研究表明,濁度對葉綠素a測定的影響主要分為懸浮物自身產(chǎn)生熒光的熒光效應(yīng)及對光線遮擋的遮蔽效應(yīng),兩者均會對熒光測定結(jié)果產(chǎn)生影響[5]。葉陳軍等[3]探討了熒光效應(yīng)和遮蔽效應(yīng)對測定結(jié)果的影響,并根據(jù)實測數(shù)據(jù)提供一種葉綠素?zé)晒庥嫽跐岫鹊男拚椒?,校?zhǔn)后的熒光值與真實葉綠素?zé)晒庵递^為接近。

    2.1.2 pH值

    pH值是藻類生長過程中最重要的影響因子之一,pH值對微藻細(xì)胞生長和油脂積累的影響主要在于改變細(xì)胞膜電荷和營養(yǎng)物的離子化程度,進(jìn)而改變細(xì)胞的活性。 水體中過酸過堿的環(huán)境條件會干擾藻類細(xì)胞對物質(zhì)的吸收,影響其生長代謝活性及葉綠素產(chǎn)量,對熒光特性產(chǎn)生一定的影響。呂鵬翼[4]在研究pH值對葉綠素現(xiàn)場檢測儀測定結(jié)果影響中發(fā)現(xiàn),當(dāng)pH值在中性范圍內(nèi)時,銅綠微囊藻測定值變化較小,酸性或堿性測定誤差增大。薄香蘭等[6]以小球藻為研究對象,研究不同pH值對其葉綠素?zé)晒狻⑷~綠素含量和細(xì)胞密度的影響,結(jié)果表明pH值為7時,熒光活性最高,pH值為9時,熒光活性下降。

    2.1.3 水溫

    熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響較大。當(dāng)溫度降低時,熒光物質(zhì)分子躍遷吸收的能量越高,回到基態(tài)時,釋放的熒光量子越高,熒光強(qiáng)度越高;溫度升高時則相反[7]。藻類等浮游植物自身受環(huán)境溫度影響較大,當(dāng)溫度變化時,活體藻結(jié)構(gòu)、光合速率或葉綠體的微環(huán)境發(fā)生了改變,從而影響了葉綠素a的熒光特性。呂鵬翼等[8]研究了溫度對斜生柵藻、蛋白核小球藻及銅綠微囊藻熒光強(qiáng)度的影響,并計算了溫度系數(shù),結(jié)果表明隨著溫度升高,3種活體藻熒光強(qiáng)度均下降。

    2.1.4 水樣濃度

    熒光法測定溶液物質(zhì)含量時,在一定濃度范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度與溶液濃度成正比,可根據(jù)熒光強(qiáng)度換算出溶液中熒光物質(zhì)的含量,對于濃度較高的溶液,熒光強(qiáng)度與濃度不成線性關(guān)系。當(dāng)溶液濃度過高時,一方面會導(dǎo)致激發(fā)光透光性減弱,另一方面會發(fā)生熒光自猝滅和熒光再吸收現(xiàn)象,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低[7]。所以,在利用熒光法現(xiàn)場測定水體中葉綠素a的濃度時,在藻類濃度較高時,需適當(dāng)進(jìn)行稀釋處理。

    2.1.5 其他色素

    在藻類等浮游植物葉綠素分子中,除了葉綠素a,還存在葉綠素b和葉綠素c。其中葉綠素a和葉綠素b在化學(xué)性質(zhì)上具有一定的相似性,兩者的激發(fā)和發(fā)射光譜存在明顯的重疊。因此,在利用熒光法現(xiàn)場測定水體中葉綠素a的濃度時,需對測定的熒光強(qiáng)度進(jìn)行修正,扣除葉綠素b所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。為提高測量精度,許多專家學(xué)者利用同步熒光法測定葉綠素a含量,研究表明,測定結(jié)果基本不受其他色素干擾。

    2.2 擬合模型

    熒光法測定水體中葉綠素a,一般采用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法進(jìn)行計算,該方法簡單,對于水質(zhì)干凈、常年變化穩(wěn)定的水體,能較好地反映出熒光強(qiáng)度與葉綠素a濃度之間的關(guān)系。但在實際應(yīng)用中工作曲線并非完全是線性的,對于復(fù)雜的水體,線性擬合會導(dǎo)致測定結(jié)果出現(xiàn)較大誤差。因此,為解決這類問題,將偏最小二乘法、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、支持向量回歸等方法應(yīng)用到模型擬合中。但這些方法計算較為復(fù)雜,在擬合過程中需要較多的測量數(shù)據(jù),建立過程比較繁瑣。

    2.3 運(yùn)行維護(hù)

    在水質(zhì)自動監(jiān)測中,采用熒光法的葉綠素a在線監(jiān)測儀進(jìn)行監(jiān)測,具有測定快捷、維護(hù)簡單等特點,適用于飲用水、海洋葉綠素a的監(jiān)測。但受水體中微生物影響,儀器表面容易附著浮游植物及動物,受其生命活動影響,會加速儀器老化,導(dǎo)致生物腐蝕 ,影響儀器測量的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。在對儀器的日常維護(hù)工作中,根據(jù)運(yùn)行要求,工作人員應(yīng)及時清理儀器表面附著的微生物,使儀器保持干凈。定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn),開展實驗室比對,確保儀器穩(wěn)定運(yùn)行。當(dāng)發(fā)現(xiàn)儀器損壞時及時進(jìn)行更換備件,保證監(jiān)測數(shù)據(jù)的連續(xù)性和完整性。

    3 結(jié) 語

    熒光法在水質(zhì)較好的水體中測定結(jié)果較為準(zhǔn)確,當(dāng)水質(zhì)較差時,由于影響因子較多,熒光法測定誤差則會增大。為減小環(huán)境因子對監(jiān)測儀器的影響,應(yīng)做好以下工作:?加強(qiáng)監(jiān)測儀器維護(hù),尤其在夏季,保持儀器表面清潔干凈;?采用溫度補(bǔ)償、濁度補(bǔ)償?shù)确绞?,消除水溫變化、懸浮顆粒等對葉綠素a測定結(jié)果的影響;?利用同步熒光等對測試方法進(jìn)行優(yōu)化,扣除葉綠素b對測定結(jié)果的影響;?在擬合模型建立過程中,對比研究偏最小二乘法、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、支持向量回歸等方法在葉綠素測定中的應(yīng)用,提高計算結(jié)果準(zhǔn)確度。

    利用熒光法可快速實現(xiàn)水體中葉綠素a含量的測定,與實驗室分光光度法相比,操作簡單、時效性強(qiáng),可節(jié)省人力、物力。隨著地表水資源、海洋環(huán)境保護(hù)力度的不斷加強(qiáng),水體富營養(yǎng)化監(jiān)測工作將愈加重要,熒光法在葉綠素a測定中的應(yīng)用將越來越廣泛。

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