抗Ⅱ型膠原抗體水平與血清陰性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動相關(guān)性分析

余方媛，王紅艷，馮丹丹，耿晶晶，占旖晴，徐 亮，袁 慧

(1.皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，安徽 蕪湖 241001；2.皖南醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院，安徽 蕪湖 241002)

血清陰性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[1](seronegative rheumatoid arthritis，SNRA)是指符合1987年ACR或2010年ACR/EULAR關(guān)于RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，但血清類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor,RF)、抗角蛋白抗體(anti-keratin antibody,AKA)、抗核周因子(antiperinuclear factor,APF)及抗環(huán)瓜氨酸多肽(anti-cyclic citrullinated peptide,CCP)抗體均陰性的患者。雖然目前現(xiàn)有的檢查方法和水平無法檢測出SNRA患者體內(nèi)血清自身抗體，但不能排除可能存在潛在的相關(guān)抗體，目前國內(nèi)尚無統(tǒng)一認(rèn)識[2]。由于缺乏對SNRA有效的血清判斷指標(biāo)，對早期、尚未出現(xiàn)放射學(xué)骨破壞的SNRA患者往往很難做出及時(shí)有效的診斷和治療，這對該疾病早期診斷提出了新的挑戰(zhàn)。Ⅱ型膠原蛋白(typeⅡ collagen,CⅡ)[3]作為一種與RA相關(guān)的抗原在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的發(fā)病中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)[4]在一部分血清陰性RA患者中可檢測出抗CⅡ，但其水平是否與SNRA疾病活動具有相關(guān)性尚未知曉。

為進(jìn)一步研究抗CⅡ抗體水平是否與SNRA疾病活動具有相關(guān)性，探討該指標(biāo)的血清水平是否能作為該疾病的輔助診斷和監(jiān)測療效指標(biāo)，本研究擬檢測SNRA患者血清抗CⅡ抗體水平，結(jié)合臨床資料探索其對SNRA的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年1～9月在弋磯山醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院、門診隨訪的SNRA患者共35例,均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)或2010年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)，并且血清RF及CCP抗體均為陰性。其中男4例,女31例,年齡24～75歲，平均年齡(54.63±12.91)歲;另收集同期在弋磯山醫(yī)院風(fēng)濕科門診或住院的非RA的其他風(fēng)濕病患者(皮肌炎、干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性多肌痛等結(jié)締組織病)，共15例，其中男性2例，女性13例，年齡26～61歲，平均年齡(42.6±10.82)歲。另收集健康體檢者，共10例，其中男2例，女8例，年齡29～65歲，平均年齡(46.6±10.10)歲。對SNRA患者進(jìn)行血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP) 檢測及關(guān)節(jié)影像學(xué)檢查(X線、MRI)，并做出DAS28評分。

1.2 方法 血清標(biāo)本制備：采新鮮血5 mL，二步離心法分離血清，-20℃冰箱保存?？笴Ⅱ抗體測定：酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法，試劑盒購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，按試劑盒說明操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較用t檢驗(yàn)或方差分析，組間率的比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3組間血清抗CⅡ抗體水平表達(dá)比較 35例SNRA患者血清平均抗CⅡ抗體水平高于非RA組和健康對照組(F=3.669,P=0.032)；抗CⅡ抗體陽性率在SNRA組為28.57%，也高于非RA組和健康對照組(χ2=6.059，P=0.048)(見表1)。

表1 3組抗CⅡ抗體表達(dá)結(jié)果的比較[n(%)]

組別n抗CⅡ抗體值/(μg/L)抗CⅡ抗體陽性率SNRA組3538.38±30.0910(28.57)非RA組1524.87±13.911(6.67)健康對照組1013.75±6.960(0)P0.0320.048

2.2 兩組間實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)表達(dá)比較 抗CⅡ抗體陽性組ESR、CRP及DAS28評分都高于抗CⅡ抗體陰性組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，各組間指標(biāo)具體見表2。

表2 兩組間實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)表達(dá)比較

組別nESR/(mm/h)CRP/(mg/L)DAS28抗CⅡ抗體陽性1063.05±28.3974.92±34.485.32±0.75抗CⅡ抗體陰性2533.59±30.0464.42±30.314.21±1.30t17.975.5720.57P0.000.000.00

2.3 組間活動參數(shù)的相關(guān)性 通過采用Pearson相關(guān)性分析血清抗CⅡ抗體水平與臨床活動參數(shù)的相關(guān)性，結(jié)果顯示35例SNRA患者血清平均抗CⅡ抗體水平與ESR呈正相關(guān)(r=0.394,P=0.019),與CRP(r=0.100,P=0.566)、DAS28評分(r=0.287,P=0.094)之間無顯著相關(guān)性。

2.4 不同X射線分期SNRA患者血清抗CⅡ抗體水平的比較 根據(jù)美國風(fēng)濕病學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)[5]，對35例SNRA患者雙手X線正位片進(jìn)行分期，Ⅰ期：關(guān)節(jié)或關(guān)節(jié)面骨質(zhì)疏松；Ⅱ期：關(guān)節(jié)面下骨質(zhì)疏松，偶見關(guān)節(jié)面囊性破壞或骨質(zhì)侵蝕破壞；Ⅲ期：明顯關(guān)節(jié)面破壞或骨侵蝕破壞，關(guān)節(jié)間隙狹窄，關(guān)節(jié)半脫位等改變；Ⅳ期：除Ⅱ、Ⅲ期病變外，并有纖維性或骨性強(qiáng)直。不同X射線分期患者血清抗CⅡ抗體水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，骨破壞越嚴(yán)重，血清抗CⅡ抗體水平越高(見表3)。

表3 抗CⅡ抗體滴度與X線分期的關(guān)系

分期n抗CⅡ抗體水平/(μg/L)Ⅰ期724.18±12.49Ⅱ期1228.57±20.84Ⅲ期1531.66±22.22Ⅳ期1131.75F532.81P0.00

3 討論

本研究采用ELISA方法檢測35例SNRA患者血清中抗CⅡ抗體水平，研究結(jié)果顯示該組患者抗體陽性率為28.57%，其陽性率高于健康對照組及其他風(fēng)濕病組，提示該抗體可能在SNRA的發(fā)生發(fā)展過程起著重要作用。為進(jìn)一步探討SNRA患者血清中抗CⅡ抗體與疾病急性期反應(yīng)物水平的關(guān)系，對抗CⅡ抗體陽性組和抗CⅡ抗體陰性組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)陽性組的ESR、CRP及DAS28評分都高于陰性組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該抗CⅡ抗體在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用，能夠使血清中的各項(xiàng)急性期反應(yīng)物水平增加，這與Manivel[6]的研究保持一致。相關(guān)性分析抗CⅡ抗體水平與臨床活動參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果表明SNRA患者血清平均抗CⅡ抗體水平與ESR呈正相關(guān)，且抗CⅡ抗體陽性組ESR、CRP及DAS28評分高于陰性組，提示檢測抗CⅡ抗體與SNRA的疾病活動度有關(guān)，可能作為疾病活動強(qiáng)弱的輔助評價(jià)指標(biāo)。本研究還發(fā)現(xiàn)X線分期與抗CⅡ抗體滴度有關(guān)，尤其是當(dāng)患者出現(xiàn)骨侵蝕時(shí)，抗CⅡ抗體水平升高更明顯，提示CⅡ參與了SNRA骨破壞的發(fā)生，血清抗CⅡ抗體水平與骨質(zhì)破壞有一定關(guān)系，這對RA病情的進(jìn)展和嚴(yán)重性有一定的參考價(jià)值，Mullazehi[7]的研究也證實(shí)這一觀點(diǎn)。

早在2001年愛德華茲和劍橋就發(fā)現(xiàn)Th1型反應(yīng)[8](RA滑膜中的T淋巴細(xì)胞可以分化為Th1樣亞群，Th1型細(xì)胞分泌的IFN-g可以誘導(dǎo)局部滑膜巨噬細(xì)胞的活化，然后釋放炎性細(xì)胞因子，如IL-1b，IL-1b可以激活滑膜細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì))與抗CⅡ抗體的產(chǎn)生有關(guān)，抗CⅡ抗體被認(rèn)為與軟骨膠原結(jié)合，激活補(bǔ)體系統(tǒng)并吸引炎性細(xì)胞趨向組織部位，繼發(fā)炎性浸潤，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)膠原酶升高，引發(fā)組織損傷，從而在疾病早期階段對炎癥過程產(chǎn)生作用[9-10]。因此我們認(rèn)為抗CⅡ抗體可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展的過程，其能否作為疾病早期診斷和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)需進(jìn)一步研究探討。目前由于早期SNRA患者體內(nèi)尚無檢測出血清自身抗體的報(bào)道，故一定程度上無法做到早期診斷和及時(shí)治療，而檢測血清抗CⅡ抗體水平讓該疾病的早期診斷成為了可能。Strollo等[11]的研究也證實(shí)了這一觀點(diǎn)，推測結(jié)合抗CⅡ抗體與RF、抗CCP抗體有可能提高SNRA診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，本研究表明血清抗CⅡ抗體水平與SNRA的疾病活動度有相關(guān)性，且血清抗CⅡ型膠原抗體血清的檢測有助于提高SNRA的診斷,可作為輔助診斷和監(jiān)測療效的指標(biāo)，而目前本研究對于抗CⅡ抗體對RA患者關(guān)節(jié)炎癥及破壞的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究和挖掘。