市售農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)酶試劑盒對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥?kù)`敏度的測(cè)定

摘要：了解農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)酶試劑盒對(duì)不同農(nóng)藥的靈敏度。通過(guò)4種市售酶試劑盒對(duì)克百威等5種農(nóng)藥分別進(jìn)行5個(gè)濃度的測(cè)定，來(lái)比較試劑盒的優(yōu)劣。4種酶試劑盒不是對(duì)所有的有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥都敏感;4種試劑盒優(yōu)劣為：試劑盒A>試劑盒C>試劑盒B>試劑盒D。在日常檢測(cè)中需要對(duì)所購(gòu)買(mǎi)的快檢產(chǎn)品進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，選取適合的產(chǎn)品。在條件允許的情況下對(duì)于抑制率超過(guò)50%的樣品不僅需要復(fù)測(cè)，還需要采用色譜、質(zhì)譜定性、定量等方法進(jìn)行檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：酶試劑盒;有機(jī)磷;氨基甲酸酯類農(nóng)藥;靈敏度

中圖分類號(hào)：S-3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191215006

引言

在食品安全問(wèn)題越來(lái)越受到關(guān)注的今天，水果蔬菜中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題日益突出，嚴(yán)重危害人體健康，因此準(zhǔn)確又快速篩查出果蔬中的農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)具有重大意義[1，2]。當(dāng)前農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主要方法為酶抑制率法和色譜法等[3]。酶抑制率法由于成本低、操作簡(jiǎn)便、時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于流通市場(chǎng)及蔬菜基地的快速篩查中，在果蔬的農(nóng)藥殘留的監(jiān)管中，成為一種重要的監(jiān)管手段[4-6]。市面上出現(xiàn)了多種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)酶試劑盒，質(zhì)量參差不齊，且在進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，僅能檢測(cè)大部分有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥，而且對(duì)不同的農(nóng)藥品種靈敏度是不一樣的[7]。作為農(nóng)藥殘留酶試劑的生產(chǎn)廠家，為了更好地改進(jìn)、研發(fā)酶試劑以及為使用者在選購(gòu)產(chǎn)品時(shí)提供一定的參考借鑒，采購(gòu)了2種市售其他家的酶試劑和自身生產(chǎn)的2種不同狀態(tài)的酶對(duì)5種農(nóng)藥的靈敏度進(jìn)行了測(cè)試，以KJ201710國(guó)家食藥監(jiān)總局2017年第113號(hào)公告附件中的方法為依據(jù)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

GNSPRD-16型16通道農(nóng)殘速測(cè)儀（廈門(mén)綠安分析儀器有限公司）;HH-2型恒溫水浴鍋（金壇區(qū)白塔金昌實(shí)驗(yàn)儀器廠）;JJ-200電子天平（河南雙杰計(jì)量?jī)x器有限公司）;5mL移液槍（寧波托普森科學(xué)儀器有限公司）;100μL移液槍（美國(guó)Thermo公司）。

1.2試劑

酶試劑盒A（鄭州華洲，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態(tài)）;酶試劑盒B（鄭州華洲，酶、顯色劑、底物、緩沖劑均為粉末狀）;酶試劑盒C（外采品牌，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態(tài)）;酶試劑盒D（外采品牌，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態(tài)）。在實(shí)驗(yàn)前按照說(shuō)明書(shū)要求將試劑盒里的緩沖劑、酶試劑（粉末狀需要配制，液態(tài)狀直接使用）、顯色劑、底物進(jìn)行配制：緩沖劑用500mL的蒸餾水溶解配制，粉末狀酶試劑和顯色劑分別用10mL的緩沖液溶解混勻，底物用10mL的純凈水進(jìn)行溶解配制。

克百威、敵百蟲(chóng)、丙溴磷、敵敵畏、滅多威5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（1000μg/mL，農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所），使用時(shí)按照需要梯度稀釋成1μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)參照KJ201710蔬菜中敵百蟲(chóng)、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測(cè)中第1種方法酶抑制率法，根據(jù)方法中給出的檢測(cè)限：敵百蟲(chóng)0.1mg/kg，丙溴磷0.5mg/kg，滅多威0.2mg/kg，克百威0.02mg/kg，敵敵畏0.2mg/kg為依據(jù)，不同的農(nóng)藥按照檢出限不同設(shè)置5個(gè)濃度梯度，每1個(gè)濃度梯度設(shè)置3次重復(fù)。

1.4對(duì)照液的測(cè)試

分別移取3mL緩沖溶液于10mL 帶蓋的玻璃瓶中，再加入0.1mL的酶液、0.1mL的顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min，再加入0.1mL底物搖勻，立即放入儀器的比色池中，用農(nóng)殘儀測(cè)定3min內(nèi)的吸光度變化值即為ΔA0。

1.5樣品處理方法

向1.3中制備的5個(gè)濃度的農(nóng)藥中分別加入10mL緩沖液，混勻后備用。分別移取3mL的樣品提取液于10mL 帶蓋的玻璃瓶中，依次往提取液中加入0.1mL的酶液、0.1mL的顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min，再加入0.1mL底物搖勻，立即放入儀器的比色池中，用農(nóng)殘儀測(cè)定3min內(nèi)的吸光度變化值，通過(guò)儀器讀出其抑制率。

1.6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理

根據(jù)每一個(gè)處理的3次測(cè)定值計(jì)算出平均值，根據(jù)平均值列出抑制率、農(nóng)藥濃度的數(shù)據(jù)表（見(jiàn)表1），根據(jù)數(shù)據(jù)比較4種不同酶試劑盒對(duì)5種農(nóng)藥的靈敏度。

4種酶試劑盒在KJ201710中5種農(nóng)藥檢出限濃度的抑制率與農(nóng)藥濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系（見(jiàn)表2），根據(jù)數(shù)據(jù)可以看出更接近或優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)方法的酶試劑盒。

2結(jié)果分析

從表1中可以看出，對(duì)于克百威來(lái)說(shuō)，試劑盒A和試劑盒C均在推薦的檢出限濃度可以測(cè)出陽(yáng)性，試劑盒A在克百威濃度為0.005mg/L時(shí)抑制率即為60.8%，而試劑盒C在克百威濃度為0.02mg/L時(shí)抑制率為59.1%，試劑盒B在克百威濃度為0.04mg/L時(shí)抑制率為57.1%。說(shuō)明對(duì)于克百威來(lái)說(shuō)，試劑盒C是最佳的選擇。

對(duì)敵百蟲(chóng)來(lái)說(shuō)，濃度為0.01mg/L時(shí)，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率分別為77.8%、80.1%、70.6%，試劑盒A在敵百蟲(chóng)濃度為0.03mg/L抑制率為59.9%，而此時(shí)另外3種試劑盒抑制率均超過(guò)90%，說(shuō)明這4種試劑盒對(duì)敵百蟲(chóng)都比較敏感，尤其是試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D，同時(shí)也反應(yīng)出對(duì)于試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D應(yīng)該稀釋更低的濃度去進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

對(duì)丙溴磷來(lái)說(shuō)，濃度為0.05mg/L時(shí)，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率分別為60.8%、60.0%、66.2%，而試劑盒A在丙溴磷濃度為0.5mg/L時(shí)抑制率為69.2%，說(shuō)明對(duì)于丙溴磷來(lái)說(shuō)，試劑盒A是最佳選擇，其他3種試劑盒普遍存在對(duì)丙溴磷較敏感。

對(duì)敵敵畏來(lái)說(shuō)，濃度為0.03mg/L時(shí)，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率均超過(guò)90%，試劑盒A在敵敵畏濃度為0.06mg/L時(shí)抑制率為53.9%，在敵敵畏濃度為0.2mg/L時(shí)抑制率為72.7%，其它3種試劑盒的抑制率均達(dá)到100%，說(shuō)明4種試劑盒均對(duì)敵敵畏比較敏感，而試劑盒A在敵敵畏濃度增加過(guò)程種，抑制率增幅不大，比較穩(wěn)定。

對(duì)滅多威來(lái)說(shuō)，4種試劑盒的抑制率趨勢(shì)不一樣，試劑盒D在實(shí)驗(yàn)的5個(gè)濃度中始終沒(méi)有達(dá)到50%以上，試劑盒C在滅多威濃度為0.2mg/L，抑制率達(dá)到50%以上，而試劑盒A、B在濃度為0.1mg/L時(shí)，抑制率即達(dá)到50%以上，但是在濃度為0.2mg/L抑制率增加的并不多。

表2主要是對(duì)表1進(jìn)行簡(jiǎn)化，能夠更直觀的反應(yīng)出4種試劑盒的優(yōu)劣，在方法推薦的檢出限下，試劑盒A整體要優(yōu)于另外3種試劑盒，尤其是對(duì)敵百蟲(chóng)、丙溴磷、敵敵畏來(lái)說(shuō)。

3結(jié)論

在方法推薦的檢出限下，4種試劑盒優(yōu)劣為：試劑盒A>試劑盒C>試劑盒B>試劑盒D，從表1和表2中也可得知，如果蔬菜中殘留了一定量的敵百蟲(chóng)、丙溴磷、敵敵畏，因?yàn)樵噭┖蠦、C、D均對(duì)低濃度的這3種農(nóng)藥敏感，就很容易導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn);而如果蔬菜中殘留了一定量的克百威、滅多威，因?yàn)樵噭┖蠨對(duì)這2種農(nóng)藥不靈敏反而容易導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。根據(jù)國(guó)標(biāo)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定[8]，樣品的抑制率達(dá)到50%則判定樣品農(nóng)藥殘留超標(biāo)，因?yàn)閲?guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每一種農(nóng)藥的限量不同，每種試劑盒對(duì)每一種農(nóng)藥的敏感度也不一樣，因此在日常檢測(cè)中需要對(duì)所購(gòu)買(mǎi)的快檢產(chǎn)品進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，選取適合的產(chǎn)品。在條件允許的情況下對(duì)于抑制率超過(guò)50%的樣品不僅需要復(fù)測(cè)，還需要采用色譜、質(zhì)譜定性、定量等方法進(jìn)行檢測(cè)。

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作者簡(jiǎn)介：

張欣（1987-），女，碩士，檢測(cè)部經(jīng)理。研究方向：食用農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)。