化學(xué)發(fā)光免疫分析法與酶聯(lián)免疫法檢測(cè)艾滋病病毒抗體的效果比較

李永剛, 李 寧, 易福凌

(陜西省西安市第一醫(yī)院, 檢驗(yàn)科, 陜西 西安, 710002)

艾滋病(AIDS)是危害極大的傳染病，由感染人類免疫缺陷病毒(HIV)引起，HIV可攻擊機(jī)體免疫系統(tǒng)，大量破壞淋巴細(xì)胞，使患者喪失免疫功能，從而更易感染各類疾病，病死率較高[1]。AIDS傳播速度快、潛伏期長(zhǎng)、危害范圍廣，采取有效方法診斷及監(jiān)測(cè)HIV對(duì)控制病毒傳播、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后意義重大[2]。檢測(cè)HIV抗體是判斷HIV感染的重要指標(biāo)，國(guó)內(nèi)現(xiàn)階段初篩HIV主要應(yīng)用雙抗體夾心法，其中酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)操作復(fù)雜、檢測(cè)周期長(zhǎng)，而電化學(xué)發(fā)光免疫法(ECLIA)具有簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)勢(shì)[3]。本研究比較ELISA與ECLIA篩查HIV抗體的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 血樣來源

選取2017年1月—2018年6月本院進(jìn)行HIV檢測(cè)的血液樣本12 457份。受檢者男7 218例，女5 239例; 年齡18～60歲，平均(31.27±7.09)歲。

1.2 儀器與試劑

ELISA應(yīng)用Bio- Rad 680型酶標(biāo)儀及新創(chuàng)試劑; ECLIA應(yīng)用Caris 200電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀及其配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 ELISA檢測(cè): 將待檢血液以800 轉(zhuǎn)/min離心，分離血清，嚴(yán)格按照HIV抗體檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行操作。取出酶標(biāo)板，設(shè)置3孔陽(yáng)性對(duì)照、2孔陰性對(duì)照、1孔空白對(duì)照、1孔樣品，并進(jìn)行標(biāo)記。每孔(除空白孔)分別加對(duì)應(yīng)陽(yáng)性、陰性對(duì)照品及樣品各100 μL。孵育(30min)、洗板(6次)、拍干。每孔(除空白孔)加酶標(biāo)記抗原100 μL, 再次孵育(20 min)、洗板(6次)、拍干。加底物液，避光反應(yīng)15 min后加終止液終止反應(yīng)。應(yīng)用酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度(OD)值, cut- off值=陰性對(duì)照OD均值+0.1, 樣品OD值>cut- off值為陽(yáng)性。

1.3.2 ECLIA檢測(cè): 將待測(cè)樣品與生物素抗HIV- 1p24單克隆抗體孵育成抗原- 抗體復(fù)合物，應(yīng)用磁石收集磁微粒，除去未反應(yīng)物質(zhì)，加抗HIV抗原[經(jīng)堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記]與磁微粒的HIV抗體反應(yīng)，再次應(yīng)用磁石收集磁微粒，除去未反應(yīng)物質(zhì)，加入發(fā)光底物攪拌，分散磁微粒，添加清洗劑。檢測(cè)復(fù)合物發(fā)光強(qiáng)度，計(jì)算cut- off值。

2 結(jié) 果

2.1 檢測(cè)陽(yáng)性率

12 457份血樣中, ELISA檢出陽(yáng)性標(biāo)本35份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.28%; ECLIA檢出陽(yáng)性標(biāo)本32份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.26%; 經(jīng)HIV確認(rèn)中心檢測(cè)確認(rèn)共30份陽(yáng)性。ELISA與ECLIA檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 符合情況

ELISA檢出陽(yáng)性血樣的OD/CO值(CO為cut- off值)多在1.35～1.80范圍內(nèi)(P<0.05), 占全部陽(yáng)性檢出標(biāo)本的62.86%(22/35), 且ELISA的OD/CO值越大，與確認(rèn)結(jié)果的符合率越高; ECLIA檢出陽(yáng)性血樣的cut- off值多在150.00～220.00(P<0.05), 占全部陽(yáng)性檢出標(biāo)本62.50%(20/32), 且ECLIA的cut- off值越大，與確認(rèn)結(jié)果的符合率越高。見表1、2。

表1 ELISA檢測(cè)結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果符合情況

與OD/CO值1.35～1.80比較, *P<0.05。

表2 ECLIA檢測(cè)結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果符合情況

與cut- off值150.00～220.00、220.00～300.00比較, *P<0.05。

3 討 論

國(guó)內(nèi)AIDS篩查的主要方法是血清病毒抗體檢測(cè)，同時(shí)輔之以病毒及抗原檢測(cè)，其中HIV抗體檢測(cè)是診斷AIDS的重要指標(biāo)。多數(shù)HIV感染可持續(xù)終生，且HIV潛伏期較長(zhǎng)，AIDS患者發(fā)病前可無癥狀地生活多年[4]。ELISA及ECLIA均是中國(guó)檢測(cè)HIV的常用方法，本研究比較2種檢測(cè)方法在HIV抗體檢測(cè)中的效果。研究結(jié)果顯示, ELISA檢出陽(yáng)性標(biāo)本35份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.28%; ECLIA檢出陽(yáng)性標(biāo)本32份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.26%; 2種方法檢測(cè)陽(yáng)性率無顯著差異。

ELISA是將抗原或抗體吸附于固相載體表面并應(yīng)用酶標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)的技術(shù)，具有載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)[5]。但ELISA需分離游離抗原、抗體及結(jié)合態(tài)抗原、抗體，需反復(fù)加樣、洗板，操作步驟繁瑣，造成誤差的概率較大，且酶標(biāo)板的孔間差異也可導(dǎo)致變異系數(shù)增高，增加了臨床診斷難度[6]。研究[7]指出，對(duì)于低濃度HIV標(biāo)本, ELISA可因靈敏度低等原因造成假陰性。ECLIA是電化學(xué)發(fā)光、免疫測(cè)定相結(jié)合的技術(shù)，包含磁性微珠包被、生物素- 親和素技術(shù)等多種先進(jìn)技術(shù)，具有靈敏度高、可自動(dòng)化、線性范圍寬、標(biāo)記物有效期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，可大幅度提高HIV抗體檢測(cè)準(zhǔn)確率[8-9]。

本研究應(yīng)用羅氏Caris 200電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀，實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化，有助于降低批內(nèi)、批間誤差。本研究中2種檢測(cè)方法檢測(cè)的陽(yáng)性血樣經(jīng)HIV確認(rèn)中心確認(rèn)后有30份為陽(yáng)性。ELISA檢出陽(yáng)性血樣的OD/CO值多在1.35～1.80范圍內(nèi), ECLIA檢出陽(yáng)性血樣的cut- off值多在150.00～220.00范圍內(nèi)，且隨ELISA、ECLIA檢測(cè)的OD/CO值或cut- off值增大，與確認(rèn)結(jié)果的符合率越高。在較低濃度下, ECLIA檢測(cè)HIV抗體與確認(rèn)結(jié)果的符合率較ELISA更高，提示ECLIA檢測(cè)HIV抗體準(zhǔn)確率優(yōu)于ELISA, 與韓春俐等[10]研究結(jié)論一致。

ECLIA包括電化學(xué)反應(yīng)及化學(xué)發(fā)光過程，標(biāo)記抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后啟動(dòng)電發(fā)光過程，且電化學(xué)反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光過程可循環(huán)進(jìn)行，因此ECLIA具高靈敏性特點(diǎn)[11]。本研究中, ECLIA測(cè)定在封閉的流動(dòng)系統(tǒng)中進(jìn)行，有效降低交叉污染，同時(shí)保證了試劑的穩(wěn)定性，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。ECLIA完成僅需20 min左右，而ELISA需1～2 h方可出結(jié)果, ECLIA較ELISA大幅縮短了初篩時(shí)間，有助于提高臨床工作效率。研究[12]提出ECLIA較傳統(tǒng)抗體分析法可提前發(fā)現(xiàn)HIV感染，縮短診斷窗口期。ELISA的優(yōu)點(diǎn)眾多，但其成本相對(duì)較高，基層醫(yī)院較難普及，同時(shí)任何檢測(cè)方法均無法完全排除樣本品不存在低濃度抗體，ECLIA檢測(cè)陰性同樣不能完全排除HIV感染的可能性，臨床應(yīng)用需結(jié)合多方面情況考慮。