XN9000血液分析儀兩模塊的性能評價

趙妍 喻超 倪維

湖北省中醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430074

全血細胞分類計數(shù)是血液學(xué)實驗室最經(jīng)常使用的測試方法，不斷開發(fā)更新的技術(shù)使自動血液分析儀能夠提供更準(zhǔn)確的結(jié)果[1]。模塊化的血液分析系統(tǒng)內(nèi)部的智能有機配合，能夠?qū)崿F(xiàn)大批量標(biāo)本的檢測[2]。XN-9000是一款可擴展的模塊化自動化血液分析系統(tǒng)，為了滿足目前醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可的需求，保證實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[3-5]，現(xiàn)對實驗室配置A1（XN20）和B4（XN10）分析模塊的XN9000血液分析系統(tǒng)性能進行驗證。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

本研究所選取新鮮抗凝全血標(biāo)本均來自湖北省中醫(yī)院光谷院區(qū)門診和住院患者，研究起止時間為2017年7～9月。

1.2 儀器與試劑

XN-9000血液分析系統(tǒng)及原裝試劑、染液、玻片、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（日本Sysmex 公司），LH750血液分析儀及原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控物（美國BECKMANCOULTER 公司）、Olympus 顯微鏡（日本Olympus 公司）、瑞氏-吉姆薩和煌焦油蘭染液（珠海BASO 公司）。

1.3 方法

按儀器操作規(guī)程操作，結(jié)果均按照《WS/T 406-2012臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》[6]進行判定。

1.3.1 本底及空白計數(shù)

取稀釋液當(dāng)作樣本上機檢測，連測3次。分別記錄兩個模塊測試結(jié)果。

1.3.2 攜帶污染率

每個項目各取1份高、低濃度樣本，連續(xù)在兩模塊上測定3次，高濃度結(jié)果記為H1、H2、H3；低濃度檢測結(jié)果為L1、L2、L3。按公式：攜帶污染率=（L1-L3）/（H3-L3）×100%計算每個模塊各項目的攜帶污染率。

1.3.3 精密度

批內(nèi)精密度：取1份各項目結(jié)果均在正常參考區(qū)間的標(biāo)本，重復(fù)檢測11次，計算后10次檢測結(jié)果的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV）。批間精密度：以室內(nèi)質(zhì)控在控結(jié)果的CV 為評價指標(biāo)，使用2個濃度（Level 2、Level 3）的質(zhì)控品，檢測當(dāng)天進行1次室內(nèi)質(zhì)控，若出現(xiàn)失控數(shù)據(jù)，糾正后按批號計算所有在控數(shù)據(jù)的CV。

1.3.4 正確度

取10份各項目結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)的樣本，在兩個模塊及LH750上依次檢測。每個樣本2次，計算2次結(jié)果的均值。以作為規(guī)范檢測系統(tǒng)[6]的LH750所測均值為標(biāo)準(zhǔn)，計算兩模塊結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)間的偏倚。

1.3.5 線性

針對不同項目，選一份結(jié)果接近廠商線性范圍上限的高值標(biāo)本（H），分別按100%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、0%的比例進行稀釋，每個稀釋度連續(xù)測3次并計算均值。將每個稀釋度均值和理論計算值做線性回歸，計算回歸方程a 值（斜率）及相關(guān)系數(shù)平方R2。

1.3.6 實驗比較

1.3.6.1 白細胞五分類與人工計數(shù)比較 比對實驗在精密度實驗驗證之后進行，每日保證儀器穩(wěn)定質(zhì)控在控，隨機選擇8份標(biāo)本，連續(xù)5 d 共40份標(biāo)本。在A1、B4模塊分別用全血細胞計數(shù)（CBC）+白細胞分類計數(shù)（Diff）模式測試后，于SP-10推片機上制備標(biāo)準(zhǔn)血片并染色，按照《WS/T246-2005白細胞分類計數(shù)參考方法》[7]進行白細胞五分類計數(shù)，分別由2名中級以上職稱資深細胞學(xué)檢驗人員重復(fù)分類計數(shù)2次并計算均值。

1.3.6.2 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)與人工計數(shù)比較 每日儀器狀態(tài)穩(wěn)定、質(zhì)控在控的情況下，選取8份標(biāo)本，連續(xù)5 d共40份標(biāo)本，在A1模塊進行檢測，之后按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第4版）[8]的要求進行染色制片。由2名資深細胞學(xué)檢驗人員重復(fù)2次計數(shù)并計算均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，做一元線性回歸分析和Pearson 雙變量相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本底及空白計數(shù)

本底計數(shù)兩模塊各次檢測值均為0，符合白細胞≤0.5×109/L，紅細胞≤0.05×1012/L，血紅蛋白≤2.0 g/L，血小板≤10×109/L 的檢測要求。

2.2 攜帶污染率

白細胞、紅細胞、血紅蛋白、血小板的攜帶污染率A1模塊分別為-0.01%、0.13%、0.42%、0.00%，B4模塊分別為0.07%、0.00%、0.41%、0.00%，未超出白細胞≤3%，紅細胞≤2.0%，血紅蛋白≤2.0%，PLT≤4.0%的攜帶污染率標(biāo)準(zhǔn)[6]上限。

2.3 兩模塊的批內(nèi)精密度，批間精密度結(jié)果

兩模塊的批內(nèi)精密度、批間精密度結(jié)果見表1～2，精密度驗證結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)[6]要求。

2.4 A1、B4模塊的正確度驗證結(jié)果

A1、B4模塊的正確度驗證結(jié)果見表3，均未超出正確度驗證允許偏倚的最大范圍[6]。

表1 批內(nèi)精密度驗證結(jié)果（%）

表2 批間精密度驗證結(jié)果（%）

表3 A1、B4模塊的正確度驗證結(jié)果

2.5 A1、B4模塊的線性驗證結(jié)果

A1、B4模塊的線性驗證結(jié)果見表4，結(jié)果均未超出標(biāo)準(zhǔn)[6]要求。

表4 A1、B4模塊的線性驗證結(jié)果

2.6 A1模塊與手工計數(shù)檢測相關(guān)性分析

兩模塊白細胞分類和網(wǎng)織紅細胞檢測結(jié)果與手工計數(shù)均具有相關(guān)性（P ＜0.01），A1、B4模塊嗜堿性粒細胞相關(guān)系數(shù)分別為0.675、0.678，相比其他參數(shù)較小。見表5。

3 討論

XN9000是旨在滿足包含大量異常樣品的高通量實驗室的工作空間和效率要求而設(shè)計的模塊化分析系統(tǒng)。該儀器使用阻抗、電導(dǎo)率和光學(xué)檢測來確定全血細胞計數(shù)、白細胞分類和網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的參數(shù)。XN9000組件包括分類歸檔、自動推片和染色機、擴展信息處理單元和多達9個個性化分析器模塊。具有對空間要求不高、靈活適應(yīng)各種場地和檢測需求的特點[9]。該儀器還引入了一些改進和新的測量通道包括白細胞成核（WNR）、白細胞分類（WDF）、白細胞前體細胞（WPC）和熒光血小板（PLT-F）通道[10]。儀器的性能驗證是在安裝和操作驗證的基礎(chǔ)上，檢查儀器的重復(fù)性，評價儀器的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、靈敏度等指標(biāo)，是保證檢驗質(zhì)量的必要過程[11]。本室嚴(yán)格按照目前所運行的ISO15189質(zhì)量管理體系的程序文件和操作手冊，對XN9000做性能驗證，兩模塊的空白計數(shù)、攜帶污染率、正確度、精密度、線性結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)[6]。

表5 A1模塊與手工計數(shù)檢測相關(guān)性分析

白細胞分類與手工分類結(jié)果顯示顯著的相關(guān)性，這與熊仲波等[12]研究結(jié)果一致。相比其他細胞嗜堿性粒細胞的相關(guān)性較弱，可能與手工分類白細胞，總共只計數(shù)200個，而與其中嗜堿性粒細胞的比例低有關(guān)[7,13]。且血細胞本身有著復(fù)雜的生物學(xué)外觀，不一致的染色和光照變化，人工鏡檢本身受限于技術(shù)人員的技能和經(jīng)驗可能導(dǎo)致重復(fù)性差[14]。Ciepiela等[15]認(rèn)為血涂片制備過程會導(dǎo)致嗜酸性粒細胞損傷的比例增加，因此與自動化方法比較，人工檢查中嗜酸性粒細胞的數(shù)量較少是由于排除了破碎的細胞。任朝翔等[16]研究發(fā)現(xiàn)血液分析儀自動計數(shù)出現(xiàn)嗜堿性粒細胞結(jié)果不符，以異常淋巴細胞干擾最多見，此外還包括中毒性顆粒、未成熟粒細胞等的干擾。另有文獻[17-18]報道儀器分類識別異常淋巴細胞以及未成熟粒細胞還存在一定缺陷。因此儀器的局限和異常標(biāo)本本身的原因，都可能導(dǎo)致自動和手動計數(shù)嗜堿性粒細胞的差異。本研究標(biāo)本來自隨機日常門診住院患者，并未對異常淋巴或粒細胞及幼稚細胞進行區(qū)分，且在實際分類過程中對有核紅細胞和未成熟粒細胞進行剔除，不能排除此類不確定干擾，可能導(dǎo)致結(jié)果不符。有文獻[19]報道自動血液分析儀計數(shù)單核細胞的結(jié)果不太準(zhǔn)確，特別是在計數(shù)嚴(yán)重白細胞減少的樣本時。本研究中兩模塊單核細胞百分比與手工分類相關(guān)性較高，可能與比對實驗所選取的樣本中白細胞減少樣本所占比例較低有關(guān)。

網(wǎng)織紅細胞（RET）計數(shù)反映了人體骨髓的紅細胞生成活性[20]，對于骨髓功能狀態(tài)的監(jiān)測、貧血的診斷評估等有重要臨床意義。由于傳統(tǒng)的人工顯微鏡檢方法，受限于制片染色效果、鏡檢人員的經(jīng)驗等因素，存在變異較大且重復(fù)性較差的問題。隨著自動化學(xué)和熒光染色網(wǎng)織紅細胞RNA 技術(shù)的發(fā)展，目前，已經(jīng)出現(xiàn)了各種使用不同試劑和技術(shù)來測量網(wǎng)織紅細胞的分析儀。XN9000的RET 計數(shù)是運用Fluorocell RET染液，在稀釋的血樣中測定網(wǎng)織紅細胞數(shù)、網(wǎng)織紅細胞比率及血小板數(shù)。其中RET-He 是由Sysmex 開發(fā)的獨特項目，它使用了網(wǎng)織紅細胞散射光信號和Sysmex專有的運算法則。同時運用了新參數(shù)的自動化流式細胞分析技術(shù)，是網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的顯著進步，并且提供了可接受的精確度和偏差[21-22]。研究顯示使用熒光染料進行自動網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的分析儀之間有比較好的一致性[15,23]。本研究中A1模塊的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)與人工計數(shù)結(jié)果的比較，表現(xiàn)出良好的相關(guān)性（r=0.996）。此外，有文獻[24]報道某些血液成分、疾病狀態(tài)或熒光藥物會對儀器網(wǎng)織紅細胞計數(shù)結(jié)果造成干擾，本研究病例樣本局限，未對可能的干擾因素做進一步分類研究。實際工作中可以通過檢查儀器狀態(tài)、報警信息，查看歷史記錄、搜集病史信息等途徑來排查是否存在干擾因素，并用人工鏡檢來校正。

綜上所述，兩模塊XN9000血液分析系統(tǒng)的各項性能指標(biāo)良好，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和本實驗室技術(shù)和質(zhì)量要求。本研究中的白細胞分類與手工比對實驗，并未針對細胞總數(shù)不同進行區(qū)分，特別是未對低值白細胞樣本做儀器與人工的分類比對，因此存在一定局限。同時由于兩模塊的檢測系統(tǒng)相對獨立，后續(xù)使用中還應(yīng)關(guān)注兩模塊間相互的結(jié)果比較和偏倚評估。