單核細(xì)胞/高密度脂蛋白膽固醇比值與缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究

劉慧玲，詹 峰，陳 曄，王亞洲，張 健

(蘇州大學(xué)附屬常州市腫瘤醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 常州213032)

缺血性腦卒中(ischemic stroke IS)是全球具有高發(fā)病率、死亡率和致殘率，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病[1]。炎癥細(xì)胞引發(fā)的炎癥機(jī)制在IS及其亞型的病理過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[2,3]。系統(tǒng)性炎癥標(biāo)志物升高與腦卒中后預(yù)后不良和死亡率增加有關(guān)[4]。研究證明外周血白細(xì)胞總數(shù)(WBC)，尤其是單核/巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞與IS風(fēng)險(xiǎn)、中風(fēng)嚴(yán)重程度和死亡率之間存在獨(dú)立關(guān)系[5-8]。值得注意的是，免疫細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，單核細(xì)胞浸潤(rùn)和脂質(zhì)核的形成，進(jìn)一步加重腦損傷[9,10]和促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[11]。血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)具有抗炎、抗氧化、抗血栓形成的作用[12]，并且低水平的HDL-C也會(huì)增加動(dòng)脈粥樣硬化性卒中患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)[13]。

最新研究證明單核細(xì)胞計(jì)數(shù)與高密度脂蛋白膽固醇(MHR)比值可能是心血管疾病一種新的預(yù)后生物標(biāo)志物[14]。因此，本研究分析外周血MHR水平，評(píng)估對(duì)IS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2017年1月1日至2018年12月31日在蘇州大學(xué)附屬常州腫瘤醫(yī)院住院確診為IS患者250例。選取年齡、性別與病例組相近的健康查體者200名為對(duì)照組。IS患者均符合根據(jù)世界衛(wèi)生組織對(duì)IS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[15]。收集研究者的基線資料詳見(jiàn)表1。所有研究對(duì)象均排除腦出血、短暫性腦缺血發(fā)作、急性心肌梗死及其他血管栓塞性疾病、惡性腫瘤、腦外傷、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、近期手術(shù)、出現(xiàn)嚴(yán)重全身性疾病、癡呆、精神疾病、腎功能或肝功能障礙、心力衰竭、慢性炎癥性疾病或慢性感染、自身免疫性疾病。

1.2 儀器與試劑德國(guó)西門(mén)子公司ADVIA 2120全血細(xì)胞分析儀和ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀。血糖(北京柏定生物工程有限公司)及血脂各項(xiàng)(上海景源醫(yī)療器械有限公司)。

1.3 方法采用分離膠型真空管和EDTA- K2抗凝管收集IS患者入院24 h內(nèi)和健康體檢者靜脈血液標(biāo)本，靜置10 min，RCF 3000 (×g )離心5 min，血清進(jìn)行生化分析和全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。在3 h內(nèi)獲得絕對(duì)單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。研究對(duì)象的血壓、血糖、血清總膽固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三脂(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensity lipoproteins,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoproteins,HDL-C)等基本資料。其中血糖、總膽固醇(TC)和三酰甘油(TG)采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用直接化學(xué)法測(cè)定。體檢時(shí)測(cè)量收縮壓(SBP)和舒張壓(SBP)。MHR的計(jì)算方法是將絕對(duì)單核細(xì)胞數(shù)除以HDL水平比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理正態(tài)性檢驗(yàn)采用獨(dú)立樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)(K-S檢驗(yàn))，偏態(tài)分布定量資料采用中位數(shù)四分位數(shù)間距M(P25-P75)描述，非參數(shù)Mann-Whitney U比較差異性；計(jì)數(shù)資料采用卡方χ2檢驗(yàn)； logistics 單因素回歸分析篩選IS發(fā)生的危險(xiǎn)因素和多因素回歸分析篩選與IS患者發(fā)生中風(fēng)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，用比值比(OR)來(lái)描述。ROC曲線分析MHR對(duì)缺血性腦卒中的診斷效能，并計(jì)算靈敏度和特異度，以約登指數(shù)Youden指數(shù)(敏感性+特異性-1)最大處為診斷臨界值(cut-off)。所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究資料基本特征IS組與對(duì)照組的年齡、性別、血壓、中風(fēng)危險(xiǎn)因素、實(shí)驗(yàn)室參數(shù)(CHOL、LDL-C和血糖)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；另外，IS組單核細(xì)胞計(jì)數(shù)和TG均高于對(duì)照組，而HDL-C水平低于對(duì)照組(P<0.001)，見(jiàn)表1。

表1 病例組與對(duì)照組的臨床資料特征

注：χ2*為計(jì)數(shù)資料卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量，計(jì)數(shù)資料采用陽(yáng)性例數(shù)(百分比)表示，Z#為非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量，中位數(shù)(四分位數(shù)間距IQR)M(P25-P75)表示；1 mmHg=0.133 kPa

2.2 IS組與對(duì)照組血清MHR表達(dá)水平IS組血清MHR表達(dá)水平0.325(0.248-0.419)高于對(duì)照組0.216(0.161-0.277)(圖1A)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-10.215，P<0.001)，見(jiàn)表1，圖1。

**P<0.001

2.3 logistic回歸分析IS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素單因素分析發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞、MHR、TG和HDL為腦卒中的危險(xiǎn)因素，用粗比值比(crude odds ratio，OR)值表示(陽(yáng)性結(jié)果見(jiàn)表2)。為了排除性別、年齡、血糖、血脂和血壓等混雜因素的干擾，將單因素分析P<0.1的變量納入logistic多因素回歸分析模型得到校正OR值(adjusted odds ratio)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MHR(OR=1.108，P<0.001)，TG (OR=1.248，P=0.046)是發(fā)生IS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(見(jiàn)表2)。

2.4 MHR對(duì)IS的診斷效能ROC曲線分析，MHR的曲線下面積(AUC)為0.776，95%可信區(qū)間(0.735-0.81)，取約登指數(shù)(敏感性+特異性-1)最大點(diǎn)為診斷界限值，診斷界限值為0.2816時(shí)診斷IS的敏感度和特異度分別為66.6%和77.62%(見(jiàn)圖2)。

表2 IS患者危險(xiǎn)因素的Logistic單因素和多因素回歸分析

注：*P<0.05；**P<0.001

圖2 ROC分析評(píng)估MHR的診斷價(jià)值

3 討論

本研究旨在評(píng)估MHR水平與IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。為了排除可能影響腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的其他變量和基礎(chǔ)疾病，選與病例組構(gòu)成比相近的查體者為對(duì)照組。該研究首次發(fā)現(xiàn)IS病人血清MHR水平明顯高于對(duì)照組，與IS事件的風(fēng)險(xiǎn)增加獨(dú)立相關(guān)，是IS事件發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外，我們通過(guò)ROC曲線評(píng)估MHR的診斷價(jià)值。外周血MHR的AUC為0.776，表明 MHR可以作為預(yù)測(cè)IS發(fā)生的血清標(biāo)志物，判定其風(fēng)險(xiǎn)增加的臨界值為0.2816，MHR大于該值時(shí)，診斷IS發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的特異度和敏感度較高。

研究證實(shí)MHR為一種新的炎癥標(biāo)志物，是心血管疾病的預(yù)后標(biāo)志物[14]。然而， MHR與腦血管疾病研究甚少。已證實(shí)高水平MHR是IS患者30天死亡率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[16]和MHR水平的升高是3個(gè)月的急性腦出血(ICH)患者的預(yù)后標(biāo)志物[17]。由此推測(cè)，血清MHR水平將有可能成為輔助評(píng)價(jià)或預(yù)測(cè)IS生物學(xué)標(biāo)志物。本研究中年齡、性別、血糖和血脂不是缺血性腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可能由于選取對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組年齡等構(gòu)成比相近緣故造成。我們研究發(fā)現(xiàn)IS組MHR明顯高于健康對(duì)照組并且為IS事件發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這些結(jié)果表明，MHR水平的升高可能與IS病理生理學(xué)中持續(xù)性炎癥有關(guān)。

越來(lái)越多的證據(jù)表明單核細(xì)胞和其來(lái)源的巨噬細(xì)胞引發(fā)的炎癥機(jī)制在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2,11]?；罨膯魏思?xì)胞通過(guò)滲透、遷移到病變區(qū)域并分泌各種炎性介質(zhì) (包括炎癥細(xì)胞因子、粘附分子、趨化因子和生長(zhǎng)因子)，通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)發(fā)生和泡沫細(xì)胞的形式[11]。研究報(bào)道循環(huán)Ly6C(hi)單核細(xì)胞計(jì)數(shù)在永久性腦缺血后呈CCR2依賴(lài)性增加[18]，并且在炎癥或動(dòng)脈粥樣硬化斑塊狀態(tài)下促進(jìn)組織因子蛋白表達(dá)，并參與促凝活性[19]。然而，我們發(fā)現(xiàn)IS組血清HDL-C水平明顯較對(duì)照組低，結(jié)果與之前的發(fā)現(xiàn)一致[13]。研究表明HDL-C分子可以調(diào)節(jié)單核細(xì)胞的活化、黏附、巨噬細(xì)胞的遷移以及控制向單核細(xì)胞分化的祖細(xì)胞的增殖[20-22]。HDL-C通過(guò)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)體如ATP結(jié)合盒A-1、ATP結(jié)合盒G-1、清道夫受體B-1(SR-BI)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子ATF3等[23,24]調(diào)控巨噬細(xì)胞或脂肪細(xì)胞具有抗炎作用[25]。HDL-C通過(guò)HDL相關(guān)抗氧化酶抑制LDL氧化、內(nèi)皮細(xì)胞的胞內(nèi)氧化應(yīng)激和清除循環(huán)脂氫過(guò)氧化物發(fā)揮抗氧化作用[20]。HDL必須通過(guò)增加血管內(nèi)NO生物利用度來(lái)促進(jìn)血管內(nèi)皮修復(fù)和抗血栓形成特性[26]。

因此，單核細(xì)胞具有促炎效應(yīng)而HDL-C可以抑制其作用。顯然，MHR升高，作為單核細(xì)胞和HDL-C的復(fù)合標(biāo)志物，可能是系統(tǒng)性炎癥和內(nèi)皮功能障礙的有效替代標(biāo)志物。本研究屬于小樣本的回顧性研究，進(jìn)一步需要前瞻性多中心研究證實(shí)。

綜上所述，循環(huán)MHR升高是IS發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，并且在臨床實(shí)踐中MHR的檢測(cè)具有簡(jiǎn)單、方便、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)。研究結(jié)果為MHR水平可能成為腦卒中新的診斷生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)提供了新的視角。進(jìn)一步的前瞻性和多中心研究需要證實(shí)我們的結(jié)論。