血小板抗體檢測(cè)分析與探討

聶 鋒,練正秋,李 玲

(1.安徽省宣城市人民醫(yī)院,安徽 宣城242000；2.成都市第三人民醫(yī)院；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所 臨床輸血研究中心；4.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 輸血不良反應(yīng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

目前，血小板輸注是臨床上用來(lái)預(yù)防或治療各種因血小板減少而引起的出血性疾病的有效治療措施之一。近年來(lái)，血小板在臨床輸血中得到了廣泛的應(yīng)用，為各種血液病患者、腫瘤患者及手術(shù)患者提高血小板數(shù)量，防止出血提供了有力的保障。但在實(shí)際的臨床工作中，并不是每一例血小板的輸注都能得到滿意療效，偶有血小板輸注無(wú)效(PTR，platelet transfusion refractoriness)及輸血后血小板減少性紫癜(PTP，post-transfusion thrombocytopenic purpura)的發(fā)生。血小板相關(guān)抗體( 抗-HLA) 或/ 和血小板特異性抗體( 抗-HPA)是導(dǎo)致臨床發(fā)生血小板輸注無(wú)效或效果不理想的重要原因之一。本文就血小板抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分組探討、并對(duì)相關(guān)影響因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇2017年7月-2018年5月在我院住院治療，曾在我院有輸血史或/和妊娠史的患者47例作為觀察組，其中男性22例、女性25例，年齡11-94歲；另外隨機(jī)選擇2018年4月-5月在我院各科無(wú)輸血史和妊娠史的住院患者32例作為對(duì)照組，其中男性19例、女性13例，年齡1-91歲，各抽取EDTA2K抗凝血3 ml。

1.2 儀器與試劑TXL-4血小板專用低速專用離心機(jī)由長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司提供；血小板抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20171104等)、血小板抗體檢測(cè)指示紅細(xì)胞(批號(hào)20180317等)以及血小板抗體篩檢細(xì)胞(批號(hào)20171083等)由長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。該試劑盒包被人類白細(xì)胞抗原I類(HLA-I)和血小板特異性抗原(HPA),可分別對(duì)血小板HLA-I 類和HPA抗體進(jìn)行定性檢測(cè)。

1.3 方法血小板抗體檢測(cè)采用固相凝集法，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書要求步驟進(jìn)行操作。將凍干血小板稀釋后制備為血小板懸液，取出板條做好標(biāo)記，向反應(yīng)孔滴加50 μl血小板懸液，輕搖后離心；倒出反應(yīng)孔中液體，用洗滌工作液清洗3次，立即滴入100 μl低離子強(qiáng)度液，并分別向相應(yīng)孔中滴加50 μl患者樣本、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照；封口后置于濕盒37℃水浴30 min，孵育完洗滌5次，立即加入50 μl抗人IgG和50 μl指示紅細(xì)胞，離心后即可觀察結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷①陽(yáng)性結(jié)果：指示紅細(xì)胞平鋪在反應(yīng)孔底部表面；若指示紅細(xì)胞只結(jié)合到部分孔底，并且結(jié)合的區(qū)域比陰性對(duì)照大為弱陽(yáng)性，表明患者血漿中含有血小板抗體。②陰性結(jié)果：指示紅細(xì)胞在反應(yīng)孔底部中央形成紅細(xì)胞聚集，表明患者血漿中不含血小板抗體。③如果結(jié)果可疑，或陽(yáng)性對(duì)照或/和陰性對(duì)照沒有出現(xiàn)正確結(jié)果，則必須重新檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS軟件對(duì)表1和表2進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩表均采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血小板抗體檢測(cè)結(jié)果觀察組47例有輸血史或/和妊娠史的患者，7例陽(yáng)性，陽(yáng)性率14.89%；對(duì)照組32例無(wú)輸血史和妊娠史的患者，0例陽(yáng)性，陽(yáng)性率0%，見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組血小板抗體陽(yáng)性率比較

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：χ2=5.23，P<0.05，兩組比較有顯著性差異。

2.2 不同輸血次數(shù)的陽(yáng)性率觀察組的47例患者中，有42例患者有輸血史(另外5例只有妊娠史，沒有輸血史)，按照輸血(袋數(shù))≤3次、>3次分成兩組比較血小板抗體陽(yáng)性率的產(chǎn)生，26例輸血≤3次患者，2例陽(yáng)性，陽(yáng)性率7.69%；16例輸血>3次患者,5例陽(yáng)性，陽(yáng)性率31.25%。輸注紅細(xì)胞懸液、血漿、血小板等血液制劑均統(tǒng)計(jì)在內(nèi)，以每輸1袋血液制劑為輸血1次統(tǒng)計(jì)，見表2。

表2 觀察組不同輸血次數(shù)血小板抗體陽(yáng)性率的比較

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：χ2=3.96，P<0.05，兩組比較有顯著性差異。

2.3 不同年齡段的陽(yáng)性數(shù)觀察組中7例血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性的患者按照男女性別、不同年齡段分組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)男女性別組均以50≤y<75年齡組陽(yáng)性患者常見，其中男性組2例、女性組3例，無(wú)性別特異性差異,見表3。

表3 男女不同年齡段血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)的比較

3 討論

血小板在止血與血栓形成，維持血管完整性，淋巴系統(tǒng)的發(fā)育以及固有免疫應(yīng)答等方面起著重要的作用。另外，血小板與炎癥反應(yīng)、腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的病理生理學(xué)也有密切關(guān)系[1]。血小板表面抗原包括血小板相關(guān)抗原，如ABH抗原、HLA抗原、其它抗原(Ii、Lea、Leb、P)；以及血小板特異性抗原HPA。輸血和妊娠均可以引起機(jī)體血小板抗體的產(chǎn)生。血小板表面抗原較多且復(fù)雜，反復(fù)多次輸血容易產(chǎn)生血小板抗體，特別是輸注含有白細(xì)胞的血液制劑，引發(fā)HLA免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)更高[2]。為了盡可能減少患者HLA同種免疫的發(fā)生率，應(yīng)采用經(jīng)白細(xì)胞濾器處理的血液制劑進(jìn)行輸注。

臨床上如果發(fā)生血小板輸注無(wú)效，首先應(yīng)該調(diào)查患者是否存在血小板損耗過多的非免疫因素，如：脾功能亢進(jìn)、彌漫性血管內(nèi)凝血、血小板成分制劑的質(zhì)量、感染等。血小板質(zhì)量缺陷主要是血站在其采集、制備過程中的一些不規(guī)范操作造成血小板數(shù)量不達(dá)標(biāo)或細(xì)菌污染[3]。若沒有此類因素，則應(yīng)考慮是否為免疫因素引起，需要做血小板抗體檢測(cè)。輸注血液制劑或有妊娠史患者體內(nèi)容易產(chǎn)生血小板抗體，當(dāng)再次輸入血小板后，會(huì)引發(fā)相應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)，從而導(dǎo)致血小板輸注無(wú)效[4]。臨床表現(xiàn)為血小板輸注后被迅速破壞,血小板計(jì)數(shù)不僅沒增加,甚至還減少[5]。

本文顯示，有輸血史或/和妊娠史的患者血小板抗體陽(yáng)性率高于無(wú)輸血史和妊娠史(P<0.05)，差異顯著；無(wú)輸血史和妊娠史未檢出血小板抗體，與王佳怡等[6]報(bào)道較一致。輸血次數(shù)越多，產(chǎn)生血小板抗體的幾率就越大，本文還顯示輸血次數(shù)>3次的患者血小板抗體陽(yáng)性率高于≤3次的患者(P<0.05)，差異顯著，與張秋會(huì)等[7]、羅圓圓等[8]報(bào)道較一致。另外，有研究報(bào)道，妊娠與女性血小板抗體的產(chǎn)生有密切關(guān)系，有妊娠史高于無(wú)妊娠史，且血小板抗體陽(yáng)性率隨妊娠次數(shù)增加而升高[9]。對(duì)于女性血小板抗體陽(yáng)性患者來(lái)說(shuō)，亦是引起孕婦早期流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)因素之一，血小板抗體陽(yáng)性者，早期流產(chǎn)率顯著增高，提示血小板抗體檢測(cè)結(jié)果與早期流產(chǎn)之間存在顯著相關(guān)性[10]。因此，在早期流產(chǎn)患者孕14周后進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)顯得尤為重要[11]。

另外，本文統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性的患者容易出現(xiàn)在50≤y<75這個(gè)年齡段，故對(duì)于此年齡段的患者，更要加強(qiáng)血小板抗體的檢測(cè)。

為預(yù)防血小板無(wú)效輸注，國(guó)內(nèi)一般采用隨機(jī)血小板交叉配血試驗(yàn)，該試驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備設(shè)施要求不高等優(yōu)點(diǎn)，但是一部分產(chǎn)生了血小板抗體的受血者，特別是產(chǎn)生了HLA抗體的患者，隨機(jī)很難找到相合的供血者．需要提供數(shù)量足夠多的供血者進(jìn)行大量的配型實(shí)驗(yàn)。由于供血者的來(lái)源非常有限，實(shí)驗(yàn)往往難以進(jìn)行[12]。因此，對(duì)于血小板抗體陽(yáng)性的患者，在不能完成血小板配型的情況下，臨床干預(yù)顯得尤為重要，此類患者治療一般等同ITP，ITP是一種有部分自限性的出血性疾病，由于機(jī)體免疫功能紊亂導(dǎo)致血小板破壞增加[13]。常規(guī)使用地塞米松糖皮質(zhì)激素進(jìn)行治療，其機(jī)制可能是抑制單核—巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(尤其是脾)吞噬和破壞被抗體包被的血小板，使血小板生存時(shí)間延長(zhǎng)[14]。抑制抗原抗體反應(yīng)并可使結(jié)合的抗體游離；并改善毛細(xì)血管脆性。也可使用IVig進(jìn)行治療，它可使患者體內(nèi)的IgG明顯升高，使巨噬細(xì)胞上的Fc受體被IgG裂解的Fc片段所飽和，阻礙了單核—巨噬細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)血小板的破壞。

通過本文分析與討論，有輸血史或/和妊娠史的患者血小板抗體產(chǎn)生的幾率大，并且隨輸血次數(shù)的增加而增加。因此，對(duì)于臨床需要輸注血小板的患者，輸注前要進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)[15]。并針對(duì)結(jié)果陽(yáng)性者制定相應(yīng)措施，對(duì)于需要反復(fù)輸注的患者應(yīng)做交叉配型，從而提高血小板輸注的有效性。