2+的吸附機(jī)制"/>
  • <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    耐鎘芽孢桿菌對(duì)Cd2+的吸附機(jī)制

    2019-12-23 07:23:39余雪梅彭書(shū)明王洪婷伏媛李璟張山
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年20期

    余雪梅 彭書(shū)明 王洪婷 伏媛 李璟 張山

    摘要:從攀枝花礦區(qū)淤泥樣品中通過(guò)逐級(jí)提高Cd2+濃度進(jìn)行馴化,獲得1株高耐鎘菌株P(guān)FYN01,經(jīng)16S rDNA PCR鑒定為芽孢桿菌(Bacillus sp),最大耐Cd2+濃度為3 900 mg/L。研究初始Cd2+濃度、pH值、菌量對(duì)菌株吸附Cd2+的影響,利用掃描電鏡(SEM)和傅葉里紅外光譜(FTIR)探究菌株吸附機(jī)制。結(jié)果表明,PFYN01在初始Cd2+濃度為75 mg/L、菌量為1.0 g/L、pH值為5.0時(shí),對(duì)Cd2+的吸附率達(dá)到34.98%;吸附符合Langmuir模型,最大吸附量為 1.974 mg/g。對(duì)比分析Cd2+吸附前后的細(xì)胞形態(tài)和紅外光譜變化,證實(shí)了“細(xì)胞成分羥基(O—H)、酰胺基(N—H)、烴基(C—H)、羧基(C[FY=,1]O)、羰基(—COOH)參與了Cd2+與PFYN01的相互作用”的結(jié)論。PFYN01是一株對(duì)Cd2+有較強(qiáng)吸附能力的細(xì)菌菌株,對(duì)其吸附Cd2+影響因素及吸附機(jī)制研究的結(jié)果將為重金屬污染微生物修復(fù)提供指導(dǎo)。

    關(guān)鍵詞:鎘污染;耐鎘細(xì)菌;馴化;生物吸附;吸附機(jī)理

    中圖分類號(hào):X703.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2019)20-0293-05

    隨著工業(yè)的發(fā)展,尤其是采礦、冶煉、工業(yè)活動(dòng)的大肆開(kāi)展,越來(lái)越多重金屬通過(guò)不同途徑進(jìn)入到土壤或水體環(huán)境中,對(duì)生態(tài)環(huán)境和人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅[1-2]。鎘是一種毒性很強(qiáng)的重金屬,可降低酶活性,引起DNA斷裂、細(xì)胞氧化損傷[3-4]。由于鎘具有難遷移、難降解和生物累積等特點(diǎn),如何有效治理重金屬鎘污染問(wèn)題已成為目前國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)之一[5-6]。

    微生物是生態(tài)系統(tǒng)中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)循環(huán)的關(guān)鍵,尤其可以在各種極端的pH值、溫度甚至有毒金屬條件下生存和生長(zhǎng),部分微生物群已對(duì)重金屬形成了一定的耐性和抗性。研究表明,從市政廢水中分離出能夠耐受1 000 mg/L Cd2+的芽孢桿菌,并對(duì)其他重金屬Cr6+、Ni2+、Co2+也有一定抗性[7];從韓國(guó)重金屬污染土壤中分離出1株能夠耐鎘濃度為200 mg/L的芽孢桿菌(Bacillus sp.)菌株,該菌株也對(duì)其他單一重金屬Pb、Cu、Ni、Mn、Cr、Co、Zn和混合重金屬有較高的吸附性[8]。通過(guò)UV照射獲得枯草芽孢桿菌的突變種,該菌株能夠耐受的鎘濃度為337.23 mg/L,對(duì)其他重金屬Cr、Hg、Pb的耐受濃度分別為208、100、932.4 mg/L,而野生型枯草芽孢桿菌只能耐受的鎘濃度為28 mg/L[9]。從重金屬鎘污染土壤中篩選出1株能在鎘濃度為200 mg/L的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的蠟狀芽孢桿菌,具有較高的抗性能力[10]。然而,這些報(bào)道的芽孢桿菌屬對(duì)Cd2+耐受和抗性濃度主要集中在1 000 mg/L以下,而對(duì)其他有較高耐受的芽孢桿菌屬的報(bào)道較少。

    考慮到從礦堆的淤泥中篩選的微生物有很高的耐受性,可能存在多重吸附機(jī)制以及許多微生物能夠同時(shí)降解或吸附多種污染物,有助于高效降低礦堆重金屬濃度[11-12]。因此,本研究從渣場(chǎng)堆淤泥中分離出1株高耐鎘細(xì)菌菌株,研究影響菌株吸附Cd2+的最佳條件,通過(guò)掃描電鏡觀察Cd2+在吸附過(guò)程中微觀形貌的變化,利用紅外光譜,通過(guò)官能團(tuán)吸收峰值的變化和位移,分析Cd2+存在時(shí)細(xì)胞壁表面化學(xué)基團(tuán)的變化情況,以期對(duì)Cd2+的吸附行為有一個(gè)更加清晰的認(rèn)識(shí)。本研究可為尋找具有高選擇性和高吸附能力的吸附劑提供理論依據(jù),為微生物在鎘污染治理中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    以四川攀枝花巴關(guān)河西渣場(chǎng)堆渣區(qū)旁池塘淤泥為試驗(yàn)樣品,隨機(jī)選取3個(gè)樣方,每個(gè)樣方面積約1 m2。在每個(gè)樣方中隨機(jī)采集適量淤泥,淤泥樣品采集完后立即密封保存,儲(chǔ)存于實(shí)驗(yàn)室4 ℃冰箱。

    LB液體培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,酵母浸膏粉5 g,NaCl 10 g,加純水至1 L,pH值調(diào)至5.5~5.7,121 ℃高壓滅菌20 min。LB固體培養(yǎng)基須要另加入1.5%瓊脂,121 ℃高壓滅菌20 min。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 菌株馴化

    從攀枝花礦渣淤泥樣品中吸取2 mL上清液加入到50 mL液體培養(yǎng)基中,對(duì)耐受性菌種進(jìn)行分離純化。將篩選出的菌株接種至液體培養(yǎng)基上,置于30 ℃、120 r/min恒溫?fù)u床上培養(yǎng);5 d后吸取0.5~2 mL培養(yǎng)物在新配制的液體培養(yǎng)基中接種,恒溫?fù)u床培養(yǎng)繼續(xù)5 d,記錄其生長(zhǎng)曲線。

    1.2.2 菌株抗鎘能力

    重復(fù)“1.2.1”節(jié)接種馴化3~4次,對(duì)馴化后的菌液采用稀釋涂布平板法,取菌液并稀釋成10-3和10-4的稀釋液各100 μL,分別在含Cd2+濃度為10、30、60、100、200、400、800、…、3 600 mg/L的平板上涂布培養(yǎng)。不同鎘濃度梯度各做1組平行,采用同樣方法將菌液稀釋液涂布于固體平板上進(jìn)行培養(yǎng),記錄生長(zhǎng)情況及菌落形態(tài)等。

    1.3 耐鎘菌株吸附Cd2+的條件分析

    挑取單菌落到LB液體培養(yǎng)基中,30 ℃、120 r/min條件下培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期(16~24 h);6 000 r/min離心7 min,棄上清,稱其菌體鮮質(zhì)量;將所收集菌體制成定量菌懸液。

    將100 μL菌懸液接種到20 mL含有不同濃度Cd2+的培養(yǎng)基中,在設(shè)置的各參數(shù)下吸附,6 000 r/min離心7 min,取上清,用原子吸收分光光度法測(cè)定Cd2+濃度(每個(gè)濃度做3個(gè)平行),每組均以不加菌體組為對(duì)照,按以下公式計(jì)算菌體對(duì)Cd2+的吸附率A(%):

    式中:C1為吸附前溶液中的Cd2+質(zhì)量濃度,mg/L;C2為吸附后溶液中的Cd2+質(zhì)量濃度,mg/L。

    1.3.1 不同的Cd2+濃度、時(shí)間、pH值、菌量對(duì)吸附的影響

    每個(gè)影響因素均設(shè)置3組平行試驗(yàn),為測(cè)定吸附平衡最佳時(shí)間,調(diào)節(jié)Cd2+濃度為75 mg/L、菌量為1.0 g/L,pH值為5.5,于30 ℃、130 r/min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng),分別于0、2、4、…、16、24、32、48 h取樣。為測(cè)定Cd2+濃度對(duì)吸附效果的影響,Cd2+濃度分別為10、25、50、75、100、125、150 mg/L,調(diào)節(jié)菌量為1.0 g/L、pH值為5.5,于30 ℃、130 r/min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)8 h,吸附平衡后取樣。為了確保菌量對(duì)吸附效果的影響,菌量分別為0.01、0.1、0.5、1.0、2.0 g/L,調(diào)節(jié)Cd2+濃度為75 mg/L、pH值為5.5,于30 ℃、130 r/min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)8 h,吸附平衡后取樣。為了測(cè)定pH值對(duì)吸附效果的影響,pH值分別調(diào)節(jié)為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0,調(diào)節(jié)菌量為1.0 g/L、Cd2+濃度為75 mg/L,于30 ℃、130 r/min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)8 h,吸附平衡后取樣。

    1.3.2 等溫吸附模型

    分別采用Langmuir和Freundlich吸附等溫式模擬吸附過(guò)程[13-14]。Langmuir模型中,吸附量qe與平衡時(shí)Cd2+濃度Ce的雙倒數(shù)成直線關(guān)系,模型如下:

    Langmuir方程式中b的值能反映吸附能力以及不同生物量大小的吸附率。

    Freundlich模型中,qe平衡時(shí)重金屬濃度Ce的雙對(duì)數(shù)成直線關(guān)系[13-14]。Freundlich吸附方程為:

    式中:KF和n均為Freundlich吸附模型的吸附常數(shù)。

    1.3.3 菌株Cd2+吸附機(jī)制分析

    用掃描電鏡(SEM)分析觀察,分別設(shè)置不添加Cd2+(對(duì)照)和添加20、300 mg/L Cd2+的2個(gè)處理,并按上述處理配制相應(yīng)的LB液體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)液以2%接種量分別接種到上述培養(yǎng)基中,30 ℃、130 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,將菌液分別用蒸餾水洗滌3遍。菌株細(xì)胞通過(guò)2.5%戊二醛固定、乙醇濃度梯度脫水、干燥和噴金等操作后,使用掃描電鏡觀察細(xì)胞表面形態(tài)。

    菌株P(guān)FYN01分別于Cd2+濃度為0、75 mg/L的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h,6 000 r/min離心7 min收集菌體,用蒸餾水清洗3次,70 ℃烘干至恒質(zhì)量,按1 ∶100比例取菌體和烘干的KBr粉末混勻,在瑪瑙研缽中充分研磨,壓片制樣后紅外光譜儀測(cè)定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用Excel 2016處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)并進(jìn)行誤差分析;采用Origin 9.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌落形態(tài)觀察及生長(zhǎng)情況

    2.1.1 耐鎘菌株的馴化

    采用微生物純培養(yǎng)方法從攀枝花巴關(guān)河西渣場(chǎng)礦區(qū)淤泥樣本中篩選出一批耐性菌株,通過(guò)逐級(jí)提高Cd2+濃度的方法馴化獲得1株高耐鎘菌株P(guān)FYN01。PFYN01能夠在Cd2+濃度為100 mg/L的LB培養(yǎng)基中生長(zhǎng),進(jìn)行傳代培養(yǎng)18代后仍能在3 600 mg/L Cd2+的LB固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng),表明該菌株不但鎘的耐受濃度高,且耐鎘的遺傳穩(wěn)定性好。在Cd2+濃度為3 900 mg/L時(shí),菌株生長(zhǎng)很少,結(jié)果表明PFYN01菌株對(duì)Cd2+有較強(qiáng)的耐受性。

    2.1.2 菌落形態(tài)觀察

    PFYN01菌體生長(zhǎng)較快,在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)1 d左右,菌落形態(tài)近似圓形,表面光滑濕潤(rùn),邊緣不整齊,質(zhì)地軟,乳白色,色素不擴(kuò)散,較黏稠,易挑起(圖1)。該菌株能使淀粉水解,不能水解油脂和明膠,糖類發(fā)酵試驗(yàn)中顯陽(yáng)性。其生理生化特點(diǎn)與芽孢桿菌相似,16S rDNA序列同源性比較發(fā)現(xiàn),PFYN01的16S rDNA與芽孢桿菌(Bacillus sp.) L25親緣關(guān)系較近,同源性為99%。因此,可初步斷定PFYN01為芽孢桿菌(Bacillus sp.)。

    2.1.3 不同初始濃度下PFYN01的生長(zhǎng)情況

    圖2為初始Cd2+質(zhì)量濃度分別在0、50、100、200、400 mg/L下培養(yǎng)48 h后的PFYN01生長(zhǎng)曲線圖。當(dāng)鎘濃度為0時(shí),PFYN01菌株 1 h 左右進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,大約24 h后進(jìn)入穩(wěn)定期。當(dāng)鎘濃度為50 mg/L時(shí),延長(zhǎng)了對(duì)數(shù)期且生長(zhǎng)量較低;當(dāng)鎘濃度超過(guò)50 mg/L[CM(22*5]時(shí),重金屬Cd2+對(duì)菌株的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。

    但菌株能夠在含鎘(100 mg/L以下)的液體培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng),表明該菌株對(duì)Cd2+有耐受性。

    2.2 耐鎘菌株吸附條件研究

    2.2.1 初始Cd2+質(zhì)量濃度

    由圖3可知,當(dāng)Cd2+濃度為 10~25 mg/L時(shí),菌株P(guān)FYN01對(duì)Cd2+的吸附率隨濃度的增加而緩慢升高,在Cd2+濃度相對(duì)較低的環(huán)境中,吸附Cd2+可能以胞內(nèi)吸附結(jié)合為主[15];當(dāng)Cd2+濃度為50~75 mg/L時(shí),菌株P(guān)FYN01對(duì)Cd2+的吸附率迅速增高,在Cd2+濃度為 75 mg/L 時(shí)達(dá)到最大值,為34.98%。說(shuō)明在一定初始Cd2+質(zhì)量濃度范圍內(nèi),隨著Cd2+濃度增加有利于菌株對(duì)其的吸附,可能是因?yàn)榧?xì)菌與Cd2+在胞內(nèi)結(jié)合,使得Cd2+與菌株有效碰撞的概率增高、吸附位點(diǎn)增加,同時(shí)胞外吸附也起一定的作用;當(dāng)Cd2+濃度超過(guò)75 mg/L時(shí),隨著Cd2+濃度增加,吸附率降低,可能是因?yàn)楦邼舛鹊腃d2+會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)代謝,使其結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,相應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致微生物表面吸附位點(diǎn)減少,從而減少其表面吸附量[12]。

    2.2.2 pH值

    一般而言,pH值是影響溶液中重金屬含量和吸附劑吸附能力的重要因素之一,它會(huì)影響吸附劑的表面電荷、官能團(tuán)質(zhì)子化程度[16]。本研究的pH值范圍為4.0~8.0,結(jié)果如圖4所示,隨著pH值的升高,Cd2+吸附率呈先上升后下降的趨勢(shì),pH值為5.0時(shí),Cd2+的吸附率達(dá)到最高,為33.98%。在pH值較低時(shí),溶液中存在大量的H3O+,占據(jù)菌體細(xì)胞壁的吸附活性位點(diǎn),活性基團(tuán)被質(zhì)子化,從而增加了細(xì)胞表面的靜電斥力,阻礙離子交換作用[12]。當(dāng)pH值達(dá)到 5.0~7.0時(shí),重金屬離子形態(tài)發(fā)生改變,導(dǎo)致吸附量減少,吸附率依次降低。

    2.2.3 菌量

    由圖5可知,隨著接種量從0.01 g/L增加到 2.0 g/L 的加入,菌株對(duì)Cd2+的吸附率從6.26%增加到 34.79%,吸附率在接種量為1.0 g/L時(shí)達(dá)到最高,可能是隨著接種量的增加,細(xì)菌量增多,提供吸附位點(diǎn)也相應(yīng)增加,總的生物吸附量也就變多,但吸附率并不完全隨著接種量的增加而升高;當(dāng)PFYN01的接種量從1.0 g/L增加到2.0 g/L時(shí),其對(duì)Cd2+的吸附率為34.12%,說(shuō)明此時(shí)細(xì)菌表面吸附位點(diǎn)達(dá)到飽和,當(dāng)接種量超過(guò)1.0 g/L時(shí),再繼續(xù)增加,吸附率增加不明顯[6]。因此,為了提高吸附率并節(jié)約成本,接種量不宜過(guò)大。

    2.2.4 耐鎘菌株吸附Cd2+的等溫模型

    為了考察在最佳條件下PFYN01對(duì)Cd2+的吸附能力、最大吸附量與溶液中Cd2+濃度之間的平衡關(guān)系,采用的是Langmuir和Freundlich 2種模型來(lái)擬合吸附試驗(yàn)結(jié)果,模擬結(jié)果見(jiàn)圖6,相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表1。Langmuir方程的決定系數(shù)R2=0.927,較Freundlich方程的R2高,吸附溫度為30 ℃,Cd2+濃度為75 mg/L時(shí),能達(dá)到平衡參數(shù)。通過(guò)計(jì)算,芽孢桿菌PFYN01對(duì)Cd2+的理論最大吸附力量為qmax=1.974 mg/g,與實(shí)際測(cè)得的1.902 mg/g相接近。因此可以判定Langmuir更適合描述菌對(duì)Cd2+的等溫吸附過(guò)程,說(shuō)明生長(zhǎng)菌體PFYN01對(duì)Cd2+吸附過(guò)程是一個(gè)單分子層吸附、吸附劑表面均勻。

    2.3 掃描電鏡分析

    掃描電鏡能從不同角度對(duì)樣品細(xì)胞表面微觀形態(tài)進(jìn)行觀察,對(duì)在空白對(duì)照(0)、低濃度(20 mg/L)和高濃度(300 mg/L)的Cd2+進(jìn)行吸附后的細(xì)菌掃描,觀察細(xì)胞的變化,分析Cd2+對(duì)細(xì)胞的影響,并推測(cè)作用機(jī)制。

    由圖7可知,PFYN01為革蘭氏陽(yáng)性長(zhǎng)桿菌,菌株在 0 mg/L Cd2+濃度下,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,表面光滑飽滿;在20 mg/L Cd2+濃度下,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,但表面出現(xiàn)大量褶皺,無(wú)細(xì)胞破碎,有些細(xì)胞出現(xiàn)大小不等的空泡,細(xì)胞內(nèi)可能發(fā)生變性反應(yīng),這說(shuō)明一定濃度的Cd2+會(huì)給細(xì)胞帶來(lái)?yè)p傷,使細(xì)菌出現(xiàn)凋亡特征;在300 mg/L Cd2+濃度下,PFYN01細(xì)胞表面褶皺更加明顯,部分細(xì)胞穿孔現(xiàn)象,胞內(nèi)物質(zhì)表面有細(xì)小顆粒堆積在細(xì)胞表面,表明胞內(nèi)物質(zhì)完全流失并與Cd2+形成絡(luò)合物,推測(cè)是由于Cd2+濃度過(guò)高,胞內(nèi)外滲透壓差距較大,更多高毒性的Cd2+進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部,胞內(nèi)物質(zhì)迅速?gòu)目字幸绯觥?/p>

    2.4 菌株P(guān)FYN01吸附前后紅外光譜圖及分析結(jié)果

    將吸附Cd2+前后菌株樣品進(jìn)行紅外光譜檢測(cè),光譜圖如圖8所示,在500~4 000 cm-1波數(shù)內(nèi)均有吸收峰。根據(jù)文獻(xiàn)[17]對(duì)譜帶進(jìn)行歸屬,菌體主要成分是碳水化合物和蛋白質(zhì)。其中,3 330.3 cm-1附近的吸收帶是分子間氫鍵O—H和N—H的伸縮振動(dòng),吸收峰強(qiáng)而寬,Kim等研究發(fā)現(xiàn),蠟狀芽孢桿菌從3 200~3 600 cm-1的寬帶和強(qiáng)帶可能由胺的羥基(O—H)和氨基(N—H)的重疊造成的;吸收峰是—COOH中的 O—H和C—H;1 785.67、1 697 cm-1處的吸收峰主要來(lái)自蛋白酰胺Ⅰ帶或脂類化合物的C[FY=,1]O伸縮振動(dòng)[18]。Sun等的研究發(fā)現(xiàn),地衣芽孢桿菌在波數(shù)為1 734 cm-1的吸收峰處,呈現(xiàn)出羰基(C[FY=,1]O)和酰胺基([FY=,1]CO—、CO—NH)的變化;1 585 cm-1處的吸收峰來(lái)自蛋白質(zhì)酰胺Ⅱ帶(N—H彎曲與C—N伸縮振動(dòng))吸收峰[19]。Fang等研究發(fā)現(xiàn),蘇云金芽孢桿菌在 1 653、1 540 cm-1附近的主要譜帶歸屬于酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ,酰胺Ⅱ可能是細(xì)胞壁的重要組分之一;1 284、1 298 cm-1處吸收峰主要來(lái)自蛋白酰胺Ⅲ帶C—N伸縮振動(dòng)吸收,N—H變形振動(dòng)相當(dāng)于—CH2的剪式振動(dòng)方式[20]。陳永華等研究發(fā)現(xiàn),蠟樣芽孢桿菌在波數(shù)位于1 280.97~1 305.42 cm-1之間是典型脂碳鏈C—H伸展振動(dòng)吸收帶[21-22]。吸附后與對(duì)照組的紅外光譜圖相比,在 3 330.3 cm-1 處的吸收峰強(qiáng),在初始濃度為 75 mg/L的Cd2+作用下波數(shù)偏移到3 286 cm-1,說(shuō)明來(lái)自多聚糖、蛋白質(zhì)和脂肪酸組分的O—H和N—H參與了Cd2+吸附過(guò)程;在 1 785.67、1 697 cm-1處吸附后波數(shù)偏移到1 737、1 656.8 cm-1,強(qiáng)度有所下降,表明酰胺Ⅰ帶的C[FY=,1]O鍵伸縮振動(dòng)參與了Cd2+的吸附。FIRT分析表明,細(xì)胞參與鎘吸附的官能團(tuán)主要有酰胺基(N—H)、羧基(COOH)、羥基(O—H)、烴基(C—H)、羰基(C[FY=,1]O)。

    3 結(jié)論

    本研究從攀枝花礦渣淤泥中分離篩選獲得一批耐性菌株,通過(guò)逐級(jí)提高Cd2+濃度,馴化出1株在液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基中分別能夠耐受700、3 900 mg/L Cd2+的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,經(jīng)鑒定為芽孢桿菌(Bacillus sp.),命名為PFYN01;芽孢桿菌菌株P(guān)FYN01對(duì)Cd2+耐受和抗性濃度相比其他報(bào)道的芽孢桿菌屬高。

    菌株P(guān)FYN01對(duì)Cd2+有較好的吸附效果,在Cd2+初始濃度為75 mg/L、投菌量為1.0 g/L、pH值5.0時(shí),對(duì)Cd2+的吸附率可達(dá)到34.98%。運(yùn)用吸附等溫模型擬合菌株吸附Cd2+過(guò)程,發(fā)現(xiàn)菌株P(guān)FYN01符合Langmuir模型,最大吸附量為1.974 mg/g,表明菌株P(guān)FYN01在吸附過(guò)程中是單分子層吸附,屬于物理吸附。

    菌株SEM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PFYN01為長(zhǎng)桿狀,Cd2+濃度在0~300 mg/L之間,PFYN01可生長(zhǎng)繁殖。Cd2+濃度超過(guò) 20 mg/L 時(shí),菌體部分細(xì)胞發(fā)生形變,細(xì)胞質(zhì)嚴(yán)重收縮,胞內(nèi)物質(zhì)釋放,隨著Cd2+濃度增加對(duì)PFYN01抑制作用增強(qiáng)。

    通過(guò)FTIR分析PFYN01表面官能團(tuán)對(duì)Cd2+的螯合作用,結(jié)果表明,菌株P(guān)FYN01表面與Cd2+結(jié)合的官能團(tuán)有—OH、 N—H、C—H和C[FY=,1]O等,其中—OH和C[FY=,1]O是優(yōu)先吸附點(diǎn)。此外,在高濃度Cd2+吸附過(guò)程中,酰胺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ譜帶發(fā)生了明顯的變化,表明在高濃度下,蛋白質(zhì)中酰胺基可能起著重要的作用,其次可能是脂類或糖類物質(zhì)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Klimek B. Effect of long-term zinc pollution on soil microbial community resistance to repeated contamination[J]. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology,2012,88(4):617-622.

    [2]Kumar N,Kumari V,Ram C,et al. Bio-prospectus of cadmium bioadsorption by lactic acid bacteria to mitigate health and environmental impacts[J]. Applied Microbiology and Biotechnology,2018,102(4):1599-1615.

    [3]Nies D H. Microbial heavy-metal resistance[J]. Applied Microbiology & Biotechnology,1999,51(6):730-750.

    [4]林曉燕,牟仁祥,曹趙云,等. 耐鎘細(xì)菌菌株的分離及其吸附鎘機(jī)理研究[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(9):1700-1706.

    [5]Amoozegar M A,Ghazanfari N,Didari M. Lead and cadmium bioremoval by Halomonas sp. an exopolysaccharide-producing Halophilic bacterium[J]. Progress in Biological Sciences,2012,2(1):1-11.

    [6]廖 佳,馮沖凌,李科林,等. 耐性真菌HA吸附鉛、鋅的影響因素及吸附機(jī)理研究[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2015,42(2):254-263.

    [7]Samanta A,Bera P,Khatun M,et al. An investigation on heavy metal tolerance and antibiotic resistance properties of bacterial strain Bacillus sp.isolated from municipal waste[J]. Journal of Microbiology & Biotechnology Research,2017,2(1):178-189.

    [8]Kim S U,Cheong Y H,Seo D C,et al. Characterisation of heavy metal tolerance and biosorption capacity of bacterium strain CPB4 (Bacillus spp.)[J]. Water Science and Technology,2007,55(1/2):105-111.

    [9]Wang T,Sun H W,Mao H J,et al. The immobilization of heavy metals in soil by bioaugmentation of a UV-mutant Bacillus subtilis 38 assisted by NovoGro biostimulation and changes of soil microbial community[J]. Journal of Hazardous Materials,2014,278:483-490.

    [10]劉紅娟,黨 志,張 慧,等. 蠟狀芽孢桿菌抗重金屬性能及對(duì)鎘的累積[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2010,29(1):25-29.

    [11]Tripathi M,Vikram S,Jain R K,et al. Isolation and growth characteristics of chromium(Ⅵ) and pentachlorophenol tolerant bacterial isolate from treated tannery effluent for its possible use in simultaneous bioremediation[J]. Indian Journal of Microbiology,2011,51(1):61-69.

    [12]沈秋悅,曹志強(qiáng),朱月芳,等. 一株耐鎘細(xì)菌的分離鑒定及其吸附條件的優(yōu)化[J]. 土壤,2016,48(3):615-620.

    [13]Gabr R M,Hassan S H A,Shoreit A A M. Biosorption of lead and nickel by living and non-living cells of Pseudomonas aeruginosa ASU 6a[J]. International Biodeterioration & Biodegradation,2008,62(2):195-203.

    [14]Yang Y T,Wei X Z,Wan J M,et al. Equilibrium and kinetic characteristic of adsorption of Cu2+,Pb2+ on a novel anionic starch microspheres[J]. Water,Air,& Soil Pollution,2011,219(1/2/3/4):103-112.[HJ1.85mm]

    [15]周 賡,楊 輝,潘 虎,等. 一株耐鎘鏈霉菌的篩選、鑒定與基本特性分析[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2017,37(6):2076-2084.

    [16]李新琦,溫沁雪,王 瓊,等. 處理電鍍廢水的耐銅功能菌的篩選及吸附性能[J]. 哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,48(8):108-114.

    [17]盧涌泉,鄧振華. 實(shí)用紅外光譜解析[M]. 北京:電子工業(yè)出版社,1989:203-207.

    [18]Kim S Y,Jin M R,Chung C H,et al. Biosorption of cationic basic dye and cadmium by the novel biosorbent Bacillus catenulatus JB-022 strain[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering,2015,119(4):433-439.

    [19]Sun J,Li Y,Liu L G,et al. Bioaccumulation capacity and mechanisms of cadmium by Bacillus Licheniformis[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences,2013,27(11):1644-1651.

    [20]Fang L C,Cai P,Chen W L,et al. Impact of cell wall structure on the behavior of bacterial cells in the binding of copper and cadmium[J]. Colloids and Surfaces (A:Physicochemical and Engineering Aspects),2009,347(1/2/3):50-55.

    [21]陳永華,向 捷,吳曉芙,等. 三株耐鉛鋅菌的分離、鑒定及其吸附能力[J]. 生態(tài)學(xué)雜志,2015,34(9):2665-2672.

    [22]黃 飛. 蠟狀芽孢桿菌對(duì)水體中鎘的吸附特性與機(jī)理研究[D]. 廣州:華南理工大學(xué),2013:117-118.

    国产成人91sexporn| av在线观看视频网站免费| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品久久久久久久电影| 在线观看免费日韩欧美大片 | 女性生殖器流出的白浆| 日本wwww免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 秋霞在线观看毛片| 午夜91福利影院| 大片免费播放器 马上看| 嫩草影院入口| 亚洲av.av天堂| 日本免费在线观看一区| 精品午夜福利在线看| 日韩制服骚丝袜av| 久久久久久伊人网av| 我的女老师完整版在线观看| 日韩中字成人| a级毛片在线看网站| 美女主播在线视频| 国产男女内射视频| 欧美日韩综合久久久久久| videosex国产| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 欧美97在线视频| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲精品自拍成人| 3wmmmm亚洲av在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产一区亚洲一区在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国内精品宾馆在线| 在线 av 中文字幕| 热99国产精品久久久久久7| 久久99蜜桃精品久久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 黄色配什么色好看| 国产精品一区二区在线不卡| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜老司机福利剧场| 少妇人妻精品综合一区二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 一级,二级,三级黄色视频| 欧美精品一区二区免费开放| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲国产av影院在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品第二区| 亚洲内射少妇av| 制服诱惑二区| 中文字幕免费在线视频6| 水蜜桃什么品种好| xxxhd国产人妻xxx| 国产成人精品福利久久| 欧美精品亚洲一区二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 91国产中文字幕| 2022亚洲国产成人精品| xxx大片免费视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 嘟嘟电影网在线观看| 日韩成人伦理影院| 日本午夜av视频| 99热网站在线观看| 曰老女人黄片| 精品视频人人做人人爽| 亚洲精品,欧美精品| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久av网站| 久久99精品国语久久久| 日日爽夜夜爽网站| 丁香六月天网| 男女免费视频国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久久久久久久久久久大奶| 男女国产视频网站| 简卡轻食公司| 免费少妇av软件| 在线看a的网站| 精品一区二区免费观看| 中文字幕av电影在线播放| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲国产日韩一区二区| 成人国产麻豆网| 成人无遮挡网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产男女内射视频| 妹子高潮喷水视频| 国产免费现黄频在线看| 亚洲国产欧美在线一区| 国产亚洲一区二区精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| av福利片在线| 久久国内精品自在自线图片| 久久毛片免费看一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 男女国产视频网站| 自线自在国产av| 亚洲成人av在线免费| 十分钟在线观看高清视频www| 久久午夜福利片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久亚洲国产成人精品v| 中文欧美无线码| 日本爱情动作片www.在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久99一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 777米奇影视久久| 久久久久网色| 国产成人一区二区在线| 女人精品久久久久毛片| 色婷婷久久久亚洲欧美| 伦精品一区二区三区| 在线观看免费日韩欧美大片 | www.av在线官网国产| kizo精华| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲怡红院男人天堂| 一级二级三级毛片免费看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久精品94久久精品| 成人影院久久| 精品久久久精品久久久| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲人成网站在线播| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲天堂av无毛| 黑人猛操日本美女一级片| 国产视频内射| 日本免费在线观看一区| 一级a做视频免费观看| 午夜激情福利司机影院| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产亚洲最大av| 免费看av在线观看网站| 国产熟女欧美一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 黄片播放在线免费| 亚洲第一av免费看| 国产黄色免费在线视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品久久久噜噜| 日韩一本色道免费dvd| 综合色丁香网| 日韩电影二区| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品国产av成人精品| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 在线播放无遮挡| av免费观看日本| av电影中文网址| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品一区二区免费观看| 久久99热6这里只有精品| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 日韩免费高清中文字幕av| 日韩一区二区视频免费看| 日本与韩国留学比较| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品一区蜜桃| 欧美激情 高清一区二区三区| 99久久人妻综合| 美女国产视频在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 色视频在线一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 黄色怎么调成土黄色| videossex国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本av手机在线免费观看| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久国产电影| 在线看a的网站| 观看美女的网站| 精品亚洲成国产av| 一区二区三区精品91| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲av成人精品一区久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 免费日韩欧美在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久ye,这里只有精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久婷婷青草| 我的女老师完整版在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 女人久久www免费人成看片| 久久久久视频综合| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产免费视频播放在线视频| 国产不卡av网站在线观看| 观看av在线不卡| 国产精品久久久久成人av| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久国产一区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 国产成人精品在线电影| 一级毛片 在线播放| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久久久久久免| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产成人精品无人区| 草草在线视频免费看| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲欧美色中文字幕在线| 男女啪啪激烈高潮av片| 丰满乱子伦码专区| 99热这里只有是精品在线观看| 国产成人freesex在线| 制服诱惑二区| 大片免费播放器 马上看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 十八禁网站网址无遮挡| 91午夜精品亚洲一区二区三区| xxx大片免费视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 青春草视频在线免费观看| 国产av精品麻豆| 一区二区av电影网| 久久国产亚洲av麻豆专区| 丝袜美足系列| 伊人久久精品亚洲午夜| 中文字幕最新亚洲高清| 成年女人在线观看亚洲视频| 少妇人妻 视频| 国产日韩欧美视频二区| 满18在线观看网站| 一本大道久久a久久精品| 蜜桃在线观看..| 91国产中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜av观看不卡| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人免费观看视频高清| 在线观看国产h片| 国产色婷婷99| 国产精品一国产av| 亚洲高清免费不卡视频| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久久精品久久久久真实原创| videossex国产| 色5月婷婷丁香| av播播在线观看一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 女人久久www免费人成看片| 啦啦啦在线观看免费高清www| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| a级毛片在线看网站| 久久精品久久精品一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久热久热在线精品观看| 色94色欧美一区二区| 在线观看三级黄色| 大香蕉97超碰在线| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 成人午夜精彩视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 成人国语在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品国产av在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 成人免费观看视频高清| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线看a的网站| 男男h啪啪无遮挡| 熟女av电影| 欧美日韩精品成人综合77777| 人妻人人澡人人爽人人| 国产精品99久久久久久久久| 欧美精品一区二区大全| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品偷伦视频观看了| 最后的刺客免费高清国语| tube8黄色片| 母亲3免费完整高清在线观看 | 美女视频免费永久观看网站| 91久久精品电影网| 精品久久久久久久久av| 飞空精品影院首页| 中文天堂在线官网| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产69精品久久久久777片| 国产精品人妻久久久久久| 国产一区二区在线观看日韩| 婷婷色综合www| 亚洲精品一二三| 成人黄色视频免费在线看| 日日爽夜夜爽网站| 美女中出高潮动态图| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲色图综合在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 午夜91福利影院| 蜜桃在线观看..| 最黄视频免费看| 99久久精品国产国产毛片| av视频免费观看在线观看| 国产 一区精品| av卡一久久| 99热全是精品| 亚洲经典国产精华液单| 日韩中字成人| 亚洲成人手机| h视频一区二区三区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久午夜综合久久蜜桃| 色5月婷婷丁香| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品久久久久久电影网| 丝瓜视频免费看黄片| 国产 一区精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产黄色免费在线视频| 性色av一级| 一区二区三区精品91| 人妻系列 视频| 日韩av不卡免费在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 永久免费av网站大全| 99久久精品国产国产毛片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 丰满少妇做爰视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 一本一本综合久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 在线看a的网站| 国产片特级美女逼逼视频| 久久99一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品偷伦视频观看了| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩av在线免费看完整版不卡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩av不卡免费在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产| 两个人的视频大全免费| 51国产日韩欧美| 亚洲精品亚洲一区二区| 日韩一区二区三区影片| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美3d第一页| 日本与韩国留学比较| 亚洲精品中文字幕在线视频| 少妇人妻 视频| 97在线人人人人妻| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久婷婷青草| 亚洲国产精品一区三区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久久久久久国产电影| 久久久久久伊人网av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品国产av在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲在久久综合| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 大陆偷拍与自拍| 毛片一级片免费看久久久久| 久久人妻熟女aⅴ| 简卡轻食公司| 久久99蜜桃精品久久| 如何舔出高潮| 女人精品久久久久毛片| 精品一品国产午夜福利视频| 中文字幕最新亚洲高清| 人妻制服诱惑在线中文字幕| av国产久精品久网站免费入址| 色网站视频免费| 久久国内精品自在自线图片| 男女边摸边吃奶| 人妻系列 视频| av免费观看日本| 老熟女久久久| 亚洲精品色激情综合| 国产淫语在线视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 两个人免费观看高清视频| 国产精品三级大全| 99re6热这里在线精品视频| 高清不卡的av网站| 免费高清在线观看日韩| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 永久网站在线| 大香蕉97超碰在线| 欧美精品一区二区大全| 久久99热6这里只有精品| 大香蕉久久成人网| 飞空精品影院首页| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久精品国产a三级三级三级| 又大又黄又爽视频免费| 十八禁高潮呻吟视频| 精品久久久久久电影网| 夜夜爽夜夜爽视频| 一级毛片电影观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久久久国产网址| 精品国产国语对白av| 黑丝袜美女国产一区| 性色avwww在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲av在线观看美女高潮| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 五月玫瑰六月丁香| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 伊人久久精品亚洲午夜| av卡一久久| 久久人妻熟女aⅴ| 水蜜桃什么品种好| 日本与韩国留学比较| 丝袜在线中文字幕| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产在线一区二区三区精| 99久久中文字幕三级久久日本| 91成人精品电影| 亚洲精品乱久久久久久| 秋霞伦理黄片| 综合色丁香网| 色94色欧美一区二区| 亚洲国产最新在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 在现免费观看毛片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一区二区av电影网| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 七月丁香在线播放| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 尾随美女入室| 日韩欧美精品免费久久| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 人成视频在线观看免费观看| 青春草国产在线视频| 一区在线观看完整版| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲综合色惰| 99久久精品一区二区三区| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品一二三| 黄色怎么调成土黄色| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av免费高清在线观看| a级毛片在线看网站| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 女人精品久久久久毛片| 久久婷婷青草| 天堂8中文在线网| 女人久久www免费人成看片| 在线观看免费高清a一片| 亚洲中文av在线| av不卡在线播放| 中文天堂在线官网| 妹子高潮喷水视频| 人人妻人人澡人人看| 老女人水多毛片| 男女边吃奶边做爰视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 高清不卡的av网站| 亚洲人成77777在线视频| 五月天丁香电影| 交换朋友夫妻互换小说| 啦啦啦啦在线视频资源| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲精品一区蜜桃| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲在久久综合| 热99国产精品久久久久久7| 久久99蜜桃精品久久| 午夜福利视频在线观看免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费高清在线观看日韩| 久久精品国产亚洲网站| av免费在线看不卡| 亚洲欧美成人精品一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲精品,欧美精品| 日本91视频免费播放| 亚洲内射少妇av| 精品酒店卫生间| a级毛片黄视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产爽快片一区二区三区| 一级a做视频免费观看| 成年人免费黄色播放视频| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 男女国产视频网站| 精品国产露脸久久av麻豆| 在线观看www视频免费| 精品久久蜜臀av无| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 久久毛片免费看一区二区三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| freevideosex欧美| 一个人免费看片子| 天美传媒精品一区二区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲精品成人av观看孕妇| 男人操女人黄网站| 中文字幕久久专区| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品国产三级专区第一集| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 丝袜在线中文字幕| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品第二区| 亚洲精品乱久久久久久| 免费看光身美女| 春色校园在线视频观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品国产av在线观看| 最近手机中文字幕大全| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 18禁在线播放成人免费| 大话2 男鬼变身卡| 中文字幕免费在线视频6| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 999精品在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 国产av码专区亚洲av| 日韩一区二区三区影片| 777米奇影视久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久精品久久久久久久性| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品99久久久久久久久| 插阴视频在线观看视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 热re99久久精品国产66热6| 色吧在线观看| 亚洲无线观看免费| 亚洲成人手机| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 日日啪夜夜爽| 伦理电影免费视频| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品第二区| 亚洲怡红院男人天堂| 午夜视频国产福利| 国产精品久久久久久av不卡| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品国产亚洲av天美|