HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測在宮頸癌早期篩查中的臨床價值

藍碧波 冉愛冬 沈少俊

【摘 要】目的：研究HPV（人乳頭狀病毒）E6/E7 mRNA與HPV DNA于宮頸癌早期篩查中的價值。方法：選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性，觀察HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測結(jié)果。結(jié)果：HPV E6/E7 mRNA陽性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。聯(lián)合檢測的敏感性、特異性高于單一檢測（P<0.05）。結(jié)論：HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA在宮頸癌篩查中意義重大，但聯(lián)合檢測的敏感性及特異性更高。

【關(guān)鍵詞】早期篩查;宮頸癌;人乳頭狀病毒;宮頸液基薄層細胞學檢查

文章編號：WHR2019032213

[Abstract] Objective：To study the value of HPV （human papillomavirus） E6/E7 mRNA and HPV DNA in the early screening of cervical cancer.Methods： 500 women checked from January 2015 to December 2017 in our hospital were selected. HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA detection results were recorded. Results： The positive rate of HPV E6/E7 mRNA （64.40%） was higher than HPV DNA （49.80%） （P<0.05）; the detection sensitivity and specificity based on the combination examination was higher than single examination （P<0.05）.Conclusion： HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA are of great importance in clinical screening. However， the diagnosis sensitivity and specificity based on the combination mode is higher.

[Key words]Early screening; Cervical cancer; Human papillomavirus; Thin-cytologic test

近年來宮頸癌發(fā)生率不僅逐年升高，其發(fā)生率約占女性惡性腫瘤的第二位，同時呈現(xiàn)年輕化趨勢，隨疾病進展，癥狀加重，可能產(chǎn)生全身衰竭癥狀。臨床上大部分患者確診時已經(jīng)錯過最佳治療時間，因此早期篩查具有重要意義[1]。報道表明高危型HPV感染是造成疾病的主要風險因素，侵犯上皮細胞，產(chǎn)生較多癌蛋白，與細胞周期的調(diào)節(jié)蛋白發(fā)生結(jié)合，使細胞周期紊亂，發(fā)生癌變[2]。目前臨床上宮頸病變通常利用病毒學及形態(tài)學進行檢查，隨后HPV E6/E7 mRNA診斷也日漸受到重視。因此本院展開研究，選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性作為研究對象，探討HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA運用于宮頸癌早期篩查中的意義，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性，年齡30～50歲，平均年齡（41.47±1.03）歲。患者均存在異常出血、陰道分泌物異味及增多等癥狀，并經(jīng)過病理活檢：未明確意義非典型鱗狀細胞137例（A組），高度鱗狀上皮病變172例（B組），低度鱗狀上皮病變166例（C組），宮頸癌25例（D組）。本研究經(jīng)過本院倫理委員會批準同意;患者及家屬均簽署知情同意書，并自愿加入本次研究中;均經(jīng)過病理活檢確診;資料齊全，意識正常，能夠配合研究者;排除研究前存在盆腔放療或者宮頸物理治療史者;合并精神類疾病、文盲或者溝通障礙者;合并急性生殖道炎癥者。

1.2 方法

標本采集：將新柏氏液基細胞學檢查專用刷置于患者宮頸管，旋轉(zhuǎn)5～8周，采集其宮頸口及宮頸管脫落的上皮細胞，將刷頭放于保存液瓶中待檢。

將標本按照3000r/min離心，5min后去除上層清液，蒸餾水（2mL）清洗后離心，去除上層清液后放入裂解劑。溶解液、蛋白酶按照1∶800比例混合，于65℃下水浴30min獲得裂解劑，檢測HPV E6/E7 mRNA。NaOH（2.5mol/L）放入裂解液，于55℃水浴下30min，放入終止反應(yīng)液。釋放所需檢測的目的RNA。于-20℃下保存待檢。

HPV E6/E7 mRNA：利用兩種捕獲探針雜交捕獲目的RNA，固定在檢測板上，另將LEs、CEs靶探針雜交結(jié)合于目的RNA。預放大分子雜交結(jié)合兩個相近LEs、CEs靶探針，放大分子雜交結(jié)合預防大分子，連接堿性磷酸酶的標記探針雜交結(jié)合放大分子，加入底物，結(jié)合堿性磷酸酶，出現(xiàn)化學發(fā)光信號。光強弱與目的RNA量呈正相關(guān)，利用化學發(fā)光檢測儀計算目的RNA，按照拷貝數(shù)表示。

HPV DNA：遵照二代雜交捕獲法，從宮頸管中選擇標本，置于試管中，按熒光法檢測不同HPV DNA分型。

1.3 觀察指標

觀察兩組檢測結(jié)果，記錄四組HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA陽性率，并觀察單一檢測與聯(lián)合檢測的敏感性、特異性，探討HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA在宮頸癌篩查中的價值。

HPV E6/E7 mRNA轉(zhuǎn)錄數(shù)>4000陽性;HPV DNA值≥1.0ng/L陽性。病理活檢為金標準。

1.4 統(tǒng)計學處理

選擇SPSS 18.0統(tǒng)計系統(tǒng)，其中計量數(shù)據(jù)通過（±s）表達，利用t檢查，而計數(shù)數(shù)據(jù)通過百分比表達，利用χ2檢查，當P<0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

HPV E6/E7 mRNA陽性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。見表1。

2.2 敏感性、特異性

聯(lián)合檢測的敏感性、特異性高于單一檢測（P<0.05）。見表2。

3 討論

近年來，隨著宮頸癌的發(fā)生率逐年升高，其死亡率也隨之增加，雖然發(fā)達國家宮頸癌篩查的防治措施不斷完善，其患病率出現(xiàn)減低趨勢，但大部分發(fā)展中國家的疾病發(fā)生率仍然呈現(xiàn)升高趨勢[3]。HPV屬于無包膜的雙鏈閉環(huán)DNA病毒，可廣泛存在于自然界。一旦宮頸上皮細胞受到感染后，病毒癌基因E6、7mRNA轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生E6、E7兩種癌蛋白。癌蛋白與宿主細胞中P53或者Rb蛋白發(fā)生結(jié)合，導致細胞周期控制失衡，形成癌變[4-5]。早期基因E6、E7是HPV致癌中的研究重點，一旦其表達丟失抑制后可逐漸引發(fā)宮頸癌，其中E6可結(jié)合、殺滅腫瘤抑制因子P53，而E7可結(jié)合、降解抑制蛋白pRb，最終使細胞無限分裂，并不會造成凋亡，因此盡早診斷，及時給予治療至關(guān)重要，可提高患者生存率及生活質(zhì)量[6]。

既往HPV DNA檢測取得過一定診斷價值，但敏感性及特異性較低，因此臨床迫切需要敏感性及特異性較高的診斷方式。由于宮頸細胞病變的嚴重程度不僅與病毒類型及其負荷量有關(guān)，同時與病毒活躍程度息息相關(guān)[7]。而HPV E6/E7 mRNA可體現(xiàn)出E6/E7轉(zhuǎn)錄活動程度，加上高危型HPV感染是造成宮頸癌的主要因素，因此定期檢查HPV E6/E7 mRNA具有重要作用，可評估宮頸癌發(fā)生的風險性，并成為高危人群及癌前病變篩查中的主要方式[8]。HPV E6/E7 mRNA以bDNA專利技術(shù)為主，是新型雜交信號放大核酸檢測技術(shù)，過程中不必反轉(zhuǎn)錄、PCR擴增，簡便快速[9]。其中bDNA屬于三明治結(jié)構(gòu)的核酸雜交方式，主要利用bDNA分子放大捕獲目標DNA/RNA信號，但其并不具有呈指數(shù)增長的擴增過程，可明確放大倍數(shù)，穩(wěn)定性較高，同時可重復檢查，具有推廣及應(yīng)用的價值。本文作者對此展開研究，選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性作為研究對象，分別給予HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測，結(jié)果顯示：HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。聯(lián)合檢測的敏感性、特異性高于單一檢測（P<0.05），提示HPV E6/E7 mRNA陽性率較高，但聯(lián)合檢測的敏感性及特異性更高。HPV DNA檢測發(fā)現(xiàn)HPV感染類型，而HPV E6/E7 mRNA可檢測HPV病毒癌基因E6/E7 mRNA的連續(xù)表達量，從而判定細胞中的病毒類型，提高檢測結(jié)果的準確性。因此E6 /E7 mRNA 檢測在宮頸病變的檢測與診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景，甚至認為它將會與細胞病理學一樣，成為宮頸癌篩查的輔助診斷指標[10]。

綜上所述，兩種檢測方式均具有一定價值，聯(lián)合檢測后效果更好，提升敏感性及特異性。

參考文獻

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