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    松杉靈芝母種培養(yǎng)基篩選及菌株對(duì)比試驗(yàn)

    2019-12-19 05:43:46胡志強(qiáng)王鑫王旭亢學(xué)平李健杜忠偉
    中國(guó)林副特產(chǎn) 2019年6期
    關(guān)鍵詞:木屑培養(yǎng)料靈芝

    胡志強(qiáng),王鑫,王旭,亢學(xué)平,李健, 杜忠偉

    (延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院(延邊特產(chǎn)研究所),吉林 延邊 133400)

    松杉靈芝(GanodermatsugaeMurr.)別稱(chēng)鐵杉靈芝,松杉樹(shù)芝,屬靈芝科靈芝屬,生長(zhǎng)于海拔700~1400 m的紅松闊葉混交林、針葉混交林內(nèi)的落葉松﹑紅杉﹑冷杉﹑云杉的伐根和腐木上,分布于我國(guó)溫寒帶長(zhǎng)白山地區(qū)[1-2]。 現(xiàn)代研究表明,松杉靈芝營(yíng)養(yǎng)成分豐富,含有人體必需的氨基酸、核苷、微量元素、維生素及生物活性多糖、三萜類(lèi)化合物、生物堿等,同時(shí)還是維護(hù)人體健康所必須的膳食纖維的良好來(lái)源[3-5]。目前松杉靈芝栽培用種主要來(lái)源于野生資源的馴化和引種[6]。本研究對(duì)延邊地區(qū)的野生松杉靈芝的4個(gè)菌株進(jìn)行培養(yǎng)基篩選,為松杉靈芝的菌種選育提供參考。

    1 材料和方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 供試菌株。松杉靈芝(GanodermatsugaeMurr.)菌株來(lái)源及編號(hào)見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)材料均來(lái)自延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

    表1 供試松杉靈芝菌株及來(lái)源

    1.1.2 培養(yǎng)基選擇。采用3種母種培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基,麥麩培養(yǎng)基,木屑浸汁+PDA混合培養(yǎng)基,以1000 mL體積為標(biāo)準(zhǔn),具體配方如表2。

    表2 培養(yǎng)基配方

    1.2 研究方法

    1.2.1 培養(yǎng)基制備

    馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基:稱(chēng)取200 g馬鈴薯,洗凈去皮切碎,加水1000 mL煮沸0.5 h,紗布過(guò)濾,再加10~20 g葡萄糖和17~20 g瓊脂,充分溶解后趁熱紗布過(guò)濾,分裝試管,每試管5 mL。

    麥麩浸汁培養(yǎng)基:將麩皮與黃豆粉一起加水煮沸30 min,4層紗布過(guò)濾,在濾液中加入瓊脂、葡萄糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀。

    木屑浸汁+PDA培養(yǎng)基:將硬雜木木屑和馬鈴薯分開(kāi)加水煮沸30 min,4層紗布過(guò)濾,混合后的濾液加入瓊脂、葡萄糖,磷酸二氫鉀, 硫酸鎂。

    將3種培養(yǎng)基分別裝入18 mm×180 mm試管中,包扎成捆,裝入高壓滅菌鍋內(nèi),壓力升至0.12 kPa,保持30 min,待壓力表指針降至0后,打開(kāi)鍋蓋,取出試管后斜放冷卻。

    1.2.2 培養(yǎng)基篩選。對(duì)所研究的4個(gè)菌株(YBSS1、YBSS2、YBSS3、YBSS4),分別接入3種培養(yǎng)基中,接種量均為0.5 cm×0.5 cm,嚴(yán)格按照無(wú)菌的操作規(guī)范進(jìn)行。

    1.2.3 培養(yǎng)與觀察。將接種后的試管置于培養(yǎng)箱內(nèi),25 ℃培養(yǎng),每隔2天觀察1次,并記錄接種數(shù)量、記錄菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管的時(shí)間,污染情況,成活率[7],結(jié)果見(jiàn)表3;觀察菌絲的粗度 (粗、較粗、細(xì))、生長(zhǎng)勢(shì) (強(qiáng)、較強(qiáng)、弱)、疏密程度(密、較密、疏)[8],結(jié)果見(jiàn)表4。

    1.2.4 栽培試驗(yàn)。對(duì)獲得的優(yōu)質(zhì)母種進(jìn)行出芝試驗(yàn),通過(guò)隨機(jī)抽取15個(gè)子實(shí)體記錄菌蓋直徑、蓋厚及重量,進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià),結(jié)果見(jiàn)表5;對(duì)4個(gè)菌株培養(yǎng)獲得的母種分別制作原種,然后做栽培種,每個(gè)菌株做100袋。原種和栽培種具體制作如下。

    1.2.4.1 原種制作:選用木屑83%、麩皮15%、蔗糖1%、生石膏1%,含水量60%、自然pH。裝瓶、滅菌:按配方把培養(yǎng)料拌勻、裝入菌種瓶,裝料要上緊下松,裝量距瓶口3~5 cm即可,裝好后擦凈瓶體,用塑料薄膜加報(bào)紙?jiān)o瓶口,然后進(jìn)行滅菌(高壓滅菌,121 ℃滅菌2 h)冷卻備用。接種:滅菌后培養(yǎng)料冷卻至30 ℃送入接種室,在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行。接完的置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)[9]。培養(yǎng):在溫度22~26 ℃,空氣相對(duì)濕度在45%~60%以下,約培養(yǎng)35~45天,菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)全瓶。

    1.2.4.2 栽培種的制作:選用雜木屑83,麩皮15,石膏1,蔗糖1,含水量60%~65%[10]。選擇聚丙烯塑料袋(35 cm×17 cm)。經(jīng)過(guò)裝袋(裝袋時(shí)要注意上下松緊一致,刷清袋口培養(yǎng)料后用橡皮筋把兩端的袋口扎緊,然后進(jìn)行檢查塑料袋是否漏水,不漏水再滅菌)裝好袋后要及時(shí)滅菌,以防培養(yǎng)料發(fā)酵變質(zhì)。滅菌在121 ℃下滅菌2.5 h,滅菌后溫度降至自然溫度下,移入接種箱進(jìn)行無(wú)菌操作接種。將接種后的菌袋移入無(wú)菌培養(yǎng)室培養(yǎng),發(fā)菌期間,室溫保持在25 ℃,每天通風(fēng)1次。黑暗培養(yǎng),經(jīng)60~70天左右,菌絲便可長(zhǎng)滿(mǎn)袋。在此期間及時(shí)檢查是否有雜菌,發(fā)現(xiàn)后馬上處理。

    1.2.4.3 出芝管理:袋料菌袋排袋方法,共排放5~7層做成菌墻,在最上面一層填土10 cm,并作成U字型,以便出芝期間補(bǔ)給營(yíng)養(yǎng)和水分。菌墻作好后即可在菌袋一端開(kāi)出芝口,大小以直徑2 cm、深1 cm,開(kāi)口后在墻面掛膜、保濕、保溫,促進(jìn)芝蕾形成,相對(duì)空氣濕度為70%~80%,溫度在20 ℃左右均可,經(jīng)10~15 d開(kāi)口處出現(xiàn)芝蕾,長(zhǎng)到2~3 cm時(shí),直接向芝蕾表面噴灑霧水,棚內(nèi)濕度保持在90%~95%,溫度要求25~30 ℃,散射光,CO2濃度調(diào)節(jié)到0.1%以下,經(jīng)50 d左右時(shí)間靈芝子實(shí)體形基本成熟。

    2 結(jié)果分析

    菌絲是食藥用菌的子實(shí)體生長(zhǎng)基礎(chǔ),是菌種選育的重要指標(biāo),通過(guò)對(duì)4個(gè)野生松杉靈芝菌株在3種培養(yǎng)基中的長(zhǎng)勢(shì)可以對(duì)其作出初步的評(píng)價(jià),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)獲得數(shù)據(jù)如表3~4。

    表3 松杉靈芝在不同培養(yǎng)基下的長(zhǎng)勢(shì)

    農(nóng)藝性狀是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。通過(guò)對(duì)子實(shí)體農(nóng)藝性狀的觀測(cè)并分別打分,菌蓋大小和菇體形態(tài)兩個(gè)指標(biāo)的總分為子實(shí)體農(nóng)藝性狀分值,其分值越高,菌株農(nóng)藝性狀越好[11]。生物轉(zhuǎn)化率中的測(cè)產(chǎn)量也是對(duì)食藥用菌質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo),4個(gè)菌株的栽培試驗(yàn),測(cè)量第一次采收的平均菌蓋大小,厚度,測(cè)重量取平均值,結(jié)果如表5。

    表4 菌絲的生長(zhǎng)狀態(tài)

    表5 不同菌株松杉靈芝的質(zhì)量評(píng)價(jià)

    3 結(jié)論

    松杉靈芝的4個(gè)菌株,在不同培養(yǎng)基中的長(zhǎng)勢(shì)和生長(zhǎng)狀態(tài)存在的差異不顯著,但是也可以看出菌株“YBSS2”在3種培養(yǎng)基中菌絲長(zhǎng)勢(shì)比其他3個(gè)菌株(YBSS1、YBSS3、YBSS4)好,4個(gè)菌株在木屑浸汁+PDA培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最好;通過(guò)對(duì)栽培試驗(yàn)獲得的子實(shí)體質(zhì)量性狀的比較,菌株“YBSS2”較好,確定松杉靈芝菌株“YBSS2”為最優(yōu)菌株,可做為推廣栽培品種。

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