子宮內(nèi)膜癌中癌癥相關(guān)區(qū)域長(zhǎng)鏈非編碼RNA5表達(dá)意義及預(yù)后價(jià)值

管群，張秦，任青玲

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。最近的研究表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Lnc RNA）存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，可調(diào)節(jié)基因表達(dá)水平，其異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)［1］。癌癥相關(guān)區(qū)域長(zhǎng)鏈非編碼RNA5（CARLo-5）又稱結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-1（CCAT-1），最初在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)，后發(fā)現(xiàn)在肺癌、肝癌等惡性腫瘤中也呈高表達(dá)［2-3］，但CARLo-5與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)關(guān)系的研究報(bào)道相對(duì)較少。本研究分析CARLo-5表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病人臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2011年1月至2013年1月南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)病理確診的初治子宮內(nèi)膜癌病人79例作為子宮內(nèi)膜癌組，選取同期該院年齡相匹配的行子宮全切除術(shù)但病理結(jié)果證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜的婦科良性疾病病人50例作為對(duì)照組，無其他原發(fā)性腫瘤。兩組均排除術(shù)前接受輔助治療（如激素治療、放化療、內(nèi)分泌治療等）、既往惡性腫瘤史、病例或隨訪資料不完整的病人。

1.2 資料收集及隨訪收集79例子宮內(nèi)膜癌病人的病例資料，包括年齡、組織分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。術(shù)后采用電話、門診復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2018年1月，所有病人均接受至少5年的隨訪，記錄病人的5年總生存期（OS）和無進(jìn)展生存期（PFS）。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法收集所有病人手術(shù)切除的新鮮組織標(biāo)本，取得標(biāo)本后立即放入液氮中速凍，10 min后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎脤?shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）檢測(cè)79份子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本和50份正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本CARLo-5表達(dá)。具體方法：RNA提取后用0.1%焦碳酸二乙酯（DEPC）水調(diào)零后，取2 μL RNA稀釋液進(jìn)行濃度和純度檢測(cè)，如1.8＜A260/A280＜2.0時(shí)，RNA純度合格，即刻讀取RNA濃度。采用Invitrogen公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行從RNA到cDNA的制備，CARLo-5引物序列，正向序列：5’-GCCACAAATCAACAACAACAACAACAA-3’，反向序列：5’-AGAGTGATGCCAAGGTGTTATTGTCAA-3’；GAPSH引物序列，正向序列：5’-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3’，反向序列：5’-TGCTGGAAGATGGTGATGGGATT-3’。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，循環(huán)參數(shù)：95℃15 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，共循環(huán)40次，72℃延伸5 min；以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為內(nèi)參照，采用2-△△CT法計(jì)算目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，資料采用xˉ±s表示，采用成組t檢驗(yàn)或方差分析，采用Cox分析法做影響因素分析，采用KM生存模型進(jìn)行生存率分析，組間比較行Log-rank檢驗(yàn)。此外繪制受試者工作特征曲線（ROC）分析CARLo-5預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌病人的預(yù)后的價(jià)值，并用拋物線估算法計(jì)算ROC曲線下面積（AUC）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織CARLo-5表達(dá)量比較子宮內(nèi)膜癌組織CARLo-5表達(dá)量為（3.76±0.78）顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織的（0.38±0.12），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝30.372，P＜0.01）。

2.2 CARLo-5表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病人臨床病理的關(guān)系CARLo-5表達(dá)與年齡、子宮內(nèi)膜癌病理類型無關(guān)（P＞0.05），與國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期、細(xì)胞分化程度、血管浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P＜0.05），見表1。

2.3 預(yù)后分析截止隨訪時(shí)間，79例子宮內(nèi)膜癌病人的5年P(guān)FS率為50.63%（40/79），中位PFS時(shí)間為69.8個(gè)月，5年OS率為68.35%（54/79），中位OS為79.2個(gè)月，見圖1。

2.4 子宮內(nèi)膜癌病人CARLo-5表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系79例子宮內(nèi)膜癌病人中無病生存者（40例）CARLo-5表達(dá)量（3.15±0.67）低于帶瘤生存者（14例）（3.81±0.72），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝3.113，P＝0.003）；存活者（54例）CARLo-5表達(dá)量（3.32±0.71）低于死亡者（25例）（4.71±0.89），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝7.456，P＜0.01）。

表1 CARLo-5表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病人臨床病理參數(shù)的關(guān)系/xˉ±s

圖1 子宮內(nèi)膜癌病人79例生存曲線圖

2.5 子宮內(nèi)膜癌病人總生存期（OS）影響因素的Cox分析多因素分析顯示，年齡、FIGO分期、細(xì)胞分化程度、血管浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CARLo-5表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病人OS有關(guān)（P＜0.05），見表2。

2.6 CARLo-5對(duì)子宮內(nèi)膜癌病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值經(jīng)過ROC曲線的繪制和分析（見圖2），發(fā)現(xiàn)當(dāng)CARLo-5表達(dá)量的臨界值為3.31時(shí)，預(yù)測(cè)5年生存率AUC為0.817，靈敏度和特異度最高，分別為76.0%、77.8%。以3.31為臨界值，分為≤3.31組（51例）和＞3.31組（28例），兩組5年OS率分別為78.43%（40/51）、50.0%（14/28），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank＝7.609，P＝0.006），見圖3。

圖2 CARLo-5預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌病人79例預(yù)后的受試者工作特征曲線（ROC）

圖3 子宮內(nèi)膜癌病人79例癌癥相關(guān)區(qū)域長(zhǎng)鏈非編碼RNA5（CARLo-5）≤3.31組和CARLo-5＞3.31組5年總生存曲線圖

3 討論

Lnc RNA是一種長(zhǎng)度為200個(gè)核苷酸的非編碼RNA，近年來越來越多的證據(jù)顯示，LncRNA可調(diào)控多種細(xì)胞凋亡、增殖、損傷、分化等過程，在疾病發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮廣泛的生物學(xué)作用［4-5］。有學(xué)者指出，LncRNA可能參與癌癥發(fā)生、發(fā)展［6-7］。CARLo-5為L(zhǎng)ncRNA的一種，最初由Nissan等發(fā)現(xiàn)其在結(jié)直腸癌、癌前病變中呈高表達(dá)，隨著臨床研究深入，發(fā)現(xiàn)CARLo-5在其他腫瘤中也呈高表達(dá)［8-9］。Dou等［10］指出，CARLo-5基因敲除可抑制腫瘤生長(zhǎng)，其可作為肝癌一種新的治療靶點(diǎn)。Lai等［11］研究報(bào)道，人肝癌組織中LncRNA CARLo-5是乳腺癌預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。Zhang等［12］指出，CARLo-5在肝內(nèi)膽管癌組織中呈高表達(dá)，且與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)；但子宮內(nèi)膜癌病人CARLo-5表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)、預(yù)后關(guān)系的報(bào)道尚少。

表2 子宮內(nèi)膜癌病人79例總生存期（OS）影響因素的Cox分析

本研究分析79例子宮內(nèi)膜癌和50例正常子宮內(nèi)膜癌CARLo-5表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜組織中CARLo-5表達(dá)量顯著高于正常子宮內(nèi)膜癌組織（P＜0.05），說明子宮內(nèi)膜癌組織CARLo-5表達(dá)上調(diào)，Zhao等［13］、熊加秀等［14］等研究中也發(fā)現(xiàn)與正常組織比較，癌組織中CARLo-5表達(dá)上調(diào)，本研究與其結(jié)果一致；但其具體的生物學(xué)功能尚未明確，推測(cè)CARLo-5可能通過抑制細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖。Mccleland等［15］研究發(fā)現(xiàn)CARLo-5表達(dá)與癌癥的易感性增加有關(guān)，可能參與細(xì)胞周期調(diào)控和腫瘤進(jìn)展；Liu等［16］指出，腫瘤分期高、伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌病人CARLo-5表達(dá)高于腫瘤分期低、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人。那么，CARLo-5是否在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展中起相同作用尚有待觀察。本研究發(fā)現(xiàn)，CARLo-5表達(dá)量與FIGO分期、細(xì)胞分化程度、血管浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），原因可能為CARLo-5通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）2、MMP9，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解，促使腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。另外，Cox回歸分析顯示，除年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等傳統(tǒng)因素外，CARLo-5高表達(dá)也是影響子宮內(nèi)膜癌病人OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。以上結(jié)果說明，CARLo-5可能在子宮內(nèi)膜癌進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，且有望成為監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜癌病人預(yù)后的重要指標(biāo)。Wang等［17］指出，CARLo-5與肝癌病人的預(yù)后密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)預(yù)后的獨(dú)立因子，本研究結(jié)果與其一致。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌組織中CARLo-5表達(dá)升高，其與腫瘤分期、血管浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。