超高效液相色譜檢測農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留

摘要：社會的進一步發(fā)展，促使現(xiàn)階段我國食品行業(yè)發(fā)展速度不斷加快，此種背景下，如何保證食品安全質(zhì)量，成為居民十分關(guān)注的話題之一。基于此，本文立足于食品農(nóng)藥殘留檢測角度，分析了加速溶劑萃取以及超高效液相色譜檢測具體內(nèi)容，以常見菌類食品為例研究了具體檢測方法。

關(guān)鍵詞：加速溶劑萃取;超高效液相色譜;食用菌

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191115010

引言

近幾年，隨著我國經(jīng)濟水平的不斷提升，人們對“吃”進行了重新定義，越來越多的人要求在吃得飽的前提下吃得少、吃得好，這就需要考慮到食品安全問題。加速溶劑萃取是現(xiàn)階段應(yīng)用較為廣泛的一種綠色分離技術(shù)，不僅操作較為簡便，而且檢測環(huán)節(jié)綠色化。因此，對加速溶劑萃取—超高效液相色譜檢測農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留相關(guān)內(nèi)容研究有著鮮明現(xiàn)實意義。

1 檢測農(nóng)藥殘留

蘑菇是人們生活中較為常見的一種食品，因為其自身具有提高免疫力、抗癌、降低血糖與膽固醇等功效，所以深受人們喜愛。隨著經(jīng)濟水平的提升，人們對于各類食用菌需求量的增加，導(dǎo)致一些不法商販應(yīng)用大量農(nóng)藥提升菌類存儲時間，對居民健康造成影響。常見的農(nóng)藥殘留物可以分為以下幾種：甲基硫菌靈，主要應(yīng)用在菌類種植階段;多菌靈，其實是甲基硫菌靈的一種代謝產(chǎn)物，存在于菌類種植的各個階段;環(huán)丙氨嗪，屬于三嗪類農(nóng)藥的1種，應(yīng)用目的是控制作物正常生長;三聚氰胺，也可以稱之為是環(huán)丙氨嗪的一種代謝產(chǎn)物，只不過在代謝進行過程中需要借助植物體內(nèi)脫烷基才能形成。

隨著人們對食品安全的重視程度提升，以及農(nóng)藥用量的增加，我國對上述各類農(nóng)藥殘留量進行了明確規(guī)定。例如：甲基硫菌靈的殘留量不能超過3ng/kg等。但是這些規(guī)定都是針對各類常見蔬菜，對于食用菌并沒有參考價值。

2 檢測技術(shù)分析

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進步，可以應(yīng)用到食品農(nóng)藥殘留檢測中的方法越來越多，但是從各類檢測方法的應(yīng)用情況而言，仍具有一定局限性。例如：LC–MS/MS系統(tǒng)在應(yīng)用過程中表現(xiàn)出了極高的靈敏度以及應(yīng)用價值，但是其應(yīng)用范圍較小，造成此種現(xiàn)象的原因在于檢測價格昂貴。除此之外，傳統(tǒng)的試樣處理方法在實際應(yīng)用過程中無法做到殘留農(nóng)藥的快速分離，這對于檢測精度的影響較為明顯。鑒于此，在現(xiàn)階段的食品檢測過程中，需要研究并且開發(fā)一種適應(yīng)性較強、無污染且應(yīng)用簡便、成本低的檢測方法[1]。本文提出，應(yīng)用ASE進行樣品萃取，然后應(yīng)用SPE進行凈化，最后應(yīng)用UPLC-DAD進行分析檢測。此種檢測方法不僅可以提升檢測效率，還具有較高的靈敏度。

3 檢測內(nèi)容論述

3.1 儀器與試劑

儀器的選擇中，超高效液相色譜儀器是必備設(shè)備之一，除此之外還需要配備溶劑萃取儀、超聲波清洗機、元素型1820A超純水機以及固相萃取裝置等設(shè)備。

必備試劑有各類農(nóng)藥殘留物的對照品，主要分為甲基硫菌靈、多菌靈、三聚氰胺以及環(huán)丙氨嗪。以上4種對照液溶度要求為：>97.7%、>97.2%、>99.5%、>99.5%。除此之外，還需要配備甲醇、超純水、鹽酸以及丙酮等。

檢測應(yīng)用的流動相A為甲醇溶液;流動相B為融合溶液，由乙酸銨+水+三氟乙酸調(diào)節(jié)而成，最終pH控制在3.8。

萃取溶劑主要是由丙酮（100mL）和甲醇，最終需要定容在500mL，pH控制在3.0。

標準儲備液：0.01g甲基硫菌靈以及多菌靈溶劑應(yīng)用甲醇，最終定容到100mL;0.02g環(huán)丙氨嗪以及三聚氰胺同樣應(yīng)用甲醇進行定容，定容規(guī)格與上述相同。工作液：結(jié)合實際需求進行工作液配置，配置用試劑為甲醇和水。

3.2 樣品萃取與凈化

本次實驗中，所有應(yīng)用到的食用菌樣品全部都是常見菌類品種，從超市隨機采購。采購之后，將食用菌進行勻漿處理，并且進行避光存儲，存儲溫度為4℃。

加速溶劑萃?。涸趯?yīng)儀器萃取池底部設(shè)置1層直徑為16.2mm的墊片，在其中放置0.5g硅藻土，目的在于保證收集瓶干凈整潔，不會有多余雜質(zhì)進入。樣品稱取量為10g，將其均勻地混合到萃取池中。萃取溶劑為丙酮、甲醇、鹽酸混合液，保證萃取溫度為70℃恒定，壓強為10.3MPa恒定。進行初期的靜態(tài)萃取，時間為5min，一共需要循環(huán)2次。之后以10000r/min的速度進行離心，離心時間為10min，可以得到檢測應(yīng)用的上清液，將上清液轉(zhuǎn)移到梨形瓶進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理，最后應(yīng)用3∶7比例的甲醇水溶液進行定容，定容規(guī)格為3mL。

固相萃取凈化：將固相萃取小柱應(yīng)用甲醇溶液進行活化處理，應(yīng)用清水進行平衡，加入待測樣品。觀察待測樣品流動情況，在其完全通過固相萃取小柱之后，應(yīng)用鹽酸與甲醇進行清理，上述過程中所有流出液體需要全部丟棄。洗脫過程中應(yīng)用的溶劑為氨水甲醇溶液，此過程需要對洗脫液進行收集，并且應(yīng)用氮氣將洗脫液吹干。應(yīng)用3∶7的甲醇水溶液定容，待液相檢測（以上所有溶液均為3mL）。

3.3 超高效液相分析

應(yīng)用色譜柱進行檢測，要求色譜柱的柱溫度在40℃。在檢測之前進行梯度洗脫，該過程中應(yīng)用到的溶劑為乙酸銨+水+三氟乙酸和甲醇。確定4種殘留農(nóng)藥最大檢測波長分別為甲基硫菌靈264nm、多菌靈280nm、環(huán)丙氨嗪240nm、三聚氰胺237nm。保證外部條件最佳，對殘留農(nóng)藥進行峰值、峰面積、工作曲線測定。

4 結(jié)果分析

4.1 檢測波長分析

規(guī)定色譜條件一致，檢測4類殘留農(nóng)藥標準液，應(yīng)用儀器在190～400mm波長范圍內(nèi)進行測試。檢測結(jié)果表明，TM、CAR、CYR、MEL分別在280nm、264nm、240nm、237nm時存在有特征吸收峰，比對結(jié)果為四者在237nm處均有響應(yīng)，并且干擾并不大;最終確定，CYR、MEL的最佳波長參數(shù)為237nm，這一檢測結(jié)果與其它文獻參數(shù)相同。

4.2 線性和檢出限

應(yīng)用流動相進行逐級稀釋，最終得出甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗪、三聚氰胺濃度分別為5～500ng/mL、4～400ng/mL、3.6～360ng/mL、2.4～240ng/mL，并且保證檢測條件最佳狀態(tài)進峰面積測定。而對于檢測線性的展示則是通過坐標軸完成，本次采用的坐標軸橫縱坐標分別為分析物濃度和峰面積。通過線性檢測分析可以發(fā)現(xiàn)，以上4種分析物都存在良好的線性關(guān)系，按照規(guī)定，最終確定上述4種分析物的檢出限分別為1.7、1.2、0.72以及1.1[2]。對照相關(guān)的GB/T22388以及GC-MS，本文應(yīng)用的檢測方法更加便捷，并且具有良好的檢測效果。

4.3 精確度

在精確度的檢測過程中，保證檢測環(huán)境為最佳條件，最終經(jīng)測試4種分析物的日標準差基本維持在2.3%～4.5%之間，而相對標準差則維持在3.1%～6.3%之間，上述數(shù)據(jù)證明，本文應(yīng)用到的檢測方法具有良好重現(xiàn)性。

4.4 樣品分析

在本次檢測過程中，采集的食用菌為常見的香菇、杏鮑菇、雙孢菇以及金針菇等，檢測時確保萃取、凈化、分析等過程沒有受到外界環(huán)境條件影響，最終檢測結(jié)果為：在上述食用菌中沒有檢測到4種分析物，也就是不存在農(nóng)藥殘留。其中，香菇的4種分析物檢測回收率在83%～99%之間，杏鮑菇在82%～105%之間，雙孢菇以及金針菇在83%～98%、85%～97%之間。

4.5 檢測結(jié)果分析

本文檢測過程中所提出的ASE-SPE結(jié)合UPLC-DAD方法，在實際應(yīng)用過程中，成功的檢測出采購蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗓、三聚氰胺農(nóng)藥殘留量。從檢測應(yīng)用情況以及具體表現(xiàn)角度而言，此種方法具有很好的立足點，較高的靈敏度，精密度和較低的溶劑消耗，4種分析物能夠在ug/kg水平上檢測藥物的殘留[3]。因此，該方法可以用于蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗦和三聚氰胺的常規(guī)檢測，并且可以發(fā)揮重要作用。

5 結(jié)論

作為一種綠色檢測技術(shù)，加速溶劑萃取方法在現(xiàn)階段的食品檢測中可以發(fā)揮重要作用。本文以上內(nèi)容以超市中常見的菌類食品為例，通過檢測證明，該類方法可以精準的確定出菌類食品常見甲基硫菌靈以及多菌靈等農(nóng)藥殘留量，并且檢測流程較為簡單，不會對外界環(huán)境造成二次污染，可以進一步完善食品檢測工作。

參考文獻

[1] 黃武，章晶晶，劉輝，孫良娟，孫艷波，龐曉林.QuEChERS結(jié)合在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速檢測水產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2016，7（02）：746-754.

[2]劉培，李偉，武寒梅，謝圓豐.蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中提取溶劑的優(yōu)化試驗[J].現(xiàn)代農(nóng)村科技，2015（14）：59-60.

[3]趙紅霞.超高效液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QqQ-MS/MS）對農(nóng)作物中農(nóng)藥多殘留的檢測研究[D].濟南：山東大學(xué)，2013.

作者簡介：

崔曉麗（1980-），女。本科，農(nóng)藝師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。