微藻油脂含量的高效測(cè)定方法

李志 周秋香 黎秋玲 劉孟熒 周智友 李漢廣

（1. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院 江西農(nóng)業(yè)微生物資源開發(fā)與利用工程實(shí)驗(yàn)室/江西省菌物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌330045；2. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)醫(yī)院，南昌 330045）

隨著世界人口的快速增長(zhǎng)以及工業(yè)化水平的不斷提高，傳統(tǒng)化石能源的逐年消耗對(duì)人類社會(huì)的發(fā)展構(gòu)成了嚴(yán)重威脅［1］；而且傳統(tǒng)化石能源是一種不可再生資源，其已探明的儲(chǔ)量有限，因此世界各國(guó)對(duì)于可持續(xù)綠色能源的需求也日益增加［2-4］。生物柴油因其可持續(xù)再生而備受關(guān)注［5］。生物柴油是一種由動(dòng)物脂肪和植物油轉(zhuǎn)制加工而成的綠色燃料。微藻因其具有光合效率高、生長(zhǎng)速度快以及總脂含量較高等優(yōu)點(diǎn)而被公認(rèn)為是生物柴油制造原料的一種極佳選擇［6］。優(yōu)良的藻種是提高微藻生物柴油生產(chǎn)性能的重要保障［7］，因此建立一種簡(jiǎn)便、高效、快速的總脂含量測(cè)定方法對(duì)高總脂含量藻種的高通量篩選以及微藻高密度培養(yǎng)就顯得尤為重要［8］。目前可查閱的文獻(xiàn)中有很多關(guān)于微藻總脂含量的測(cè)定［8-9］，但在已開展的測(cè)定方法中傳統(tǒng)的方法諸如重量法、有機(jī)溶劑提取法等，雖然能較為準(zhǔn)確地測(cè)量出油脂含量，但均需先將細(xì)胞中的油脂提取出來(lái)，此過(guò)程費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不利于實(shí)際生產(chǎn)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多更為高效的方法正得到廣泛的關(guān)注，這些方法不需要對(duì)油脂進(jìn)行提取，測(cè)量簡(jiǎn)便，而且可以進(jìn)行快速、高效的測(cè)定。本文將從化學(xué)和物理方法兩方面簡(jiǎn)要概述近年來(lái)廣泛開展的微藻油脂測(cè)定方法的基本原理，并對(duì)其各自的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行比較，以期為廣大研究者提供一定價(jià)值的參考。

1 化學(xué)測(cè)定方法

1.1 尼羅紅熒光光譜法

尼羅紅（9-diethylamino-5H-benzo［α］phenoxazine-5-one）是一種脂溶性的熒光染料，它經(jīng)常用于測(cè)定不同微生物的脂類含量。尼羅紅極易溶于有機(jī)溶劑且在有機(jī)溶劑中具有很強(qiáng)的熒光特性，它可以進(jìn)入微藻細(xì)胞內(nèi)與脂類（尤其是中性脂）結(jié)合，通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)到它在特定波長(zhǎng)激發(fā)下發(fā)出的熒光檢測(cè)信號(hào)［10］，并以此來(lái)計(jì)算細(xì)胞內(nèi)中性脂含量。其熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)的中性脂含量呈線性關(guān)系［11］，因此可以構(gòu)建油脂含量和熒光強(qiáng)度的回歸方程，由此來(lái)測(cè)定微藻細(xì)胞的油脂含量。曹素娟等［12］為探究快速高通量測(cè)定三角褐指藻油脂含量的方法，通過(guò)對(duì)三角褐指藻的油脂含量（x）與熒光強(qiáng)度（y）進(jìn)行回歸分析發(fā)現(xiàn)，兩者相關(guān)性較好（R2= 0.925），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明可以利用尼羅紅熒光光譜法測(cè)定三角褐指藻的油脂含量，且與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑提取法相比，尼羅紅熒光光譜法具有無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破壞、所需樣品量少、測(cè)定速率快、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)［13］。叢峰等［14］對(duì)幾種小球藻油脂含量檢測(cè)方法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示，尼羅紅熒光光譜法對(duì)濕藻粉所測(cè)得的油脂含量為12.5 ± 0.921%，其結(jié)果與其他測(cè)定方法所得結(jié)果基本一致。

然而，尼羅紅熒光光譜法在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也存在一些不足之處，比如，此法對(duì)細(xì)胞壁較厚的微藻測(cè)定效果較差，測(cè)定結(jié)果易受尼羅紅或藻液濃度大小的影響甚至染色時(shí)間和溫度也會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果造成干擾。所以許多研究者在使用此法進(jìn)行微藻油脂含量測(cè)定之前，大多都會(huì)對(duì)其染色條件進(jìn)行優(yōu)化，以此來(lái)增加細(xì)胞壁或細(xì)胞膜的通透性從而提高染色效率。Chen 等［15］在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)對(duì)染色條件進(jìn)行優(yōu)化來(lái)測(cè)定微藻油脂含量，與優(yōu)化前的方法比較，優(yōu)化后的測(cè)定結(jié)果與重量法測(cè)定結(jié)果相關(guān)性很高（R2=0.998）。其優(yōu)化后的條件為：20%DMSO（V/V），尼羅紅染料濃度為0.5 μg/mL，染色10 min，激發(fā)波長(zhǎng)為530 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為575 nm。Storms 等［16］為測(cè)定小球藻中中性油脂的含量，對(duì)染色條件進(jìn)行優(yōu)化，首先利用乙醇作為溶劑，并且在測(cè)定熒光強(qiáng)度的過(guò)程中借助96 孔板增加樣本的容量，結(jié)果顯示，所測(cè)的熒光強(qiáng)度和小球藻油脂含量具有很強(qiáng)的相關(guān)性。雖然優(yōu)化后尼羅紅熒光光譜法能夠有一個(gè)較好的測(cè)定結(jié)果，但由于尼羅紅自身的光譜特性對(duì)環(huán)境極性較為敏感，在一定程度上限制了其使用。

1.2 BODIPY 505/515熒光染色法

氟硼熒又稱氟化硼絡(luò)合二吡咯甲川類化合物，（Boron-dipyrromethene，BODIPY 505/515），也 是一種脂溶性的熒光染料，能夠?qū)罴?xì)胞內(nèi)油滴進(jìn)行染色，在激發(fā)光照射下會(huì)產(chǎn)生綠色熒光，通過(guò)對(duì)其熒光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)進(jìn)而對(duì)細(xì)胞油脂含量進(jìn)行測(cè)定。BODIPY 505/515 相較于尼羅紅而言，其滲透性與穩(wěn)定性更好，即使在光照條件下也不易光解，而且其放射光譜較窄，有利于共焦成像，更利于實(shí)驗(yàn)觀察［17］。Koreivien?［18］對(duì) 尼 羅 紅和BODIPY 505/515兩者在微藻油脂含量測(cè)定方面的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了比較，表明BODIPY 505/515 對(duì)微藻進(jìn)行染色后，其熒光更穩(wěn)定，染色速率更快，染色受細(xì)胞壁的厚度影響更小，而且對(duì)于中性脂肪酸的選擇性也強(qiáng)于尼羅紅。Rumin等［19］討論了尼羅紅和BODIPY 505/515 兩者在諸如光譜特性、染料濃度、細(xì)胞濃度、染色溫度和培養(yǎng)溫度等方面的區(qū)別發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是尼羅紅或BODIPY 505/515 對(duì)油脂的測(cè)定相較于傳統(tǒng)的重量法，均具有十分顯著的優(yōu)點(diǎn)。但在實(shí)際應(yīng)用中，它們的測(cè)定結(jié)果依舊會(huì)受到諸如染色時(shí)長(zhǎng)、溶劑種類等因素影響，因此如何減少這些因素的影響，還有待進(jìn)一步的研究。

1.3 銅試劑法

最初銅試劑法是用來(lái)測(cè)定少量銅離子的方法，此法中所用的銅試劑為二乙基二硫代氨基甲酸鈉［Sodium diethyldithiocarbamate，（C2H5）2NCSSNa·3H2O］。銅試劑作用原理是因?yàn)樗膳c銅離子在堿性溶液中發(fā)生顏色反應(yīng)，生成黃棕色絡(luò)合物，通過(guò)氯仿對(duì)此絡(luò)合物進(jìn)行萃取，然后在440 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其OD 值，從而獲得銅離子含量［20］。Wawrik 等［21］在此原理基礎(chǔ)上，并結(jié)合氯仿測(cè)定脂肪酸的技術(shù)，建立了一種利用銅試劑來(lái)測(cè)定微藻總脂含量的方法；該方法的具體測(cè)定過(guò)程如下：首先將微藻油脂皂化，隨后將銅試劑加入到皂化后的溶液中，待成鹽后，再用含二乙基二硫代氨基甲酸鈉的氯仿進(jìn)行萃取，皂化物在遇到二乙基二硫代氨基甲酸鈉后會(huì)發(fā)生顏色反應(yīng)，變成黃棕色，其在440 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收，通過(guò)測(cè)量440 nm 波長(zhǎng)處的OD 值，從而獲得微藻的油脂含量。作者通過(guò)對(duì)小球藻和三角褐指藻細(xì)胞內(nèi)的油脂進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得出其產(chǎn)率分別為12.0 ± 0.56%、9.40 ± 1.77%。與傳統(tǒng)油脂測(cè)定方法相比，銅試劑法所需樣品量少，且具有耗時(shí)短（可以在2 h 內(nèi)完成大約30 個(gè)樣品的測(cè)定）、靈敏度很高、成本低（每次測(cè)定成本不足5 美元）等優(yōu)點(diǎn)，因此，此種方法不失為一種理想的微藻油脂測(cè)定方法。但在研究過(guò)程中，作者通過(guò)對(duì)各個(gè)脂肪酸的摩爾消光系數(shù)進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，銅試劑法會(huì)因?yàn)椴伙柡椭舅峄蛘呦嚓P(guān)化學(xué)修飾（酮基和氨基酸結(jié)構(gòu)）的影響而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低［21］。同時(shí)，值得注意的是，目前關(guān)于此法測(cè)定其他藻種油脂含量的報(bào)道相對(duì)也較少，因此此種方法測(cè)定不同藻種油脂含量的有效性還需大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步論證。

1.4 蘇丹黑B染色法

蘇丹黑B 是一種脂溶性的染色劑，它不僅價(jià)格低廉而且毒性非常微弱，能夠與脂質(zhì)特別是中性脂相結(jié)合而形成黑色或黑藍(lán)色絡(luò)合物，在645 nm 波長(zhǎng)處下有最大吸收峰，此吸收值的大小與細(xì)胞總脂含量呈顯著線性相關(guān)，因此通過(guò)測(cè)定細(xì)胞經(jīng)染色后的吸光值A(chǔ)645，再將其代入相應(yīng)的線性方程中，即可計(jì)算出細(xì)胞內(nèi)油脂含量，因此蘇丹黑B 被廣泛地用于真菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的油脂含量的檢測(cè)［22-23］。Ren 等［24］通過(guò)蘇丹黑B 染色法對(duì)不同生理狀態(tài)的小球藻細(xì)胞的油脂含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，經(jīng)蘇丹黑B 染色后所得的吸光度值與油脂含量呈極顯著相關(guān)（P＜ 0.001），表明蘇丹黑B 染色法用于微藻油脂含量測(cè)定的可行性。金雪潔等［25］以兩株淡水小球藻為研究對(duì)象，對(duì)蘇丹黑B 染色法進(jìn)行優(yōu)化來(lái)提高染色效果，結(jié)果表明，微藻細(xì)胞的油脂含量與吸光值存在良好的線性關(guān)系，測(cè)得的油脂含量與傳統(tǒng)方法測(cè)得的結(jié)果非常接近，表明蘇丹黑B 染色法對(duì)微藻油脂含量測(cè)定切實(shí)可行。彭悅等［26］采用此法對(duì)球等金鞭藻和小新菱形藻的油脂含量以及油脂積累過(guò)程油脂含量的快速檢測(cè)進(jìn)行了探究，結(jié)果表明，蘇丹黑B 染色法不僅對(duì)微藻油脂的含量檢測(cè)具有較高的準(zhǔn)確度，而且能快速頻繁地對(duì)油脂含量進(jìn)行測(cè)定。雖然蘇丹黑B 染色法在微藻油脂含量測(cè)定中有廣泛的應(yīng)用，但蘇丹黑B 染色法本身也存在一定的局限性，即當(dāng)樣品濃度過(guò)高或樣品不夠均勻時(shí)，蘇丹黑B 染色法的檢測(cè)效果就不夠理想，同時(shí)蘇丹黑B 染色后脂滴呈現(xiàn)藍(lán)黑色觀察起來(lái)會(huì)有誤差，并且蘇丹黑B 染色法只能測(cè)定油脂的相對(duì)含量［27］。因此，如何減少自身熒光的干擾將是促進(jìn)此法發(fā)展的關(guān)鍵。

2 物理測(cè)定方法

2.1 傅里葉變換紅外光譜法

傅里葉變換紅外光譜法（Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)TIR）是微藻油脂含量檢測(cè)的較理想的方法之一。FTIR 法的基本原理是：物質(zhì)會(huì)在紅外光譜的特定區(qū)域內(nèi)產(chǎn)生伸縮振動(dòng)，形成特定的吸收峰，而后在干涉儀的作用下形成的干涉光會(huì)與微藻油脂作用形成干涉信號(hào)，再對(duì)這些信號(hào)進(jìn)行傅里葉變換，形成相關(guān)的光譜圖，通過(guò)對(duì)光譜圖中相關(guān)吸收峰的位置和形狀等信息進(jìn)行分析，從而對(duì)物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定［28］。FTIR 法具有是高效、快速、所需樣品量少、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)［28］。Giordano 等［29］通過(guò)FTIR 法測(cè)定在氮濃度變化過(guò)程中牟氏角毛藻細(xì)胞內(nèi)總脂、蛋白質(zhì)和碳水化合物等的變化，結(jié)果表明FTIR 法不僅對(duì)于總脂含量的測(cè)定很有效果，而且對(duì)于測(cè)定單細(xì)胞生物成分也十分可靠。Jyoti 等［30］通過(guò)此法對(duì)不同地區(qū)的藻種細(xì)胞內(nèi)的油脂、蛋白質(zhì)以及碳水化合物進(jìn)行測(cè)定，也得出了與Giordano 等一致的結(jié)論。Dean 等［31］利用此法對(duì)兩種淡水藻進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)脂類和碳水化合物的含量進(jìn)行測(cè)定，得出的結(jié)果表明，F(xiàn)TIR 法不僅是一種高效快速測(cè)定油脂的方法，也是測(cè)量其他組分的高效方法。陳小妹等［32］通過(guò)FTIR 法對(duì)在不同氮濃度條件下的產(chǎn)油微藻細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、總脂和碳水化合物等相關(guān)生化組分進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示最終總脂含量在低氮組達(dá)到最高（為66.1%），蛋白質(zhì)和碳水化合物在高氮組達(dá)到最高，分別為13.05 g/L 和23.36 g/L，與傳統(tǒng)方法測(cè)得的結(jié)果都呈現(xiàn)了很好的相關(guān)性上述實(shí)驗(yàn) 表 明FTIR 法不僅是一種有效測(cè)定微藻細(xì)胞內(nèi)總脂含量的方法，還是一種測(cè)定細(xì)胞內(nèi)生化組分的可靠的方法。但Jyoti 等［30］研究顯示重量法作為一種絕對(duì)定量的油脂測(cè)量方法，其測(cè)定結(jié)果可以做到絕對(duì)定量且較FTIR 法更高，更準(zhǔn)確，也從側(cè)面說(shuō)明FTIR 法存在著一定的不足。從上述各項(xiàng)研究表明盡管FTIR 法是一種十分高效、無(wú)損的油脂測(cè)定方法，但因其測(cè)定的是微藻中油脂的相對(duì)含量，同時(shí)測(cè)定值也相對(duì)偏小，且測(cè)定設(shè)備價(jià)格較為昂貴等，從而限制了此法在微藻油含量測(cè)定中的應(yīng)用。

2.2 時(shí)域核磁共振法

時(shí)域核磁共振技術(shù)（Time-Domain nuclear magnetic resonance，TD-NMR）作為一種方便的物質(zhì)測(cè)定方法，其在微藻生物柴油領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用［33］。TD-NMR 是通過(guò)脈沖將一段高能量的射頻信號(hào)施加到樣品上，在靜磁場(chǎng)中樣品的氫原子核發(fā)生能級(jí)躍遷，在一定時(shí)間內(nèi)氫原子核從激發(fā)態(tài)恢復(fù)到平衡狀態(tài)（此過(guò)程稱為弛豫過(guò)程，它所需時(shí)間稱為弛豫時(shí)間）并同時(shí)產(chǎn)生衰減信號(hào)，根據(jù)衰減信號(hào)的強(qiáng)度和信號(hào)衰減速率，可以區(qū)分脂質(zhì)和其他氫核信號(hào)，并且以此測(cè)量脂質(zhì)含量，更通俗而言就是根據(jù)氫質(zhì)子在不同物質(zhì)中弛豫時(shí)間不同來(lái)測(cè)量油脂含量［34］。Gao 等［35］分別用TD-NMR 和尼羅紅熒光光譜法對(duì)原殼小球藻的總脂含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，這兩種方法均切實(shí)可行，且與常用的重量法相比更為簡(jiǎn)單，而且核磁共振法實(shí)驗(yàn)結(jié)果與重量法實(shí)驗(yàn)結(jié)果擬合的R2為0.997，因此作者認(rèn)為TD-NMR法是一種準(zhǔn)確、快速測(cè)量微藻油脂含量的方法。劉婷婷等［36］利用TD-NMR 法，建立了一種直接測(cè)定微藻干藻粉和培養(yǎng)基中小球藻油脂含量的方法，其信號(hào)強(qiáng)度和油脂含量存在線性關(guān)系，無(wú)論是干藻粉還是藻液，它們油脂含量與信號(hào)強(qiáng)度擬合后的R2均高于0.99，具體分別為0.997 和0.998。上述研究結(jié)果表明該方法對(duì)于微藻油脂含量檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可行性，但因TD-NMR 技術(shù)靈敏度的原因，此法仍需要較大的生物量才能準(zhǔn)確地檢測(cè)出油脂含量，不過(guò)相較于傳統(tǒng)的油脂測(cè)定方法而言，TD-NMR 法具有準(zhǔn)確、快速、無(wú)損、重現(xiàn)性高、無(wú)需提取油脂等優(yōu)點(diǎn)。因此，其在油脂測(cè)量方面將具有美好的應(yīng)用前景。

2.3 可見/近紅外光譜法

可見/近紅外（Vis/Near infrared spectrum instrument，NIRS）光譜技術(shù)是利用分子振動(dòng)從基態(tài)向高能級(jí)躍遷產(chǎn)生的譜線進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)?？梢?近紅外光譜技術(shù)可以檢測(cè)特定波長(zhǎng)處的光譜信息，根據(jù)光譜的特征，并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法就可以對(duì)樣品進(jìn)行定量或定性的分析［37］。魏萱等［38］采用NIRS 技術(shù)獲取了不同光源培養(yǎng)條件下的小球藻生長(zhǎng)過(guò)程中油脂動(dòng)態(tài)變化和油脂含量分布的光譜信息，通過(guò)與干重法獲取的油脂含量建立多元線性回歸預(yù)測(cè)模型，預(yù)測(cè)的相關(guān)系數(shù)R2達(dá)到0.940，表明NIRS 技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微藻內(nèi)油脂含量的快速無(wú)損檢測(cè)。Brown 等［39］借助NIRS 技術(shù)對(duì)產(chǎn)油微藻的油脂含量以及生物量進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)這些物質(zhì)的信息進(jìn)行整合，開發(fā)了用于檢測(cè)總生物量和油脂含量的模型，對(duì)于一些藻種油脂含量的檢測(cè)，模型都給出了很好的檢測(cè)效果（R2≥ 0.960），而且Brown 在研究中還發(fā)現(xiàn)，此法可以進(jìn)行快速的油脂檢測(cè)，每天檢測(cè)的樣品可多達(dá)200 余份，說(shuō)明此法作為微藻油脂檢測(cè)的高效性。但由于此法在微藻油脂測(cè)定方面的應(yīng)用還處在發(fā)展階段，在檢測(cè)過(guò)程中，需要大量的樣品及工作量來(lái)建立數(shù)據(jù)庫(kù)，因此要完善此法的實(shí)際使用，還需要微藻研究者之間相互合作、數(shù)據(jù)共享，建立一個(gè)更為全面的圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，以完善此法的實(shí)際應(yīng)用。

3 總結(jié)與展望

由于微藻生物柴油具有可持續(xù)、高產(chǎn)油率、低能耗等諸多優(yōu)勢(shì)，微藻生物質(zhì)柴油已經(jīng)成為生物能源研究中的熱點(diǎn)方向之一。建立一種高效、準(zhǔn)確的微藻油脂測(cè)定方法對(duì)于快速篩選出高油脂含量藻株，以及對(duì)微藻培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化以提高其產(chǎn)油能力是實(shí)現(xiàn)微藻生物質(zhì)柴油能源化利用的關(guān)鍵。高效快速的油脂含量測(cè)定方法可以有效解決傳統(tǒng)微藻油脂含量測(cè)定方法過(guò)程中效率低、耗時(shí)長(zhǎng)、步驟繁雜、污染大等問(wèn)題。本文以目前微藻篩選及培養(yǎng)過(guò)程中幾種常見的高效快速的測(cè)定方法為例，介紹了其測(cè)定微藻油脂含量的基本原理以及具體的實(shí)際應(yīng)用，同時(shí)對(duì)各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)、準(zhǔn)確性、適用性等進(jìn)行了比較。

從表1 可知，無(wú)論是化學(xué)方法或是物理方法都各有優(yōu)劣，化學(xué)法多要借助熒光染料或?qū)Ｓ玫幕瘜W(xué)試劑，物理法則需要借助相應(yīng)的儀器；化學(xué)法因無(wú)需購(gòu)買昂貴的儀器測(cè)定所需總體成本相對(duì)物理法更低，但物理法卻可以借助儀器實(shí)現(xiàn)更高效更快速的實(shí)驗(yàn)；而與傳統(tǒng)的油脂測(cè)定方法相比，這些測(cè)定方法具有步驟簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、測(cè)定快速等優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際應(yīng)用中，還存在一些問(wèn)題。例如，尼羅紅等熒光染料在水溶液中的穩(wěn)定性、紅外光譜檢測(cè)結(jié)果的可重復(fù)性問(wèn)題，上述問(wèn)題也是未來(lái)有關(guān)優(yōu)化微藻油脂快速測(cè)定的方向和重點(diǎn)。針對(duì)這些問(wèn)題研究者可以通過(guò)對(duì)染料本身進(jìn)行改性，在不改變其自身的光學(xué)性質(zhì)情況下，增強(qiáng)其穩(wěn)定性，同時(shí)減少熒光淬滅；此外，可以通過(guò)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法解決紅外光譜檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性問(wèn)題。然而在實(shí)際操作中，即使對(duì)單一測(cè)定方法進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，仍然會(huì)存在一定的局限性。因此，若未來(lái)在微藻油脂的高通量測(cè)定過(guò)程中能在優(yōu)化的基礎(chǔ)上再通過(guò)與多種方法相結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，以滿足不同實(shí)驗(yàn)過(guò)程的測(cè)定需求，從而建立起一套快速、科學(xué)、高效的微藻油脂高通量測(cè)定方法，以加快高油脂含量微藻藻株的選育過(guò)程及提高微藻生物柴油的生產(chǎn)性能，微藻生物柴油工業(yè)將具有廣泛的應(yīng)用前景。

表1 本文所介紹方法的優(yōu)缺點(diǎn)、準(zhǔn)確性及適用范圍比較