精烏顆粒薄層鑒別方法

李哲 李菲 郭華靜 高杰 郝娟娟 劉鐵軍

【摘?要】目的：改進(jìn)精烏顆粒的薄層鑒別方法，完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：優(yōu)化精烏顆粒中何首烏、黃精的樣品處理方法及展開條件，同時(shí)建立女貞子、墨旱蓮的薄層鑒別方法。結(jié)果：改進(jìn)后何首烏，黃精鑒別方法及新建的女貞子，墨旱蓮薄層鑒別方法顯示在與對照品或?qū)φ账幉南鄬?yīng)的位置，供試品顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)或斑點(diǎn)，且陰性樣品無相對應(yīng)的斑點(diǎn)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立的薄層鑒別方法操作簡便、重現(xiàn)性好，專屬性高，可更全面的評價(jià)精烏顆粒的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】精烏顆粒;薄層鑒別;優(yōu)化

【中圖分類號】R282.5?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A?【文章編號】1007-8517（2019）19-0030-04

Abstract：Objective To improve the quality standard of Jingwu Granule.Methods The identification method of Polygonum multijiorum andRhizoma Polygonati in Jingwu granule was optimized by TLC， At the same time， establish the method of Ligustrum Lucidum Ait. and Ecliptae prostrate L. Results The results of the method showed that in the relative positions of the control，the samples showed the same color spots without interference. Conclusion The method was simple with good specificity and reproducibility，which could improve the quality control of .Jingwu Granule.

Key?words：Jingwu Granule; TLC;Improvement

精烏顆粒收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，由黃精（制）、制何首烏、女貞子（制）、墨旱蓮4味飲片制成[1]，可補(bǔ)肝腎，益精血，壯筋骨，臨床應(yīng)用于失眠多夢，耳鳴健忘，頭發(fā)脫落及須發(fā)早白等證[2]。精烏顆粒原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊WS3-B-3012-98）鑒別一以大黃素對照品進(jìn)行薄層色譜考察，結(jié)果大黃素Rf值大，且展開劑含有毒性較大的試劑苯，苯對人體的危害巨大，有必要對展開劑進(jìn)行改進(jìn);鑒別二為黃精藥材薄層鑒別，樣品展開后拖尾嚴(yán)重，影響結(jié)果判定。為完善精烏顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，我們對何首烏、黃精的樣品處理方法及展開條件進(jìn)行進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)建立墨旱蓮、女貞子的薄層定性鑒別方法。

1?儀器與材料

1.1?儀器?CPA225D分析天平（賽多利斯）、JM-A5002電子天平（余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）、加熱套（北京科偉永興儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）。

1.2?材料?何首烏（批號：120934-201410）、女貞子（批號：121041-201404）、黃精（制）（批號：121553-201202）、墨旱蓮（批號：120958-201708）、大黃素（批號：110756-201512）等對照藥材及對照品均為中國藥品生物制品檢定所提供。精烏顆粒（批號：1902131、1902132、1902133，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司）。乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、甲酸、石油醚（60～90 ℃）均為分析純。

2?方法與結(jié)果

2.1?何首烏的薄層鑒別

2.1.1?原標(biāo)準(zhǔn)存在問題?該方法展開后大黃素的Rf值太大，斑點(diǎn)在溶劑前沿，不易判定結(jié)果，結(jié)果見圖1。

2.1.2?何首烏鑒別方法優(yōu)化

2.1.2.1?供試品制備方法改進(jìn)?由于制成的顆粒為無糖顆粒，樣品中不含蔗糖粉，將提取溶劑由乙酸乙酯改成乙醇，其他處理方法不變。

2.1.2.2?展開劑摸索?采用三氯甲烷-甲醇（7∶3），展距為3.5 cm，取出晾干，再以三氯甲烷-甲醇（20∶1）重新展開7.5 cm[3]。此方法何首烏的分離度低，重復(fù)性低，操作繁瑣，需要的展開條件嚴(yán)格。其次采用石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑 [4]。結(jié)果何首烏的斑點(diǎn)分離度低，雖然進(jìn)行了分層，但是展開過程中仍然有分層現(xiàn)象;最后以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶1∶0.1）展開。結(jié)果何首烏分離度好，斑點(diǎn)清晰，比移值合適。

2.1.3?改進(jìn)前后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對比?改進(jìn)后質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在與對照藥材和對照品相對應(yīng)的位置，供試品顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性對照在相對應(yīng)位置無干擾。結(jié)果見表1、圖2。

2.2?黃精的薄層鑒別

2.2.1?原標(biāo)準(zhǔn)中存在問題?由于樣品中輔料蔗糖影響黃精斑點(diǎn)的分離度，致使斑點(diǎn)呈條帶狀，無法判定結(jié)果，結(jié)果見圖3。

2.2.2?黃精鑒別方法優(yōu)化

2.2.2.1?供試品制備方法改進(jìn)?由于樣品中多糖等成分的影響，致使斑點(diǎn)分離度低，因此供試品處理方法增加精制過程，首先將提取后的濾液用水飽和的正丁醇40mL分兩次洗滌，最終正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，結(jié)果黃精斑點(diǎn)顯色清晰。

2.2.2.2?展開劑摸索?首先嘗試石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸-甲醇（5∶4∶1∶1），結(jié)果黃精樣品斑點(diǎn)顯色不清晰，樣品的分離度低。且展開劑出現(xiàn)分層現(xiàn)象，導(dǎo)致斑點(diǎn)錯(cuò)亂，將展開劑進(jìn)行分層之后重新展開，薄層板出現(xiàn)分層現(xiàn)象，所顯示的斑點(diǎn)依然不明顯。其次考察展開劑石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲醇（5∶4∶1），結(jié)果顯色后黃精斑點(diǎn)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象;將該展開劑中甲醇換成甲酸，其他條件不變，結(jié)果黃精的Rf值太大，且出現(xiàn)分層現(xiàn)象。將石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、甲酸的比例調(diào)整為5∶2∶0.1[5]，結(jié)果樣品分離度好，斑點(diǎn)清晰，但黃精Rf值太小;最終將三者的比例調(diào)整為5∶3∶0.1，結(jié)果黃精的斑點(diǎn)清晰，分離度高。

2.2.3?改進(jìn)前后質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對比?改進(jìn)后質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在與對照藥材相對應(yīng)的位置，供試品顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對照在相對應(yīng)位置無干擾。結(jié)果見表2、圖4。

2.3?墨旱蓮、女貞子鑒別方法摸索

2.3.1?供試品制備方法建立?墨旱蓮、女貞子中有效成分為脂溶性，因此樣品制備過程中先將精烏顆粒加水溶解，過濾后將濾液用乙酸乙酯萃取，揮干溶劑，殘?jiān)謩e用無水乙醇-三氯甲烷（3∶2）、甲醇1mL溶解，結(jié)果甲醇溶解效果較好。

2.3.2?墨旱蓮鑒別展開條件摸索?以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶2∶2∶0.5）的上層溶液展開，結(jié)果墨旱蓮的分離度低，而且出現(xiàn)分層現(xiàn)象。在做何首烏鑒別時(shí)，發(fā)現(xiàn)墨旱蓮用何首烏的展開劑的分離度較好，所以將墨旱蓮的展開劑改為何首烏的展開劑。結(jié)果墨旱蓮斑點(diǎn)清晰，分離度好，Rf值合適。

2.3.3?女貞子鑒別展開條件摸索?根據(jù)查閱文獻(xiàn)，考察以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）[6]為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，結(jié)果顯色依然不清晰，且斑點(diǎn)分離度低;將展開劑換成三氯甲烷-甲醇-甲酸（40∶1∶1）[7-8]，顯色劑不變，結(jié)果斑點(diǎn)顯色清晰，但比移值太小;以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.1）為展開劑，顯色劑不變，結(jié)果斑點(diǎn)明顯，分離度高。由于在進(jìn)行黃精的鑒別實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)女貞子的顯色更明顯，所以最終顯色劑為5%香草醛的硫酸溶液。

2.3.4?新建墨旱蓮、女貞子薄層鑒別方法?由表3、圖5、圖6可知，墨旱蓮、女貞子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在與對照藥材在相對應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾。

3?討論

3.1?精烏顆粒何首烏的薄層鑒別方法研究?精烏顆粒原標(biāo)準(zhǔn)中大黃素鑒別方法展開劑為苯-乙醇，毒性較大，對人體的危害巨大;同時(shí)大黃素對照品的Rf值太大，斑點(diǎn)在溶劑前沿，不易判定結(jié)果，因此本實(shí)驗(yàn)對供試品溶液處理方法及展開劑進(jìn)行優(yōu)化意義重大，改進(jìn)后的方法以何首烏對照藥材、大黃素對照品同時(shí)作為對照，控制指標(biāo)更全面。樣品的點(diǎn)樣量由10μL減少到1～3μL，操作更簡便快捷;最終確定展開劑為正已烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶1∶0.1），樣品斑點(diǎn)清晰，分離度高，陰性樣品無干擾，該方法可用于何首烏的鑒別。

3.2?精烏顆粒黃精的薄層鑒別方法研究?精烏顆粒原標(biāo)準(zhǔn)中黃精鑒別樣品處理方法簡單，由于輔料蔗糖的影響，展開后斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重，甚至呈條帶狀，首先對樣品處理方法進(jìn)行優(yōu)化，增加正丁醇萃取，由圖3、圖4對比結(jié)果可見，方法改進(jìn)后薄層色譜中各斑點(diǎn)無拖尾現(xiàn)象。其次對展開劑進(jìn)行摸索，分別考察石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸不同比例，最終確定比例為5∶3∶0.1時(shí)，黃精斑點(diǎn)清晰，分離度高，且陰性對照無干擾，該方法可用于黃精的鑒別。

3.3?精烏顆粒墨旱蓮、女貞子的薄層鑒別方法研究?墨旱蓮、女貞子的鑒別采用同一供試品溶液，簡化了操作流程，節(jié)約檢驗(yàn)成本。起初二者采用同一展開劑，結(jié)果與墨旱蓮對照藥材相對應(yīng)斑點(diǎn)的比移值太大，而與女貞子對照藥材相對應(yīng)斑點(diǎn)的比移值太小，二者不能兼顧，經(jīng)過摸索確定墨旱蓮的展開劑同何首烏鑒別方法。女貞子的展開劑為石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.1）。

3.4?薄層鑒別方法耐用性研究?本實(shí)驗(yàn)所建立的精烏顆粒4味飲片薄層鑒別方法均經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，分別對環(huán)境溫濕度及薄層板耐用性進(jìn)行考察，環(huán)境溫濕度包括低溫（2 ℃）、常溫（25 ℃）、高溫高濕（溫度40 ℃，濕度75%）三種條件，薄層板耐用性分別考察煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司預(yù)制G板、青島海洋化工廠分廠預(yù)制G板以及青島海洋化工廠硅膠G自制板三種載體，均得到滿意的分離效果，說明新建的薄層鑒別方法耐用性良好。

綜上，改進(jìn)后精烏顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中何首烏，黃精的薄層鑒別方法以及新建的女貞子、墨旱蓮的薄層鑒別方法操作簡便，重現(xiàn)性好，專屬性高，可更全面的評價(jià)精烏顆粒的質(zhì)量。

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（收稿日期：2019-07-10?編輯：劉斌）