• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    AMG 510只是攻克RAS的一小步(二)

    2019-11-28 02:52:56謝雨禮
    國際人才交流 2019年11期

    文/謝雨禮

    (謝雨禮,畢業(yè)于南開大學(xué)化學(xué)系,取得中國科學(xué)院上海藥物研究所博士學(xué)位,在哥倫比亞大學(xué)從事博士后研究工作。2017年4月,創(chuàng)辦蘇州偶領(lǐng)生物醫(yī)藥有限公司,致力于創(chuàng)新化藥的研究和開發(fā))

    RAS的不可成藥性和藥物開發(fā)的探索

    為什么RAS難以成藥呢?首先,RAS各個(gè)亞型的D-domain高度類似,直接靶向RAS很難達(dá)到高度選擇性。第二,小分子藥物最常見的是抑制酶的活性,但RAS比較特殊,GTP水解酶與其功能反相關(guān),需要開發(fā)酶的激活劑。第三,藥物分子無法與底物競爭,因?yàn)镽AS與GTP的親和力常數(shù)達(dá)到皮摩爾級別,而細(xì)胞中GTP的濃度高達(dá)0.5mM。第四,除了不可逾越的核苷酸口袋,RAS蛋白其他地方缺乏有利于小分子結(jié)合的口袋。第五,RAS的調(diào)控和功能執(zhí)行都是通過蛋白—蛋白的相互作用實(shí)現(xiàn)的,很難通過小分子干預(yù)。這些蛋白相互作用發(fā)生在細(xì)胞膜內(nèi),單抗等大分子難以觸及。

    由于這些原因,制藥界早期將注意力轉(zhuǎn)移到RAS的高度可變區(qū)(HVR)。HVR是RAS用來定位細(xì)胞膜的區(qū)域,末端包含CAAX系列。RAS蛋白合成后,要進(jìn)行一系列修飾才能進(jìn)入細(xì)胞膜。CAAX系列的Cys被異戊烯化后,AAX被轉(zhuǎn)化酶RCE1切除,最后Cys的羧基被甲基轉(zhuǎn)移酶ICMT所甲基化。細(xì)胞膜定位對于RAS的功能至關(guān)重要,其調(diào)節(jié)蛋白如GEFs,GAPs以及各種效應(yīng)蛋白都依賴細(xì)胞膜移位進(jìn)行調(diào)控。讓人沒想到的是,抑制RCE1和ICMT有時(shí)反而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生,原因還不太清楚。其實(shí),抑制RAS通路的某個(gè)環(huán)節(jié)造成反向激活還比較常見,比如Raf和MEK抑制劑中都發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象,這也是RAS藥物開發(fā)的一個(gè)難點(diǎn)。

    開發(fā)RAS異戊烯化抑制劑的探索就要曲折得多。早在1989年,美國西南醫(yī)學(xué)中心的科學(xué)家就發(fā)現(xiàn)法尼基轉(zhuǎn)移酶(FT)介導(dǎo)的異戊烯化是RAS活性所必需的。FT抑制劑對RAS變異腫瘤有效且安全性可接受?;谶@些研究,F(xiàn)T抑制劑被推上了臨床,但臨床結(jié)果不理想,對于占大多數(shù)的KRAS和NRAS病人無效?;仡^分析,這里有一個(gè)“坑”當(dāng)時(shí)被忽視了。前面提到,HRAS是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的RAS腫瘤基因,F(xiàn)T抑制劑早期工作都是基于HRAS突變展開的。不幸的是,RAS亞型的異戊烯化有所差異。FT被抑制后,KRAS和NRAS能夠通過GGTase1異戊烯化所彌補(bǔ),而HRAS卻不能。這樣,F(xiàn)T和GGTase1抑制劑聯(lián)用才能有效抑制KRAS和NRAS突變的腫瘤,但也容易產(chǎn)生不可耐受的毒副反應(yīng)。目前,F(xiàn)T抑制劑用于HRAS突變的病人仍在進(jìn)行臨床研究。今年9月,Kura公布了FT抑制劑tipifarnib的一個(gè)臨床結(jié)果:在13名攜帶HRAS突變的難治或是復(fù)發(fā)的膀胱癌病人中,ORR達(dá)到38%。異戊烯結(jié)合蛋白PDEδ是RAS細(xì)胞內(nèi)外膜之間穿梭運(yùn)輸?shù)闹匾閭H蛋白。2013年,德國馬克斯—普朗克研究所的科學(xué)家報(bào)道了第一個(gè)KRASPDEδ蛋白相互作用的小分子抑制劑Deltrasin,隨后又報(bào)道了毒性更小的Deltazinone,這些化合物可以有效抑制KRAS驅(qū)動(dòng)的胰腺癌。這一靶點(diǎn)迅速成為RAS藥物研究的熱點(diǎn),但還未有臨床研究數(shù)據(jù)報(bào)道。

    干預(yù)RAS細(xì)胞膜定位的藥物開發(fā)至少目前來看還不算成功。近年來,隨著共價(jià)、變構(gòu)、蛋白蛋白相互作用、PROTAC等小分子新技術(shù)的發(fā)展,RAS直接抑制劑又回到了人們的視野。1997年,Schering-Plough報(bào)道了第一個(gè)直接抑制RAS的小分子化合物。此后,大量RAS抑制劑被相繼報(bào)道,包括合成小分子、天然產(chǎn)物和多肽模擬分子,這些分子主要靶向RAS核苷酸交換,RAS-SOS和RAS-Raf相互作用等。還有Sulindac和Rigosertib等老藥或臨床化合物也發(fā)現(xiàn)直接作用于RAS。這些早期工作中,最受關(guān)注的是RAS-SOS抑制劑。SOS是最常見的GEF,如前所述,抑制GEF干擾GTP的結(jié)合?;蛱┛?012年報(bào)道了通過NMR技術(shù)和Fragment-based技術(shù)發(fā)現(xiàn)的RAS-SOS小分子抑制劑DCAI,但這些化合物活性不高,而且隨后的研究發(fā)現(xiàn)RAS-SOS抑制劑也存在負(fù)反饋激活的問題。2019年,Bayer報(bào)道了一類通過雙向篩選獲得的KRAS G12C-SOS1抑制劑,穩(wěn)定KRAS-SOS1復(fù)合物同時(shí)抑制SOS1活性,活性達(dá)到納摩爾級別,且可以與G12C抑制劑聯(lián)用。

    KRAS G12C抑制劑的開發(fā)

    早期報(bào)道的RAS抑制劑由于各種原因,都沒有繼續(xù)開發(fā),這也是RAS得到“不可成藥”這個(gè)名聲的主要原因。精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)興起后,藥物開發(fā)更加強(qiáng)調(diào)靶向腫瘤細(xì)胞特有的變異。RAS具有重要的生理功能,KRAS生殖突變的老鼠不能成活。RAS調(diào)節(jié)因子變異造成一組統(tǒng)稱為RASopathy的罕見病,僅NF1(GAP蛋白)變異,全球就超過10萬名病人。因此,避開正常細(xì)胞,特異性靶向腫瘤細(xì)胞RAS變異可能帶來較少的副作用。然而,前面提到RAS變異主要是G12、G13和Q61三個(gè)位點(diǎn),可逆競爭性的小分子藥物要區(qū)分野生型和變異蛋白的結(jié)合口袋非常困難,更別提RAS蛋白上就沒有什么適合小分子結(jié)合的口袋。EGFR和BTK等基于半胱氨酸(Cys)共價(jià)結(jié)合的不可逆抑制劑的成功,讓KRAS G12C脫穎而出成為RAS變異的理想靶點(diǎn)。首先,G12C是第三大常見的RAS變異,特別是在非小細(xì)胞肺癌和腸癌中排在第一位,每年新發(fā)G12C腫瘤病人接近3萬人;其次,變異產(chǎn)生的Cys可以成為不可逆抑制劑進(jìn)攻的目標(biāo),減少對結(jié)合口袋的依賴;再次,Cys不可逆抑制劑已經(jīng)證明可以獲得相對較高的特異性;最后,G12C位于SWI、SWII以及P-loop三方交界的區(qū)域,抑制G12C可能對RAS構(gòu)象和活性產(chǎn)生重要影響。2013年UCSF的Shokat實(shí)驗(yàn)室在Nature上報(bào)道了通過“Tethering”技術(shù)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)G12C抑制劑?!癟ethering”技術(shù)由同在UCSF的Wells James教授開發(fā),基本原理就是針對含有Cys的靶點(diǎn),利用雙硫鍵的小分子碎片庫進(jìn)行篩選。雙硫鍵與Cys的巰基發(fā)生交換后,小分子碎片就會(huì)通過Cys連接在蛋白上。這些懸掛在蛋白上的碎片很容易被隨后的還原處理所清除,而那些在Cys附近找到結(jié)合口袋躲避的碎片就會(huì)生存下來。篩選了480個(gè)雙硫化合物后,Shokat等人找到了兩個(gè)Hits,其中一個(gè)就是6H05。隨后開發(fā)這個(gè)項(xiàng)目的Wellspring公司進(jìn)行了一系列優(yōu)化,得到更為有效的先導(dǎo)化合物ARS-853。詳細(xì)研究發(fā)現(xiàn),這類化合物只能作用于GDP結(jié)合的RAS,化合物與G12C共價(jià)連接在Switch II下面誘導(dǎo)了一個(gè)此前不存在的變構(gòu)口袋S-IIP。這造成了兩個(gè)后果:RAS與GDP的親和力增加,不易轉(zhuǎn)向GTP構(gòu)象;抑制了GEF催化的核苷酸交換。簡單地說,就是將RAS鎖在了非活性狀態(tài)。新的G12C抑制劑在體內(nèi)外腫瘤模型上都展現(xiàn)了很好的劑量關(guān)系和可預(yù)測的在靶活性。

    第一個(gè)KRAS G12C抑制劑的發(fā)現(xiàn)

    對于制藥公司來說,原創(chuàng)研究到此就基本夠了。但細(xì)細(xì)思考,還是有些讓人不解的地方。第一個(gè)就是,腫瘤細(xì)胞中變異的RAS主要以GTP結(jié)合的激活狀態(tài)存在,而這些G12C抑制劑只能靶向GDP結(jié)合的KRAS。第二個(gè)疑問是,共價(jià)抑制劑首先要與靶點(diǎn)有較強(qiáng)的結(jié)合,才能特異地與目標(biāo)位置的Cys快速反應(yīng);而G12C抑制劑與S-IIP口袋結(jié)合比較弱而且是事后誘導(dǎo)的。對于第一個(gè)問題,紐約MSKCC的Neal Rosen教授2016年在Science發(fā)表文章,提出了一個(gè)“Trapping”的作用機(jī)制。他們認(rèn)為KRAS G12C類似于野生型,也存在GTP/GDP循環(huán),因?yàn)镚12C內(nèi)在的GTPase活性并沒有下降。因此,RAS突變不是原來認(rèn)為的一直處于完全鎖死的激活狀態(tài),而是一種在接收刺激信號(hào)后“hyperactive”的狀態(tài)。這樣,G12C抑制劑不斷將RAS蛋白trap在GDP狀態(tài)而消耗GTP結(jié)合的RAS。這實(shí)際上是一個(gè)平衡反應(yīng),因此這類抑制劑需要較長的作用時(shí)間。這個(gè)發(fā)現(xiàn)對G12C抑制劑的臨床應(yīng)用是有重要指導(dǎo)意義的。因?yàn)樗幬锏淖饔檬抢瓌?dòng)一個(gè)平衡反應(yīng),也許需要較大的劑量,對于藥物的安全性要求比較高。另外,RAS突變?nèi)杂蠫TP/GDP循環(huán),也就是仍然受到各種信號(hào)的調(diào)控,這樣為G12C抑制劑與其他藥物,如EGFR抑制劑的聯(lián)用提供了可能。

    對于第二個(gè)問題,2018年Wellspring Biosciences的科學(xué)家發(fā)表了一項(xiàng)詳細(xì)研究。文章認(rèn)為G12C抑制劑與傳統(tǒng)的共價(jià)抑制劑不同,它們與Cys的結(jié)合不是親和力驅(qū)動(dòng)的,而是由化合物與Cys的高反應(yīng)性驅(qū)動(dòng)的。令人費(fèi)解的是,這些化合物以及G12C中的Cys,內(nèi)在的反應(yīng)性都很低,這也是為什么這類化合物的特異性非常好的原因。那問題是,這個(gè)特異的高反應(yīng)性從哪里來的?晶體結(jié)構(gòu)顯示,是因?yàn)镚12C附近的賴氨酸Lys16質(zhì)子化后,可以穩(wěn)定Cys共價(jià)反應(yīng)的過渡態(tài),起到自催化的作用。另外,由于GTP的gamma位磷酸可以干預(yù)Lys16的作用,可能是G12C抑制劑只能作用于GDP結(jié)合的RAS的原因之一。比較有意思的是,基于GDP結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的,以結(jié)合力驅(qū)動(dòng)的G12C共價(jià)抑制劑比如SML-8-73-1系列反而沒有取得理想的效果。這個(gè)案例顯示,一個(gè)非常淺、動(dòng)態(tài)的臨時(shí)誘導(dǎo)的結(jié)合口袋,雖然無法為小分子提供足夠的親和力,也能通過“高反應(yīng)性”驅(qū)動(dòng)的共價(jià)抑制劑有效抑制,這為小分子共價(jià)抑制劑在其他所謂“不可成藥”靶點(diǎn)的應(yīng)用提供了無限的遐想。

    RAS抑制劑巨大的商業(yè)前景,G12C扎實(shí)的基礎(chǔ)研究和有說服力的前期數(shù)據(jù),在制藥界激發(fā)了一股開發(fā)G12C抑制劑的熱潮,幾乎每個(gè)月都有新的專利公開。進(jìn)展最快的就是已經(jīng)公開一期臨床數(shù)據(jù)的安進(jìn),Wellspring和Mirati等公司的產(chǎn)品也已進(jìn)入臨床。其他大公司比如Pfizer、AZ都在跟進(jìn),國內(nèi)的fast-follow也是爭先恐后。

    G12C抑制劑開發(fā)的潛在風(fēng)險(xiǎn)

    KRAS G12C抑制劑的初步成功,無疑是令人興奮的。讓人們重新認(rèn)識(shí)了RAS生物學(xué),發(fā)現(xiàn)RAS突變不是持續(xù)激活,而是“hyperactive”?;瘜W(xué)上展示了小分子共價(jià)抑制劑既可以通過親和力驅(qū)動(dòng),也可以是反應(yīng)性驅(qū)動(dòng),為這類藥物的應(yīng)用拓展了空間。但RAS還有太多的未解之謎和挑戰(zhàn),AMG510的成功只是攻克RAS難題的一小步。即使是G12C抑制劑,還有許多未知的東西,給其開發(fā)前景帶來不確定性。由于化合物作用于平衡反應(yīng),可能需要較大劑量,AMG510效果較好的劑量達(dá)到960mg,這對藥物的安全性要求比較高。另外,腫瘤進(jìn)展各階段的DNA分析發(fā)現(xiàn),KRAS變異在肺腺癌和胰腺癌腫瘤內(nèi)部異質(zhì)性較小,而在肺鱗癌和腸癌中KRAS變異出現(xiàn)較晚,含有KRAS突變的腫瘤細(xì)胞可能只是其中的一個(gè)“亞克隆”。這預(yù)示RAS變異對藥物的敏感度可能與腫瘤類型高度有關(guān)。AMG510目前來看在腸癌中的臨床效果比較差,似乎驗(yàn)證了這些基礎(chǔ)研究的結(jié)果。分子靶向藥物出現(xiàn)耐藥被認(rèn)為是難以避免的。AMG510作為KRAS直接抑制劑,剛開始臨床研究,是不是容易耐藥還難以判斷。不過,安進(jìn)公開的臨床數(shù)據(jù)顯示,在15周時(shí)間內(nèi),11名PR病人已有2名發(fā)生疾病進(jìn)展,其中1人死亡。這也許是為什么AMG510一期數(shù)據(jù)公開后,安進(jìn)的股票沒漲反而是下跌?;A(chǔ)研究給出的信號(hào)也不太好。比如,體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對KRAS變異的依賴程度與細(xì)胞的生長條件高度相關(guān),3D培養(yǎng)的細(xì)胞對G12C抑制劑的敏感程度大于2D培養(yǎng)。這讓人擔(dān)心腫瘤微環(huán)境的調(diào)整即可輕松擺脫對KRAS的依賴。2014年的一篇研究報(bào)告顯示,胰腺癌細(xì)胞通過激活Yap1,可以克服對KRAS依賴。還有就是RAS是否存在二聚或者多聚的情況在學(xué)術(shù)界還有較大爭議,但這也可算作機(jī)制不明確的風(fēng)險(xiǎn)。RAS通路的RAF蛋白就是通過二聚產(chǎn)生抑制劑誘導(dǎo)的反向激活。

    RAS藥物開發(fā)的展望

    首先,考慮靶向其他RAS突變,比如最常見的G12D和G12V。因?yàn)檫@類蛋白缺乏合適的Cys或者其他非天生的可共價(jià)結(jié)合的氨基酸,要取得足夠的活性和選擇性比較困難。BI在今年8月報(bào)道了一個(gè)納摩爾活性的,結(jié)合在Switch區(qū)域的非共價(jià)抑制劑BI-2852。機(jī)制上不同于G12C抑制劑,這個(gè)化合物可以同時(shí)抑制活性和非活性狀態(tài)RAS,且不限于G12C。令人遺憾的是,細(xì)胞測試上活性不高,而且出現(xiàn)了類似于Braf抑制劑的反向激活的老問題。另外,藥物聯(lián)用是克服耐藥和提高療效的一個(gè)常用辦法。臨床前研究表明,KRAS變異對腫瘤免疫療法比較敏感,特別是P53共變異的病人。AMG510與PD-1單抗聯(lián)用的臨床研究即將展開,讓我們拭目以待。KRAS抑制劑與RAS通路上其他藥物的聯(lián)用也值得探索,比如EGFR、Braf、MEK、PI3K,以及SHP2抑制劑等。尋找與RAS變異合成致死的藥物,最近的例子有XPO1抑制劑和鐵死亡誘導(dǎo)劑等。隨著新技術(shù)的發(fā)展,人們也將眼光轉(zhuǎn)向了其他非小分子藥物形式,比如siRNA、細(xì)胞內(nèi)單抗碎片等。用于RAS蛋白降解的PROTAC也有不少專利公開。這些研究都是很好的嘗試,但離真正的臨床應(yīng)用還有很長的路。比較有意思的是,細(xì)胞治療的權(quán)威Rosenberg最近在NEJM上報(bào)道了一例針對KRAS G12D的TIL療法。經(jīng)過G12D特異和HLA-C*8:02等位基因限制的T細(xì)胞治療,一個(gè)50歲的帶有肺轉(zhuǎn)移的女性腸癌患者取得了9個(gè)月的PR。然而,HLA-C*8:02的廣泛性如何還有爭議,有專家認(rèn)為非常罕見。

    在新藥難覓的今天,RAS直接抑制劑的突破,哪怕是一小步,也讓人無比欣慰。中國創(chuàng)新藥這兩年經(jīng)歷了比較大的起伏,向原創(chuàng)新藥轉(zhuǎn)型的呼聲日益高漲。KRAS G12C抑制劑的開發(fā)也許能給我們稍許啟示?;A(chǔ)研究確實(shí)是原創(chuàng)新藥的基礎(chǔ),但能否或多長時(shí)間能導(dǎo)致新藥的發(fā)現(xiàn)卻未可知。RAS從20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn),經(jīng)歷了50多年,其中對其生物學(xué)有貢獻(xiàn)的基礎(chǔ)研究數(shù)以千計(jì),作為一個(gè)潛在的靶點(diǎn)是十分明了的事情,但直到2013年,Shokat實(shí)驗(yàn)室才找到了第一個(gè)具有成藥性的直接抑制劑。Shokat的大膽嘗試很重要,但我認(rèn)為,突破的關(guān)鍵是其UCSF同事Wells James教授開發(fā)的“Tethering”技術(shù)。這個(gè)技術(shù)在2000年發(fā)表后,一直默默無聞,看似沒有什么用處。這說明藥物創(chuàng)新的生態(tài)環(huán)境多么重要,不是單打獨(dú)斗可以實(shí)現(xiàn)的。從商業(yè)的角度看,Shokat幫助建立的Wellspring公司應(yīng)該是原創(chuàng),但是很快被fast-follow的安進(jìn)公司超越,大概率AMG510將成為第一個(gè)上市的G12C抑制劑。所以,在中國新藥研發(fā)轉(zhuǎn)型的關(guān)鍵時(shí)期,各方應(yīng)該靜下心來做自己擅長的事情,無論是基礎(chǔ)研究,仿制還是原創(chuàng),營造藥物創(chuàng)新良好的生態(tài)。真正的原創(chuàng)新藥可能沒有什么路徑,也沒有什么時(shí)間表,事情做好了,就水到渠成了。

    女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 最新在线观看一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲avbb在线观看| 五月天丁香电影| 乱人伦中国视频| 一区福利在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 操出白浆在线播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久久久久人人人人人| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产精品九九99| 亚洲人成电影观看| 老司机福利观看| 精品久久久精品久久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线看a的网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 美女福利国产在线| 韩国精品一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美精品av麻豆av| 欧美成人午夜精品| 国产91精品成人一区二区三区 | 妹子高潮喷水视频| 十八禁网站免费在线| 桃红色精品国产亚洲av| 中文字幕最新亚洲高清| 在线观看66精品国产| 啦啦啦免费观看视频1| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品久久久久久电影网| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 丝瓜视频免费看黄片| 成人免费观看视频高清| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 看免费av毛片| 亚洲全国av大片| 国产一区二区三区综合在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 丝袜在线中文字幕| 岛国毛片在线播放| bbb黄色大片| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久香蕉激情| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品免费一区二区三区在线 | 99久久国产精品久久久| 99精品在免费线老司机午夜| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成年人黄色毛片网站| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲精品乱久久久久久| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 国产成人免费无遮挡视频| 热re99久久国产66热| 午夜福利视频精品| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品久久久久成人av| 9热在线视频观看99| 老司机在亚洲福利影院| 一区二区三区激情视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产一卡二卡三卡精品| 操出白浆在线播放| 国产在视频线精品| 国产高清激情床上av| 中国美女看黄片| 9色porny在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产高清激情床上av| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品.久久久| 国产麻豆69| 9191精品国产免费久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av | 老司机在亚洲福利影院| 人妻 亚洲 视频| 中国美女看黄片| 久久影院123| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本黄色日本黄色录像| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 成人永久免费在线观看视频 | 精品第一国产精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日韩视频一区二区在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 久热爱精品视频在线9| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩福利视频一区二区| 一本综合久久免费| 人妻 亚洲 视频| 91国产中文字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲七黄色美女视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 老司机午夜十八禁免费视频| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲av美国av| 女警被强在线播放| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产成人精品久久二区二区免费| 在线观看一区二区三区激情| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 久久久久久久大尺度免费视频| 女人久久www免费人成看片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 成人永久免费在线观看视频 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 丝袜在线中文字幕| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费av中文字幕在线| 国产亚洲一区二区精品| 捣出白浆h1v1| 免费不卡黄色视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产在线视频一区二区| 老司机福利观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品国产区一区二| 国产免费现黄频在线看| 亚洲伊人久久精品综合| 一二三四在线观看免费中文在| 精品乱码久久久久久99久播| 日本一区二区免费在线视频| 激情在线观看视频在线高清 | 男人操女人黄网站| 在线 av 中文字幕| 宅男免费午夜| 亚洲精品乱久久久久久| 超碰97精品在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 在线播放国产精品三级| 99久久人妻综合| 满18在线观看网站| 久久久久久久久免费视频了| 少妇精品久久久久久久| 制服诱惑二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜福利欧美成人| 99久久国产精品久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 人妻久久中文字幕网| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 成人国产av品久久久| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | √禁漫天堂资源中文www| 日韩中文字幕欧美一区二区| 丝袜美腿诱惑在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 免费看a级黄色片| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 韩国精品一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 一级毛片女人18水好多| 人妻 亚洲 视频| 美女主播在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产不卡av网站在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 精品第一国产精品| 搡老岳熟女国产| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 69av精品久久久久久 | 香蕉丝袜av| 男女高潮啪啪啪动态图| 丝袜喷水一区| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产成人av教育| a级毛片黄视频| www.999成人在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲三区欧美一区| 露出奶头的视频| 色尼玛亚洲综合影院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲情色 制服丝袜| 十八禁高潮呻吟视频| 最近最新免费中文字幕在线| 热re99久久国产66热| 欧美黑人精品巨大| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久国产精品麻豆| 欧美另类亚洲清纯唯美| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产成人精品久久二区二区91| 怎么达到女性高潮| 国产xxxxx性猛交| 视频在线观看一区二区三区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产精品1区2区在线观看. | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 深夜精品福利| av网站在线播放免费| 中文字幕制服av| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品国产av在线观看| 精品国产一区二区久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一夜夜www| 日本av手机在线免费观看| 国产xxxxx性猛交| 欧美日韩福利视频一区二区| 激情视频va一区二区三区| 一夜夜www| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久久精品免费免费高清| bbb黄色大片| 少妇 在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 99re在线观看精品视频| 欧美黄色淫秽网站| 免费在线观看影片大全网站| 中国美女看黄片| 搡老熟女国产l中国老女人| 日韩欧美三级三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 男女午夜视频在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 窝窝影院91人妻| 少妇被粗大的猛进出69影院| 十分钟在线观看高清视频www| 另类精品久久| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 一个人免费看片子| 精品久久久久久电影网| 老熟妇仑乱视频hdxx| 视频在线观看一区二区三区| 曰老女人黄片| 免费观看人在逋| 国精品久久久久久国模美| 国产又爽黄色视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 十八禁人妻一区二区| www日本在线高清视频| 国产三级黄色录像| 午夜免费鲁丝| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 午夜激情久久久久久久| 欧美av亚洲av综合av国产av| 桃花免费在线播放| 亚洲精品在线观看二区| 日本一区二区免费在线视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久午夜亚洲精品久久| 国产亚洲一区二区精品| 高清毛片免费观看视频网站 | 国产精品 欧美亚洲| 午夜精品国产一区二区电影| 91国产中文字幕| 老司机在亚洲福利影院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99久久99久久久精品蜜桃| www.999成人在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产主播在线观看一区二区| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 69精品国产乱码久久久| 另类精品久久| 成年人黄色毛片网站| 在线观看66精品国产| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产精品久久久久久精品古装| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 色播在线永久视频| 露出奶头的视频| 久久青草综合色| 亚洲,欧美精品.| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产不卡一卡二| 国产单亲对白刺激| 国产精品久久久av美女十八| 久久久久视频综合| 午夜福利视频在线观看免费| 在线av久久热| 久久久国产欧美日韩av| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲精品在线观看二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999久久久国产精品视频| 亚洲五月婷婷丁香| 中文亚洲av片在线观看爽 | av天堂久久9| 久久狼人影院| 亚洲avbb在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产成人啪精品午夜网站| www.自偷自拍.com| 亚洲av欧美aⅴ国产| 69av精品久久久久久 | 一级毛片电影观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产成人系列免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 美女福利国产在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av国产av综合av卡| 在线观看免费高清a一片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费观看av网站的网址| 制服人妻中文乱码| 91字幕亚洲| 51午夜福利影视在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 99久久人妻综合| 999久久久国产精品视频| www.999成人在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久精品免费免费高清| 国产精品久久电影中文字幕 | 黄片小视频在线播放| av一本久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产91精品成人一区二区三区 | 视频区欧美日本亚洲| 亚洲精品av麻豆狂野| 啦啦啦 在线观看视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 99re6热这里在线精品视频| 91大片在线观看| kizo精华| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品二区激情视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产在线免费精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 国产日韩欧美亚洲二区| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美av亚洲av综合av国产av| 午夜激情久久久久久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产欧美日韩一区二区三| 中文字幕最新亚洲高清| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲成人手机| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 狂野欧美激情性xxxx| 国产在线观看jvid| 欧美国产精品一级二级三级| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品电影一区二区三区 | 无人区码免费观看不卡 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| av视频免费观看在线观看| 国产片内射在线| 一进一出好大好爽视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 美女高潮到喷水免费观看| 热re99久久国产66热| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久久精品免费免费高清| 黄色丝袜av网址大全| 国产欧美日韩一区二区三| 丰满迷人的少妇在线观看| 深夜精品福利| 成人精品一区二区免费| 免费观看av网站的网址| 九色亚洲精品在线播放| 欧美成狂野欧美在线观看| 悠悠久久av| 99热国产这里只有精品6| 好男人电影高清在线观看| 免费不卡黄色视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| av天堂久久9| 天堂动漫精品| 亚洲av成人一区二区三| 久久99一区二区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 蜜桃国产av成人99| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| √禁漫天堂资源中文www| 1024香蕉在线观看| 久久 成人 亚洲| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人欧美| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久狼人影院| 人人澡人人妻人| 女人久久www免费人成看片| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 男女免费视频国产| 亚洲三区欧美一区| 黄色片一级片一级黄色片| 97在线人人人人妻| www.精华液| 欧美黄色片欧美黄色片| 大片免费播放器 马上看| 午夜老司机福利片| 国产成人欧美| 极品人妻少妇av视频| 国产日韩欧美在线精品| 正在播放国产对白刺激| 欧美日本中文国产一区发布| 午夜日韩欧美国产| 男女免费视频国产| 麻豆乱淫一区二区| 免费在线观看黄色视频的| 免费看a级黄色片| 色综合欧美亚洲国产小说| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利免费观看在线| 老司机亚洲免费影院| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 蜜桃国产av成人99| 操美女的视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 色视频在线一区二区三区| 一个人免费在线观看的高清视频| 757午夜福利合集在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 老司机靠b影院| 热99re8久久精品国产| 天天影视国产精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 大香蕉久久网| 99国产精品一区二区三区| 18在线观看网站| 久久久久久久国产电影| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 大片电影免费在线观看免费| 午夜福利,免费看| 午夜日韩欧美国产| 交换朋友夫妻互换小说| 国产一区二区三区视频了| 性少妇av在线| 两个人免费观看高清视频| 91老司机精品| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 成人手机av| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| av网站在线播放免费| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲成人手机| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 婷婷成人精品国产| 亚洲成国产人片在线观看| 一进一出好大好爽视频| 在线观看免费高清a一片| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜福利乱码中文字幕| 国产av国产精品国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲一区二区精品| 桃花免费在线播放| 亚洲精品一二三| 99国产精品99久久久久| 精品福利永久在线观看| 久久久久久人人人人人| 人妻久久中文字幕网| 久久av网站| 丰满少妇做爰视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 女性生殖器流出的白浆| 欧美日韩精品网址| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美日韩一级在线毛片| 国产成人系列免费观看| 久久人妻av系列| 亚洲av电影在线进入| av免费在线观看网站| av福利片在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 怎么达到女性高潮| 亚洲av日韩在线播放| 精品国产亚洲在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美午夜高清在线| 欧美乱码精品一区二区三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 搡老乐熟女国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产日韩欧美视频二区| aaaaa片日本免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 丁香六月欧美| a级毛片在线看网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 伦理电影免费视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲国产av新网站| 欧美午夜高清在线| 一本综合久久免费| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 天天影视国产精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 夜夜爽天天搞| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久精品国产欧美久久久| 成在线人永久免费视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黄片小视频在线播放| 我要看黄色一级片免费的| 男人操女人黄网站| 一区福利在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 国产又爽黄色视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 最近最新免费中文字幕在线| 国产男靠女视频免费网站| 久久久久久久久免费视频了| 男女免费视频国产| 亚洲全国av大片| 伦理电影免费视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 美女视频免费永久观看网站| 国产激情久久老熟女| 亚洲人成77777在线视频| 成人特级黄色片久久久久久久 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| av天堂久久9| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久中文字幕一级| 飞空精品影院首页| 国产激情久久老熟女| 亚洲人成77777在线视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲综合色网址| 国产一区二区激情短视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久国产精品影院| 国产97色在线日韩免费| 在线天堂中文资源库| 亚洲专区国产一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产伦理片在线播放av一区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 黄片小视频在线播放| 在线 av 中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 天堂动漫精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产一区二区激情短视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品国产高清国产av | 一本大道久久a久久精品| 久久久国产成人免费|