天冬配方顆粒中5-羥甲基糠醛的測(cè)定

魏福榮，聶麗云，徐飛鵬

(江蘇吉貝爾藥業(yè)股份有限公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009)

天冬為百合科植物天冬Asparaguscochinchinensis(Lour.) Merr.的干燥塊根，常用于緩解肺部燥熱并時(shí)常伴有干咳，咳痰，喉嚨干渴，新陳代謝不規(guī)律等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明天冬具有抗衰老[2]、抗炎癥反應(yīng)[3]、緩解咳喘[4]、降血糖[5]等作用。天冬配方顆粒是以天冬飲片為原料，經(jīng)水煎煮、干燥等工藝加工生產(chǎn)制成。作為新型中藥劑型，服用時(shí)只需加熱水沖服便可以達(dá)到很好的服用效果，相較于傳統(tǒng)湯劑具有方便，效率高，便于貯藏等優(yōu)點(diǎn)[6]。

5-羥甲基糠醛(5-HMF)是單糖在高溫、酸性等條件下脫水產(chǎn)生的醛類化合物。天冬本身含有大量糖類，在制備配方顆粒過程中進(jìn)行高溫煎煮，可能會(huì)產(chǎn)生一定量5-HMF。該成分對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害，可能引起血栓性靜脈炎、促進(jìn)皮膚癌等不良反應(yīng)，且有潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)。2015年版《中國(guó)藥典》中將己酮可可堿葡萄糖注射液及甘油果糖氯化鈉注射液等均對(duì)5-HMF進(jìn)行了限度控制[1]。因此，天冬配方顆粒中5-HMF的控制對(duì)臨床安全應(yīng)用有重要意義。

1 儀器與試藥

島津 SIL-10A高效液相色譜儀， Milli-Q超純水儀；島津 AY220電子天平。5-羥甲基糠醛(批號(hào)：111626-201711，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度99.4%)，天冬配方顆粒(自制，批號(hào)18001、18002、18003、18004、18005、18006、18007、18008，4 g/每袋，相當(dāng)于飲片10g)。甲醇(色譜純，Merck公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

Waters Symmetry?C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(5∶95)。柱溫：40℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm。5-HMF的色譜峰與其它色譜峰分離良好，色譜圖見圖1和圖2。

2.2 供試品溶液的制備

取天冬配方顆粒1 g，精密稱定，加1 g硅藻土攪拌均勻，置100 mL錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理50 min。放冷后稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，混勻。取上清液25 mL，回收溶劑，殘?jiān)?0%甲醇溶解并稀釋至5 mL量瓶中，搖勻即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取5-HMF對(duì)照品8.55 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液17.00、8.50、4.25、2.12、1.06 μg/mL。精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。每份溶液進(jìn)樣2次，得平均峰面積。以5-HMF對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得線性回歸方程Y=48674X+9884(r=0.9998)，線性范圍為1.06～17.00 μg/mL。

2.4 精密度試驗(yàn)

取18008批天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。連續(xù)進(jìn)樣6次，求平均峰面積和RSD(%)。結(jié)果表明精密度良好，見表1。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取18008批天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。于0、2、4、6、8、10 h，分別精密吸取該溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。求平均峰面積和RSD(%)。結(jié)果表明10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，見表1。

表1 精密度試驗(yàn)與穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 檢測(cè)限與定量限

將對(duì)照品溶液逐步稀釋，HPLC測(cè)定，記錄色譜圖。以信噪比約為2∶1至3∶1時(shí)，作為檢測(cè)限，為0.05 μg/mL。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取18008批冬配方顆粒6份，每份1g，精密稱定，照“2.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。每份溶液進(jìn)樣2次，求平均峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。6份天冬配方顆粒中5-HMF的含量分別為0.0704、0.0704、0.0698、0.0684、0.0664、0.0688 mg/g，平均含量為0.0690 mg/g，RSD為2.22%，表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取18008批天冬配方顆粒6份，每份0.5 g，精密稱定，精密加入17.00 μg/mL對(duì)照品溶液2 mL，照“2.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。每份溶液進(jìn)樣2次，求平均峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2(續(xù))

2.9 含量測(cè)定

取不同批次的天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測(cè)定，記錄峰面積。每份溶液進(jìn)樣2次，求平均峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。

表3 含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明，8批天冬配方顆粒中5-HMF含量介于0.0256～0.0986 mg/g之間，平均含量為0.0647 mg/g。

3 討論

(1)在確定供試品溶液制備方法之前，考察了不同提取溶劑(25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇、甲醇)、不同溶劑體積(30、40、50 mL)、不同提取時(shí)間(30、40、50 min)對(duì)5-HMF提取效率的影響。結(jié)果表明50%甲醇50 mL，超聲處理50 min，效果最好。

(2)目前5-HMF的限度控制爭(zhēng)議很大，其危害性并無充分的理論依據(jù)。歐盟食品安全委員會(huì)食品添加劑、香料、加工助劑及食品接觸材料科學(xué)小組以修正理論加權(quán)最大日攝入量法為基礎(chǔ)進(jìn)行研究，認(rèn)為每人每天攝入的5-HMF的上限為1.6 mg，而聯(lián)合食品添加劑專家委員會(huì)在1996 年通過大量急性和亞急性動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)所得到的標(biāo)準(zhǔn)為每人每天540 μg[7]。天冬每日服用量為6～12 g，折算為配方顆粒為2.4～4.8 g，根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果，其中5-HMF含量并未超過上限值，安全性較高。

(3)本研究所建立的5-HMF測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)單方便、快速靈敏，為天冬配方顆粒的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。