COX-2、Survivin在不同分型腮腺多形性腺瘤及惡性多形性腺瘤中的表達和意義

喬 柱 鄒 越 張 帥 趙 虎

多形性腺瘤（pleomorphic adenoma，PA）是最常見的一種涎腺腫瘤，多發(fā)生于腮腺組織，占涎腺上皮源性腫瘤的50%以上，組織學(xué)上具有多樣性，以黏液和軟骨樣組織的出現(xiàn)為特征[1]。Seifert[2]等將多形性腺瘤根據(jù)上皮基質(zhì)和細胞所占比例先分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，后簡分為細胞豐富型、其它型和基質(zhì)豐富型。基質(zhì)豐富型比較易復(fù)發(fā)，而細胞豐富型則容易惡變，并且多形性腺瘤瘤細胞的復(fù)發(fā)與惡變存在著潛在相關(guān)性[3]。惡性多形性腺瘤（malignant pleomorphic adenoma，MPA） 也可被叫作癌在多形性腺瘤中（carcinoma ex pleomorphic adenoma，ca ex PA），在涎腺惡性腫瘤中約可占到15%～20%。90%以上的惡性多形性腺瘤是因多形性腺瘤惡變所導(dǎo)致，并且其惡性程度顯著高于常見的涎腺惡性腫瘤[4]。本研究通過檢測環(huán)氧合酶COX-2、凋亡抑制蛋白Survivin 在基質(zhì)豐富型、其它型和細胞豐富型多形性腺瘤中的表達，以探討COX-2、Survivin 在不同分型腮腺多形性腺瘤中的表達及意義，從而對腮腺多形性腺瘤不同分型的診斷與治療提供一定的幫助。

資料和方法

1.一般資料：研究對象收集保定市第一中心醫(yī)院2010 年9 月～2014 年6 月66 例腮腺多形性腺瘤與18 例惡性多形性腺瘤組織石蠟病理標(biāo)本。所選擇石蠟標(biāo)本均病理學(xué)診斷明確，組織包埋完整，臨床病歷資料真實可靠，取材前無其它頭頸腫瘤疾病史以及放化療史。其中男性患者39 例，女性患者45例。將所有腮腺腫瘤標(biāo)本切片行HE 染色處理后置鏡下觀察，經(jīng)兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法獨立閱片，按照Seifert 和Donath[2]組織分型標(biāo)準(zhǔn)將多形性腺瘤進一步分為基質(zhì)豐富型、其它型、細胞豐富型。設(shè)立四個實驗組：A 組（多形性腺瘤基質(zhì)豐富型）20 例，男性患者6 例，女性患者14 例，平均年齡大小50.4歲；B 組（多形性腺瘤其它型）24 例，男性患者11例，女性患者13 例，平均年齡大小53.8 歲；C 組（多形性腺瘤細胞豐富型）22 例，男性患者12 例，女性患者10 例，平均年齡大小48.7 歲；D 組（惡性多形性腺瘤）18 例，男性患者10 例，女性患者8 例，平均年齡大小54.8 歲。各組中的性別、平均年齡等臨床病例因素的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可排除上述因素的干擾具有可比性，見表1。

表1 臨床病例資料

2.方法：將所有涎腺腫瘤標(biāo)本切片后首先行HE染色處理后置鏡下觀察，經(jīng)兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法獨立閱片分型后分組。COX-2 和Survivin 的檢測采用SP 免疫組化法。根據(jù)各組實驗顯色結(jié)果，采用計算機彩色病理圖文分析系統(tǒng)對其進行采圖與定量分析。該課題應(yīng)用Motic Med 6.0 軟件系統(tǒng)進行鏡下采圖攝片后進行統(tǒng)一分析，每例組織切片隨機選取10 個不相重疊視野下拍攝，并統(tǒng)一調(diào)整進光量、感光度等測量信號數(shù)值，以Jpeg 格式存儲圖像[5]。采集圖像后對圖像進行測量分析，顯微鏡下細致觀察病理切片的表達情況，選擇陽性表達標(biāo)本進行測量，不表達切片計為0。本實驗圖像應(yīng)用IPP6.0 軟件測得積分光密度值。積分光密度（integrated optical density，IOD）綜合考慮了面積因素、染色強度比MOD 值更為準(zhǔn)確。IOD 的值越高表明陽性表達染色越強。

3.統(tǒng)計學(xué)處理：檢驗采用SPSS 22.0 對各組IOD結(jié)果統(tǒng)計后，計量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和t檢驗。

結(jié)果

1.COX-2 計量表達結(jié)果：COX-2 在A、B、C、D各組中的表達，呈現(xiàn)由基質(zhì)豐富型多形性腺瘤、其它型多形性腺瘤、細胞豐富型多形性腺瘤到惡性多形性腺瘤中依次增強的趨勢，存在顯著差異，P＜0.01，具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。其中細胞豐富型多形性腺瘤（C 組）強度值較基質(zhì)豐富型、其它型多形性腺瘤（A、B 組）高，存在顯著差異，P＜0.01，具有統(tǒng)計學(xué)意義。同時其余各組間對比P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.Survivin 計量表達結(jié)果：Survivin 在基質(zhì)豐富型多形性腺瘤（A 組）中的表達相對較弱，與在其它型（B 組）、細胞豐富型（C 組）多形性腺瘤中表達存在顯著差異，P＜0.01，具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。其中Survivin 在惡性多形性腺瘤（D 組）中的表達最為顯著，與在多形性腺瘤（A、B、C 組）中表達存在顯著差異，P＜0.01，具有統(tǒng)計學(xué)意義；Survivin 在細胞豐富型多形性腺瘤（C 組）中的表達比在其它型（B組）、基質(zhì)豐富型（A 組）多形性腺瘤中表達較強，存在差異，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 COX-2、Survivin 各組中IOD 值表達情況

討論

多形性腺瘤作為涎腺良性腫瘤具有緩慢生長的特性，同時其在生物行為上具有的一定侵襲性與復(fù)發(fā)性，WTO 標(biāo)準(zhǔn)將其歸類為臨界瘤。Seifert[2]等將多形性腺瘤根據(jù)上皮基質(zhì)和細胞所占比例先分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，后簡分為細胞豐富型、其它型和基質(zhì)豐富型。一般認(rèn)為，細胞豐富型容易發(fā)生惡變，并且臨床中一半以上的惡性多形性腺瘤來自此種分型。

COX-2 又稱為環(huán)氧合酶-2，為Xie 等[6]于1991年得到的一種新型環(huán)氧合酶族的誘導(dǎo)性酶。目前認(rèn)為COX-2 主要參與腫瘤、炎癥等病態(tài)組織中前列腺素的合成。多項實驗研究表明該因子在大多數(shù)正常組織中不表達或低表達，而在許多良性癌前病變及惡性腫瘤中高度表達。本實驗研究結(jié)果表明：COX-2 蛋白在腮腺多形性腺瘤A、B、C、D 各組中表達的積分光密度值（IOD），各組之間呈現(xiàn)明顯遞增趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），代表COX-2在腮腺多形性腺瘤中的良惡性及病理分型中呈正相關(guān)性。在一定程度上反映了良性多形性腺瘤在組織形態(tài)分布中細胞豐富型的癌變傾向，提示了細胞豐富型多形性腺瘤（C 組）在良性多形性腺瘤中的惡變傾向最大。Survivin 作為凋亡抑制蛋白家族中的新成員，是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的抑制凋亡因子，在抑制細胞凋亡，參與細胞周期調(diào)節(jié)、促進腫瘤血管形成等方面發(fā)揮重要的作用[7]。目前實驗研究發(fā)現(xiàn)在胃癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌等[8～11]均有其表達，使Survivin 蛋白有望成為一種新型廣譜腫瘤標(biāo)記物。本實驗IOD 值定量結(jié)果中Survivin 在細胞豐富型多形性腺瘤（C 組）較其余兩組分型強度高，且具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），可提示此分型具有較高惡變生物學(xué)傾向，具體惡變程度有待于進一步的研究。

綜上所述，本課題應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，分析了不同分型腮腺多形性腺瘤及惡性多形性腺瘤中COX-2 和Survivin 的蛋白表達情況，提示了與多形性腺瘤惡變程度存在著正相關(guān)。但兩種蛋白在腫瘤生成、發(fā)展、惡變中相互作用的具體機制還未完全闡明，有待于更全面、更深入的實驗研究做進一步證實，從而為提高腮腺多形性腺瘤的臨床診療水平提供堅實理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。