CEACAM 5與PCNA在唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系

馬 賽 安 峰 劉振麗 張 璇 劉 博 張 慧

唾液腺腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）是口腔頜面外科常見(jiàn)的一類(lèi)生長(zhǎng)緩慢的惡性腫瘤。但由于腫瘤細(xì)胞容易沿著或圍繞神經(jīng)及血管生長(zhǎng)，故患者早期容易出現(xiàn)疼痛、面癱等癥狀，故ACC 備受臨床關(guān)注。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子（CEACAMs）是對(duì)一組同源性的哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的統(tǒng)稱(chēng)，屬于免疫球蛋白基因超家族，研究證實(shí)其家族成員在全身多個(gè)系統(tǒng)的惡性腫瘤組織中均具有較高的檢測(cè)價(jià)值，對(duì)評(píng)估腫瘤的生物學(xué)活性及腫瘤患者的預(yù)后有較高的指導(dǎo)意義[1～3]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中的表達(dá)，并分析兩者的相關(guān)性及其與臨床預(yù)后的關(guān)系，以期為早期評(píng)估唾液腺ACC 的惡性程度和判斷預(yù)后提供相關(guān)依據(jù)。

資料和方法

1.研究對(duì)象：把2005 年6 月～2015 年8 月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科常規(guī)病理學(xué)檢查證實(shí)的54 例原發(fā)性唾液腺ACC 患者的組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及免疫治療等其他治療，且均有完整的臨床病理資料及術(shù)后隨訪資料。另取唾液腺多形性腺瘤（salivary gland pleomorphic adenoma，SPA）標(biāo)本及癌旁正常唾液腺組織各30 例作為對(duì)照組。

2.試劑及實(shí)驗(yàn)方法：鼠抗人CEACAM 5 單克隆抗體購(gòu)于PTG 公司，鼠抗人PCNA 單克隆抗體購(gòu)自R&D 公司，SP 試劑盒及DAB 顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組蠟塊分別切成3～4 微米的切片，常規(guī)脫蠟至水，0.01MPBS 沖洗5min×3 次，放入枸櫞酸溶液中熱修復(fù)，一抗CEACAM 5 和PCNA 抗體滴度分別為1：500、1：200，以后按SP 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，中性樹(shù)脂封片。

3.結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上出現(xiàn)顆粒狀棕黃色為CEACAM 5 陽(yáng)性細(xì)胞、細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀黃色或棕色為PCNA 陽(yáng)性細(xì)胞。以細(xì)胞染色程度及染色細(xì)胞百分率來(lái)對(duì)標(biāo)本做出判定結(jié)果評(píng)定。染色程度：基本無(wú)色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3 分；再按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分：陰性為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分。染色程度得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分率的乘積為免疫組化最后的評(píng)分：0～1 分為陰性（-），2～3 分為弱陽(yáng)性（+），4～6 分為陽(yáng)性（++），6 分以上為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），將陰性和弱陽(yáng)性表達(dá)定義為陰性組，陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)定義為陽(yáng)性組。

4.隨訪及預(yù)后：所有患者的隨訪時(shí)間均以術(shù)后第2 天開(kāi)始統(tǒng)計(jì)。失訪患者的隨訪時(shí)間以患者最后一次來(lái)院復(fù)查時(shí)間為準(zhǔn)。本研究最后觀察日期為2019 年6 月。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：運(yùn)用SPSS17.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用陽(yáng)性率計(jì)數(shù)資料表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearmen 檢驗(yàn)、生存數(shù)據(jù)采用Kaplan-Meier 分析并繪制生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)差異性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組、SPA組及癌旁正常唾液腺組織中的表達(dá)。

在唾液腺ACC 組、SPA 組及癌旁正常唾液腺組中，CEACAM 5 與PCNA 分別呈棕黃色顆粒狀表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中（圖1～6）。唾液腺ACC組、SPA 組及癌旁唾液腺組中CEACAM 5 和PCNA 陽(yáng)性率分別為62.96%（34/54）、30%（9/30）、23.33%（7/30） 和55.56%（30/54）、33.33%（10/30）、16.67%（5/30），三組相比較，差異均有顯著性（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組、SPA 組及癌旁正常唾液腺組織中的表達(dá)（倒數(shù)，%）

2.CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。

實(shí)性型唾液腺ACC 中CEACAM 5 與PCNA 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腺樣/管狀型（P＜0.01），TNM分期Ⅲ+Ⅳ期者CEACAM 5、PCNA 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于唾液腺ACC Ⅰ+Ⅱ者（P＜0.01）；有轉(zhuǎn)移者CEACAM 5、PCNA 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）；有神經(jīng)侵犯者CEACAM 5、PCNA 表達(dá)陽(yáng)性率均明顯高于無(wú)神經(jīng)侵犯者（P＜0.01）。CEACAM 5 和PCNA 在唾液腺ACC 組中不同年齡、性別、部位的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異（P＞0.05，表2）。

表2 不同病理特征的涎腺ACC 中CEACAM 5、PCNA 的表達(dá)（例數(shù)，%）

圖1 CEACAM 5 在ACC 中的表達(dá)（SP×200）

圖2 PCNA 在ACC 中的表達(dá)（SP ×200）

圖3 CEACAM 5 在SPA 中的表達(dá)（SP ×200）

圖4 PCNA 在SPA 中的表達(dá)（SP ×200）

圖5 CEACAM 5 在正常唾液腺組織中的表達(dá)（SP ×200）

圖6 PCNA 在正常涎腺組織中的表達(dá)（SP ×200）

3.唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 表達(dá)的相關(guān)性。

唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 均陽(yáng)性表達(dá)者28 例，均陰性表達(dá)者18 例。CEACAM 5和PCNA 的表達(dá)呈正相關(guān)（rs＝0.703，P＝0.000）（表3）。

表3 CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組中表達(dá)的相關(guān)性

4.唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 的表達(dá)對(duì)臨床預(yù)后的影響。

54 例唾液腺ACC 患者隨訪時(shí)間為22～104 個(gè)月，平均隨訪64 個(gè)月，失訪7 例，其中因ACC 因素死亡者13 例，死于其他原因者3 例。所有隨訪患者的病理標(biāo)本中CEACAM 5、PCNA 表達(dá)陽(yáng)性者術(shù)后平均生存時(shí)間分別為57.764±1.314 個(gè)月、57.950±1.513 個(gè)月，中位生存時(shí)間分別為59.000±1.919 個(gè)月、58.000±1.891 個(gè)月；CEACAM 5、PCNA 表達(dá)陰性者術(shù)后平均生存時(shí)間分別為87.316±2.701 個(gè)月、84.429±3.151個(gè)月，中位生存時(shí)間為89.000±0.430 個(gè)月、89.000±0.445 個(gè)月，CEACAM 5 與PCNA 表達(dá)陰性者的生存時(shí)間均明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性者表達(dá)（P＝0.000、P＝0.000），（圖7、8）。

圖7 CEACAM 5 陽(yáng)性/陰性表達(dá)組生存曲線

圖8 PCNA 陽(yáng)性/陰性表達(dá)組生存曲線

討論

CEACAM 5 蛋白是CEACAM 5 基因（又稱(chēng)為CD66e）的表達(dá)產(chǎn)物，具有七條特征性的細(xì)胞外Ig 鏈和一個(gè)葡萄糖磷脂酰肌醇鏈，其域結(jié)構(gòu)是N-A1-B1-A2-B2-A3-B3，它在正常組織內(nèi)主要作為細(xì)胞粘附分子通過(guò)嗜同種鏈接和嗜異種鏈接介導(dǎo)細(xì)胞間接觸[4]。而在惡性腫瘤中，CEACAM 5 基因是一種重要癌基因。研究發(fā)現(xiàn)，CEACAM 5 是腫瘤細(xì)胞分化和增殖的重要調(diào)節(jié)分子，其表達(dá)水平的增高破壞了細(xì)胞極性和正常組織結(jié)構(gòu)，阻礙細(xì)胞的分化成熟，并且通過(guò)其抗失巢凋亡的功能影響惡性腫瘤的分化和侵襲潛能[5～8]。另有研究發(fā)現(xiàn)[9]，CEACAM 5在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的部位不同所代表的意義也不盡相同，細(xì)胞膜陽(yáng)性表達(dá)可能是癌前病變的標(biāo)志，而細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)則對(duì)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有指向作用。茹國(guó)慶等人[10]研究發(fā)現(xiàn)CEACAM 5 在胃癌中的表達(dá)水平與患者的生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。既往對(duì)CEACAM 5 的研究主要集中在胃腸、乳腺、肺等上皮性腫瘤，而CEACAM 5 是否對(duì)唾液腺ACC 的診斷與預(yù)后評(píng)估發(fā)揮作用，國(guó)內(nèi)少有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示唾液腺ACC 中CEACAM 5 的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，這可能是和腫瘤的惡性程度高、浸潤(rùn)性和轉(zhuǎn)移潛能強(qiáng)有關(guān)。此外，研究結(jié)果還顯示CEACAM 5陰性表達(dá)患者的生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)患者。這說(shuō)明CEACAM 5 在唾液腺ACC 中的表達(dá)水平可能對(duì)評(píng)估腫瘤的惡性程度及預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。

惡性腫瘤的增殖活性越強(qiáng)其惡性程度往往越高。因此，臨床上將評(píng)估腫瘤細(xì)胞的增殖活性作為腫瘤組織學(xué)分級(jí)的重要依據(jù)。PCNA 是一種僅存在于增殖期細(xì)胞內(nèi)的多肽，PCNA 的表達(dá)水平可以反映細(xì)胞增殖能力和所處的細(xì)胞周期。目前，經(jīng)常通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)目標(biāo)因子與PCNA 在腫瘤組織中的表達(dá)水平及兩者之間的相關(guān)性來(lái)評(píng)價(jià)目標(biāo)因子對(duì)腫瘤增殖的影響[11～14]。本研究結(jié)果證實(shí)在唾液腺ACC 中PCNA 的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，且表達(dá)水平與ACC 的惡性程度、浸潤(rùn)性、轉(zhuǎn)移潛能呈正比，且PCNA 陽(yáng)性表達(dá)患者的生存時(shí)間明顯短于陰性患者。說(shuō)明PCNA 陽(yáng)性表達(dá)患者預(yù)后較差，這和PCNA對(duì)其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者預(yù)后的影響一致[15～17]。本研究結(jié)果還顯示唾液腺ACC 中CEACAM 5 與PCNA 的表達(dá)呈正相關(guān)，這說(shuō)明CEACAM 5 對(duì)腫瘤的增殖起到調(diào)控作用，這種調(diào)控的機(jī)制可能是CEACAM 5 作為上游或下游因子參與到了PCNA調(diào)控增殖的通路當(dāng)中。

綜上所述，唾液腺ACC 中CEACAM 5、PCNA高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差。但CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中調(diào)控增殖的具體機(jī)制及方式，有待進(jìn)一步研究，從而為唾液腺ACC 的精確診斷、分子靶向治療和預(yù)后評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。