糞便脫落細胞DNA與血CEA和CA199在結腸癌術后復發(fā)監(jiān)測中的對比研究*

項 濤,雷 慧△,黃志明,林土坤,戴小敏,譚綺瓊,胡 波,劉 芳

(1.廣東省吳川市人民醫(yī)院內(nèi)科,廣東湛江，524500；2.廣東醫(yī)科大學附屬佛山市高明區(qū)人民醫(yī)院內(nèi)5科，廣東佛山，528500；3.浙江省腫瘤醫(yī)院化療科，杭州 310022；4.同濟大學生命科學科技學院,上海 200092)

眾所周知，結腸癌術后存在復發(fā)危險，早期發(fā)現(xiàn)較困難，對于結腸癌術后復發(fā)監(jiān)測目前主要是血CEA、CA199等，但其敏感性、特異性不高，目前世界上敏感性、特異性較高并且可臨床實用的檢測指標非常少，國際上運用糞便脫落細胞DNA監(jiān)測結腸癌術后復發(fā)幾乎是空白。本研究檢測180例結腸癌術后患者糞便脫落細胞DNA的SDC2基因與血CEA、CA199的水平，討論糞便脫落細胞DNA的SDC2基因在結腸癌術后復發(fā)監(jiān)測中的評估價值，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年1-12月吳川市人民醫(yī)院及浙江省腫瘤醫(yī)院的住院結腸癌術后患者180例，中位年齡61.2歲，所有病例均經(jīng)過病檢確診，患者入組前糞便脫落細胞DNA與血CEA、CA199均為陰性。分為試驗組 (糞便DNA組)和對照組(血CEA、CA199組)，每組90例。所有患者均簽署知情同意書，通過醫(yī)院倫理委員會批準(L2018.01002)。

1.2方法 使用人類SDC2基因甲基化檢測試劑盒專用取便器(廣州康立明生物公司，醫(yī)療器械備案憑證編號：粵穗械備20160241號)收集患者50 mL糞便，PCR技術體外定性檢測脫落細胞DNA的SDC2基因；吳川市人民醫(yī)院檢驗科化驗血CEA、CA199的水平。SDC2基因拷貝數(shù)大于103為陽性，血CEA、CA199水平采用醫(yī)院檢驗科化學發(fā)光法檢測，大于吳川市人民醫(yī)院血CEA、CA199標準區(qū)間則為陽性。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。計數(shù)資料以率表示，采用Mann-Whitney檢驗。受試者工作曲線(ROC曲線)確定診斷界值，KaplanMeier法計算患者生存率及中位生存期，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

糞便脫落細胞DNA的SDC2基因陽性15例，血CEA、CA199陽性7例，22例腸鏡取材病理結果為腺癌，其他168例的腸鏡取材病理結果為慢性炎癥。試驗組糞便脫落細胞DNA的SDC2基因敏感性93.75%，特異性97.27%，對照組血CEA、CA199敏感性70.00%，特異性81.25%，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1、2。

表1 兩組檢測陽性情況

表2 兩組檢測陰性情況

3 討 論

中國大腸癌的發(fā)病率居惡性腫瘤發(fā)病譜的第三位，僅次于肺癌和胃癌，病死率居第5位。男性的發(fā)病率和病死率高于女性，從年齡分布來看，40～45 歲以后發(fā)病率上升迅速，在75～80歲達到高峰。目前人們一般認為大腸癌致病因主要包括：(1)雙高飲食(高蛋白、高脂肪)和低纖維素的飲食；(2)肥胖；(3)遺傳因素。此外，還有吸煙、環(huán)境污染等致病因素[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腸道細菌失調(diào)也會增加人們患大腸癌的風險[2]。腸道是人體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng)，數(shù)以億計的細菌聚集在人體內(nèi)，其中超過90%的微生物生活在腸道里，被稱為“腸道菌群”，又稱為“腸道微生物”，腸道微生物穩(wěn)態(tài)對消化、營養(yǎng)物質(zhì)代謝、人體自身發(fā)育、免疫及疾病的產(chǎn)生等方面都起到極其重要的作用。據(jù)推測，一個健康成人體內(nèi)，腸道內(nèi)的細菌總質(zhì)量可達1.0～1.5 kg，包含的細菌數(shù)量則可以達到1014個。而一個成年人自身的細胞數(shù)量為1013個，人體腸道內(nèi)的細菌數(shù)量超過人體細胞總數(shù)的10倍以上。數(shù)量龐大的細菌并不會對人體造成傷害，相反，腸道內(nèi)微生物菌群結構保持相對平衡，有益菌和有害菌相互作用才可以更好地保證腸道健康，腸道菌群失調(diào)可引起多種疾病。腸道菌群檢測是腸癌多維度檢測體系的重要組成部分，通過改善腸道菌群的失調(diào)狀態(tài)可降低結腸癌的發(fā)生率和抑制結腸癌的生長惡化，但腸道菌群檢測敏感性、特異性偏低，實際意義不大。

比腸道菌群檢測更具有現(xiàn)實意義的糞便脫落細胞DNA基因檢測技術具有無須特殊設備和限制飲食，無創(chuàng)、檢出率高等優(yōu)點，為不愿做腸鏡的患者提供了一種高效、簡易的方法。在美國2016年腸癌指南中，把糞便DNA基因檢測列為腸癌篩查的7種辦法之一[3]。這種方法主要檢測糞便中腸癌脫落細胞中變異基因，對早期大腸癌癌變篩查非常有優(yōu)勢?；颊咧恍枰峁┘S便作為檢測樣本，通過分析糞便中的遺傳物質(zhì)(糞便DNA)，可以檢測出直徑1 cm以上進展期腺瘤和腸癌病灶,及時發(fā)現(xiàn)早期腸癌基因突變。

許多研究人員試圖找到糞便脫落細胞DNA中的某些高表達基因來發(fā)現(xiàn)早期癌癥，但絕大多數(shù)失敗或者單次檢測費用過高，患者無法承擔[4]。因為大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程較長，從增生性病變到腺瘤、癌變、臨床期癌以致晚期腫瘤是一個10年以上的過程，因此給了人們預防的機會。以前電子腸鏡篩查和早診早治是預防大腸癌的最主要方法。早期診斷從癌上來講90%都可以治愈，標準是治療以后5年無復發(fā)和轉(zhuǎn)移。建議40歲以上男性、35歲以上女性的高危人群每年做1次篩查，中低危人群2～3年做1次即可。無癥狀是大腸癌的隱身衣，早期不易引起人們的警惕，便血癥狀又與痔瘡有些相似，很容易被忽略，加上傳統(tǒng)腸鏡檢查準備繁瑣、侵入性強，人們往往對此感到恐懼，這使得中國無癥狀人群的腸鏡檢測率低于1%。當出現(xiàn)明顯臨床癥狀時，患者往往已經(jīng)錯過最佳治療時機[5]。

目前較多采用的篩查方法主要有以下幾種：大便隱血、乙結腸鏡、纖維結腸鏡、CT-MRI 模擬腸鏡、糞便DNA檢測。傳統(tǒng)的腸鏡檢查前需空腹1～2 d后服瀉藥作腸道準備，痛苦且不方便，還影響工作，作為大腸癌的初篩，人群接受率差且成本較高。因此更前沿的篩查應該用糞便DNA檢測，因為依從性高。

眾所周知，糞便脫落細胞DNA對于檢測腸道惡性腫瘤細胞具有天然的優(yōu)勢[6]。因為健康成年人每天都會有上皮細胞脫落至腸腔并隨糞便排出體外[7]，而結直腸癌腫瘤細胞由于異常增殖，細胞與細胞間或者細胞基底膜的黏附性降低等因素，比正常上皮細胞更易脫落[8]。因此，腸道腫瘤患者的糞便中會含有大量的從腸道腫瘤表面脫落的攜帶了腸癌病變信息的細胞和細胞成分，這些信息可以由特殊的檢測手段來解讀[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)糞便脫落細胞DNA檢測基本解決了血CEA、CA199在結腸癌術后復發(fā)監(jiān)測中敏感性、特異性不高的情況[10]。