“福鼎大白”不同工藝茶類茶黃素含量的高效液相色譜分析

黃 彪，劉文靜，吳建鴻

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，福建福州 350003）

茶黃素是由茶多酚經(jīng)酶促氧化聚合而形成的含有苯并卓酚酮結(jié)構(gòu)和酚羥基團(tuán)的化合物[1]。茶黃素不僅是影響茶葉色、香、味及品質(zhì)的重要物質(zhì)，更經(jīng)研究證明具有良好的抗氧化、消炎、抗癌功效[2-7]，其潛在保健功效一直以來備受關(guān)注。茶葉根據(jù)外形、色澤及制作方法的不同一般可分為綠茶、白茶、青茶（烏龍茶）、紅茶、黃茶、黑茶六大茶類[8]，茶葉中茶黃素的含量與其制作工藝有很大的關(guān)系，但以往的文獻(xiàn)對紅茶以外的其他茶類茶黃素類物質(zhì)的報(bào)道較少，有關(guān)加工工藝對茶葉中茶黃素含量影響的研究則更少，因此開展相關(guān)的研究具有重要的意義。

“福鼎大白”（又名福鼎白毫，簡稱“福大”或“大白”）是經(jīng)全國農(nóng)作物品種審定委員會較早認(rèn)定的國家品種，是制作福建白茶的重要茶樹品種，因其抗性好，繁殖力強(qiáng)，適制茶類多（可制作成白茶、烏龍茶、紅茶），在福建、浙江、湖南、貴州、四川、等地廣泛栽培?！案６Υ蟀住辈粌H可用于制作白茶，還可用于制作烏龍茶、紅茶等。經(jīng)“福鼎大白”茶樹制作的茶類香氣濃厚，滋味鮮爽，活性成分豐富，具有多種藥理功效[9-10]。由于制作工藝的不同，適制茶類活性成分含量也有較大的差別，對于“福鼎大白”大白這一重要茶樹品種資源相關(guān)不同工藝對其適制茶類活性成分的影響，文獻(xiàn)中目前還未有相關(guān)研究報(bào)道。

本研究以“福鼎大白”茶樹春茶鮮葉為原料加工制作的的適制茶類白茶、烏龍茶和紅茶為研究對象，運(yùn)用高效液相色譜法檢測茶樣中4種主要茶黃素單體的含量，包括茶黃素（TF）、茶黃素雙沒食子酸酯（TFDG）、茶黃素-3-沒食子酸酯（TF-3-G），茶黃素-3'-沒食子酸酯（TF-3'-G），探討加工工藝對同一品種茶樹適制茶類茶黃素含量的影響，以期為福建茶葉資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試樣品：大白茶樹鮮葉采自福建省寧德市蕉城區(qū)赤溪鎮(zhèn)茶葉加工基地，按不同工藝要求分別加工成綠茶、白茶與紅茶，供實(shí)驗(yàn)使用。

試劑：茶黃素類化合物茶黃素（theaflavin，TF）、茶黃素單沒食子酸酯類（theaflavin-3-gallate，TF-3-G；theaflavin-3'-gallate，TF-3'-G）、茶黃素雙沒食子酸酯（theaflavin-3,3'-gallate，TFDG），購于南京道斯夫生物技術(shù)股份限公司，純度均大于97%。甲醇（色譜純，美國Fisher公司）、乙腈（色譜純，美國Fisher公司）、超純水（Millipore超純水機(jī)制備）、冰醋酸、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）等其他分析純試劑購于國藥集團(tuán)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Wates e-2695高效液相色譜儀（美國Waters公司），Qirect-Q5 Millipore超純水設(shè)備（美國Millipore），XW-80A旋渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），樣品均質(zhì)器（德國IKA公司）,水浴恒溫振蕩器（常州朗越儀器有限公司SYG-2）。

1.3 方法

1.3.1 不同茶類加工工序

茶葉樣品取自福建省寧德市、武夷山市等茶葉主產(chǎn)區(qū)茶葉加工基地。取福鼎大白茶樹鮮葉約5 kg，按不同制茶工藝制成綠茶、烏龍茶、紅茶和白茶，各茶類制作工藝流程如下：

（1）白茶：鮮葉—萎凋—拼篩—萎凋—干燥；

（2）烏龍茶：鮮葉—曬青—做青—?dú)⑶唷嗄怼稍铮?/p>

（3）紅茶：鮮葉—萎凋—揉捻—發(fā)酵—干燥；

1.3.2 色譜條件

參考GB/T 30483-2013茶黃素測定—高效液相色譜法6.3.3色譜條件。色譜柱為Waters CORTECS C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，2.7μm）；流動相 A 為醋酸、乙睛與水體積比 2：9：89，流動相 B 為甲醇；流速 1.0 mL/min；柱溫 35 0C；檢測波長 278 nm；進(jìn)樣量 10 μL；梯度洗脫條件見表1。

1.3.3 上機(jī)樣品溶液制備

供試液的制備依據(jù)GB/T 30483-2013茶黃素測定—高效液相色譜法6.3.1。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

表1 HPLC梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution program of HPLC

圖1 4種茶黃素類化合物檢測的HPLC色譜圖Fig.1 Multiple reaction monitoring（MRM）chromatograms of 4 theaflavins compounds

通過調(diào)整梯度洗脫程序，各目標(biāo)化合物分離良好，峰型尖銳，能夠滿足檢測的要求，4種茶黃素類化合物檢測的HPLC色譜圖見圖1所示。根據(jù)各目標(biāo)化合物的響應(yīng)情況，配制合適濃度的混標(biāo)溶液，按照優(yōu)化的條件進(jìn)樣，建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)，目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x,μg/mL）與對應(yīng)的峰面積（y）呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r2）均在0.999以上（表2）。

表2 4種目標(biāo)化合物的線性方程及相關(guān)系數(shù)Table 2 HPLC method validation

2.2 不同茶類中茶黃素類物質(zhì)含量的分析

取“福鼎大白”茶樹鮮葉通過不同工藝制作的3類茶葉樣品（白茶、烏龍茶、紅茶），按上述1.3.3方法制得樣品待測溶液。按照建立的HPLC方法，對樣品待測液中的茶黃素類物質(zhì)含量進(jìn)行檢測分析。每個樣品重復(fù)測定3次，檢測結(jié)果見表3所示。由表3可以看出，“福鼎大白”茶樹加工制作的3類茶，紅茶樣的茶黃素類總量最高，總量為0.52%，其次是烏龍茶樣，茶黃素總量為0.13%，白茶茶樣中茶黃總量最低為0.078%，4種茶黃素單體在3類茶中均存在。從各茶黃素單體占茶黃素總含量的比例來看，由“福鼎大白”茶樹制作成的紅茶中，茶黃素單體以茶黃素－3，3'－沒食子酸酯（TFDG）為主，茶黃素-3-沒食子酸酯（TF-3-G）次之；烏龍茶樣中，茶黃素-3-沒食子酸酯（TF-3-G）和茶黃素－3'－沒食子酸酯（TF-3'-G）含量較為接近，茶黃素－3，3'－沒食子酸酯（TFDG）含量稍高；白茶中茶黃素含量較低，幾種茶黃素單體含量較為接近。

表3 不同工藝茶類茶黃素含量Table 3 Contents of the aflavins in different tea samples

2 結(jié)論

建立了液相色譜方法（HPLC）同時測定茶葉中茶黃素類物質(zhì)的快速分析方法，并運(yùn)用建立的方法分析了福建大白茶樹鮮葉加工成不同茶類其茶黃素類化合的的含量差異。由“福鼎大白”茶樹加工制作的3類茶，紅茶中茶黃素類物質(zhì)總含量最高，主要以茶黃素－3，3'－沒食子酸酯（TFDG）和茶黃素-3-沒食子酸酯（TF-3-G）為主；烏龍茶中的茶黃素－3，3'－沒食子酸酯（TFDG）含量相對較高，茶黃素-3-沒食子酸酯（TF-3-G）含量接近；白茶中幾種茶黃素單體含量比較接近，相對都比較低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為福建省茶葉資源的開發(fā)提供理論依據(jù)，對于不同茶葉中活性物質(zhì)成分含量的評價具有一定的參考價值。