探討豬病診斷和防治中PCR技術(shù)的應(yīng)用

仇華先

摘 要：文中全面闡述PCR技術(shù)在豬病診斷與防治中的應(yīng)用，結(jié)合PCR技術(shù)特點(diǎn)，分析該技術(shù)在豬病診斷與防治過程中的應(yīng)用，提升豬養(yǎng)殖水平，促進(jìn)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益的提升。

關(guān)鍵詞：豬病診斷;PCR技術(shù);防治技術(shù)

在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)中，個(gè)體散養(yǎng)戶是一種獨(dú)立養(yǎng)殖方式，由于相關(guān)技術(shù)的成熟，產(chǎn)業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大。但養(yǎng)豬疾病的出現(xiàn)在很大程度上降低了養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益，制約著養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。由于部分散養(yǎng)戶對(duì)養(yǎng)豬疾病的認(rèn)識(shí)不到位，導(dǎo)致難以對(duì)養(yǎng)殖工作形成有效的防控。同時(shí)，我國(guó)豬養(yǎng)殖數(shù)量與規(guī)模持續(xù)增大，但受到飼養(yǎng)水平等因素限制，使得豬場(chǎng)養(yǎng)殖中豬病發(fā)生概率增加，豬病大多由典型性與多種病毒混合感染引起，臨床特征典型性不明顯，造成診斷難度增加。豬病診斷和防治過程中運(yùn)用PCR技術(shù)可以快速準(zhǔn)確明確病因，本文就此展開論述。

一、豬病診斷和防治現(xiàn)狀分析

1.不重視疾病預(yù)防工作。當(dāng)前，對(duì)于我國(guó)豬群的散養(yǎng)而言，最大的問題就是缺乏科學(xué)理論支撐。在養(yǎng)殖過程中只能依賴傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)，難以形成完整的養(yǎng)殖體系。大部分養(yǎng)殖人員對(duì)于疾病預(yù)防不夠重視，不會(huì)及時(shí)給豬群注射免疫疫苗。養(yǎng)殖戶養(yǎng)豬過程中過分依賴經(jīng)驗(yàn)，加上缺乏科學(xué)指導(dǎo)，因此難以形成科學(xué)認(rèn)識(shí)。通常情況下，養(yǎng)殖戶只能對(duì)常見的豬痢疾、豬瘟有些許認(rèn)識(shí)，對(duì)其他疾病的認(rèn)識(shí)嚴(yán)重不足，一旦在養(yǎng)殖戶的豬群中爆發(fā)傳染性疾病，養(yǎng)殖戶難以做到迅速反應(yīng)，最終導(dǎo)致出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p失。

2.疾病治療有效性不足。養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖觀念落后，理論知識(shí)的限制，導(dǎo)致豬群疫病爆發(fā)后難以得到及時(shí)、有效的治療，嚴(yán)重時(shí)在豬群中暴發(fā)疾病，迅速蔓延，甚至導(dǎo)致全軍覆沒。這種理論知識(shí)體系的缺乏在很大程度也限制了我國(guó)養(yǎng)殖戶規(guī)模的持續(xù)增加。但正是由于散養(yǎng)的小規(guī)模，因此養(yǎng)殖人員的成本較低、經(jīng)濟(jì)損失在一定范圍以內(nèi)。最嚴(yán)重的問題在于，農(nóng)村養(yǎng)殖過程中通常會(huì)將家禽和家畜一同養(yǎng)殖，一旦在豬群中爆發(fā)傳染性疾病，家畜也容易患病，最終出現(xiàn)嚴(yán)重危機(jī)。正是在這種背景下，疫病得不到有效治療，危害嚴(yán)重。

3.無法排除危險(xiǎn)的因素。由于養(yǎng)殖戶在理論方面的缺陷，養(yǎng)殖戶難以對(duì)豬病形成深刻認(rèn)識(shí)，難以發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)疾病的根源。只能在疾病暴發(fā)后，才能汲取一定的經(jīng)驗(yàn)，但這種經(jīng)驗(yàn)沒有建立在對(duì)疾病的全面認(rèn)識(shí)上，因此積累的經(jīng)驗(yàn)不夠全面，也不夠客觀、不夠科學(xué)。因此豬群疾病的隱患依然嚴(yán)重，養(yǎng)殖戶危險(xiǎn)因素難以消除，之前的遺留問題依然不能解決。

二、豬病診斷和防治中PCR技術(shù)的應(yīng)用

1.PCR技術(shù)分析。近些年豬病發(fā)生率增加，病癥表現(xiàn)的愈發(fā)嚴(yán)重，直接影響到豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。豬病診斷與防治過程中關(guān)鍵在于快速明確病因，依據(jù)病原菌種類采取有效的措施進(jìn)行應(yīng)對(duì)，引入PCR技術(shù)可以滿足這些需求。

豬病診斷與防治時(shí)PCR技術(shù)優(yōu)勢(shì)有三：操作簡(jiǎn)單、擴(kuò)增效果顯著、特異性較高。PCR技術(shù)下目的基因可以短時(shí)間內(nèi)快速擴(kuò)增，將微量基因快速檢測(cè)出來。PCR技術(shù)下靶序列兩頭引物-寡核苷酸會(huì)對(duì)特異性產(chǎn)生影響。PCR技術(shù)迅速發(fā)展，延伸出不同種類的技術(shù)，如常見的PCR多重技術(shù)、PCR熒光定量技術(shù)、RT-PCR技術(shù)，豬疫病方面這些技術(shù)發(fā)揮著重要作用。

2.PCR技術(shù)應(yīng)用

（1）豬圓環(huán)病毒檢測(cè)應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)人員設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物時(shí)依據(jù)基因儲(chǔ)存庫(kù)中豬圓環(huán)病毒的基因序列ORF2進(jìn)行，模板基因選擇該病毒的臨床分離基因，接著適當(dāng)篩選反應(yīng)條件，保證設(shè)計(jì)出可以檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型的PCR方法。實(shí)踐結(jié)果表明，通過這一方法對(duì)病毒進(jìn)行擴(kuò)增基因處理后，可以得到559bp長(zhǎng)的目的基因片段，同等條件對(duì)比類似檢測(cè)基因，這些結(jié)果均呈現(xiàn)陰性，說明這種檢測(cè)方法特異性顯著。

（2）豬瘟病毒的檢測(cè)應(yīng)用。豬瘟病毒具有一定的潛伏期，在此期間診斷困難大大加大。其潛伏期大概在4-10天左右，由于環(huán)境因素的變化以及豬的體質(zhì)問題，也有可能出現(xiàn)或長(zhǎng)或短的情況。通過豬瘟的臨床癥狀表現(xiàn)，可以將病情分為最急性發(fā)病、急性發(fā)病、亞急性發(fā)病以及慢性發(fā)病等幾個(gè)層次。如：急性發(fā)病的染病豬同樣也會(huì)在提問上出現(xiàn)明顯的變化，同時(shí)呈現(xiàn)出高燒不退的情況。在發(fā)病初期，豬還會(huì)表現(xiàn)出食欲減退、精神萎靡、無法站立的情況。對(duì)于病豬的眼部會(huì)出現(xiàn)結(jié)膜炎的癥狀，充血嚴(yán)重，同時(shí)伴隨有粘液性的分泌物。另外還會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的出血性腸炎表現(xiàn)為腹瀉和血便癥狀。隨著PCR技術(shù)的應(yīng)用，人們根據(jù)設(shè)計(jì)引物的不同，建立了RT-PCR技術(shù)來對(duì)豬瘟進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，其能夠?qū)ωi瘟病毒的核酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，而且這一擴(kuò)增具有明顯的特異性，同時(shí)檢測(cè)結(jié)果的可靠性也非常高，因此能夠?qū)ωi瘟進(jìn)行快速診斷和防治。

（3）呼吸與繁殖綜合征應(yīng)用。這類豬病主要發(fā)生在母豬身上，通過母乳喂養(yǎng)等傳遞給仔豬。這種病癥直接影響到母豬繁殖，還會(huì)降低到仔豬存活率，通過快速診斷技術(shù)檢測(cè)這一病癥。實(shí)驗(yàn)人員利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)相關(guān)病癥，通過研究與實(shí)驗(yàn)構(gòu)建完善的檢測(cè)方法PCR。這種檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用時(shí)要注意相關(guān)內(nèi)容：如果是從陳舊樣品中提取RNA的話，容易出現(xiàn)降解反應(yīng)情況。電泳實(shí)驗(yàn)過程中新鮮樣品中存在的明顯RNA有三條，且三條RNA外形相對(duì)完整。提取完成RNA后，利用反轉(zhuǎn)錄經(jīng)過7d，降解反應(yīng)就會(huì)出現(xiàn)。

（4）混合病毒的檢測(cè)。在對(duì)豬病進(jìn)行檢測(cè)和防治的過程中，經(jīng)常會(huì)遇到兩種或者兩種以上病毒混合感染的情況，而且長(zhǎng)期以來大量的獸醫(yī)都只是利用以往的經(jīng)驗(yàn)來進(jìn)行診斷和治療，因此極易錯(cuò)過最佳的治療時(shí)機(jī)。而應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行豬病的診斷和防治就變得非常有價(jià)值。

三、豬病診斷和防治中PCR技術(shù)應(yīng)用質(zhì)量控制措施

1.做好宣傳工作。豬疾病防治工作直接關(guān)系到民眾生命安全與公共衛(wèi)生安全，要求各級(jí)領(lǐng)導(dǎo)部門提高對(duì)其重視度，提高領(lǐng)導(dǎo)并構(gòu)建完善的監(jiān)督檢查機(jī)制，做好防疫工作規(guī)劃，提高方案的合理性，依據(jù)各地具體情況配合畜牧獸醫(yī)部門開展工作。同時(shí)，政府要提高對(duì)防疫工作的重視度，適當(dāng)增加資金額度與支持力度。通過媒體宣傳等方式宣傳豬檢疫工作，提高檢疫人員對(duì)防疫工作的重視度，宣傳理念的同時(shí)樹立豬檢疫工作的權(quán)威性，提高法律意識(shí)。

2.提升獸醫(yī)專業(yè)素養(yǎng)。對(duì)于豬疾病的診斷和治療應(yīng)該在原有的基礎(chǔ)上，重視診斷實(shí)驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用。對(duì)于有條件的獸醫(yī)基站或者豬場(chǎng)需要建立科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室，對(duì)豬的疾病進(jìn)行迅速的檢測(cè)，從而提高診斷的準(zhǔn)確性，為后續(xù)的對(duì)癥治療打下基礎(chǔ)。在飼養(yǎng)過程中，應(yīng)該進(jìn)行科學(xué)管理，必要時(shí)對(duì)于有條件的農(nóng)場(chǎng)應(yīng)該聘請(qǐng)技術(shù)指導(dǎo)顧問。同時(shí)科學(xué)選擇消毒藥劑，并結(jié)合當(dāng)?shù)氐牧餍胁“Y進(jìn)行免疫處理，在用藥上需要結(jié)合自身的情況，不能盲目用藥。在使用獸藥時(shí)，應(yīng)該充分結(jié)合藥物的特征、作用機(jī)理、適應(yīng)病癥與豬的發(fā)病情況進(jìn)行對(duì)比，準(zhǔn)確用藥。同時(shí)在開藥過程中需要標(biāo)明藥物的用途、劑量、方法以及療程，并控制好用藥的時(shí)間和次數(shù)，通過足夠的療程處理，保證治療效果。

3.提高專業(yè)養(yǎng)殖水平。散養(yǎng)人員應(yīng)該加強(qiáng)學(xué)習(xí)，不斷提升養(yǎng)殖水平。定期參加相關(guān)的學(xué)習(xí)培訓(xùn)工作，而且積極學(xué)習(xí)養(yǎng)殖專業(yè)知識(shí)，并重視對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境的改善。做好豬群的防疫工作，并嚴(yán)格落實(shí)，從源頭上提高防治效果。對(duì)免疫間隔時(shí)間和防治治療應(yīng)該科學(xué)掌握，及時(shí)安排科學(xué)合理的免疫流程，不斷提升養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖豬群的抗風(fēng)險(xiǎn)能力。因此，在選擇散養(yǎng)場(chǎng)地的過程中，應(yīng)該盡量選擇通風(fēng)、干燥、排水良好的位置，同時(shí)對(duì)于場(chǎng)地應(yīng)該進(jìn)行徹底的打掃處理，并對(duì)容易傷害豬群的物品及時(shí)進(jìn)行處理，從而有效排除污物，有效控制傳染源。對(duì)于豬群中出現(xiàn)的疾病，需要根據(jù)疾病的類型和程度選擇用藥，同時(shí)還應(yīng)該對(duì)整個(gè)治療過程充滿耐心，用藥過程中需要及時(shí)關(guān)注豬群的變化情況，及時(shí)對(duì)用藥情況進(jìn)行調(diào)整，確保治療效果。如果在治療過程中出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，應(yīng)該繼續(xù)觀察，不能因?yàn)閭€(gè)別豬的死亡迅速否決用藥的準(zhǔn)確性。

四、結(jié)語

總之，豬病診斷與防治過程中合理利用PCR技術(shù)，可以提高豬病診斷質(zhì)量與效率。希望通過本文論述，為類似研究提供借鑒，推動(dòng)我國(guó)豬病診斷水平提升，提高豬場(chǎng)養(yǎng)殖質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

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[2]豬病診斷和防治過程中PCR技術(shù)的應(yīng)用，楊顯榮 當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)2016-11-05.