胃癌組織中Podoplanin、血管內(nèi)皮生長因子-C表達水平及臨床意義

唐 歡，奚維東，夏 敏，文 靜，王紹榮

(1.四川省彭州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 彭州 611930；2.成都市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 成都 610036)

胃癌為臨床常見惡性腫瘤，發(fā)病早期癥狀不明顯，多與胃炎、胃潰瘍等慢性疾病類似，易被臨床診斷忽略，早期檢出率較低[1]。現(xiàn)階段，多數(shù)胃癌確診患者處于中晚期，淋巴結轉移率較高，即使是早期患者淋巴結轉移率也在10%～15%，而淋巴結轉移不僅決定患者手術范圍，同時對預后也有一定影響[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤淋巴結轉移可能與淋巴管生成密切相關，而血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作為促血管生成因子，家族包含多種異構體，而VEGF-C作為該家族重要成員之一，主要通過與酪氨酸激酶受體調(diào)節(jié)血管生成；Podoplanin作為Ⅰ型跨膜蛋白在人體多種組織細胞中均有表達，但主要表達在淋巴管內(nèi)皮，故對淋巴管內(nèi)皮細胞特異性較強[3，4]。本文對胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平及臨床意義進行研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2015年5月至2018年5月四川省彭州市人民醫(yī)院及成都市第三人民醫(yī)院收治的127例胃癌患者。納入標準：①符合《NCCN胃癌臨床實踐指南》[5]中診斷及分期標準，且在我院實施胃癌手術治療；②術前均實施放療、化療等治療方案；③標本根據(jù)染色結果，均選擇具有典型癌組織代表性蠟塊進行免疫組化研究；④臨床病理及病例資料均完整；⑤經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準該項研究。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并嚴重基礎性疾病、感染等；③妊娠期或哺乳期婦女；④無對應手術指征、存在手術禁忌證。取患者手術切除胃癌組織(127例)及距腫瘤5～10 mm處癌旁組織(50例)石蠟標本進行研究。

1.2 方法采用免疫組化法檢測全部標本中Podoplanin、VEGF-C水平，操作如下：組織切片常規(guī)脫蠟至水，其中Podoplanin于乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復液(pH 9.5)、VEGF-C于枸櫞酸組織抗原修復液(pH 6.5)中使用高陽加熱進行抗原修復(3 min)。修復結束后采用免疫組化三步法進行染色(所有染色操作嚴格參照試劑盒說明進行)→免疫組化顯色→蘇木精復染→中性樹脂封片→光鏡下觀察。本研究均用PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照則為已知陽性胃癌組織切片。所有試劑盒均購于北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3 觀察指標觀察Podoplanin、VEGF-C在胃癌及癌旁組織中表達情況及與病理參數(shù)(年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、分化程度、漿膜浸潤、淋巴結轉移)關系。Podoplanin采用微淋巴管密度(LVD)表示，LVD計數(shù)方式參照Weidner法[6]：1個淋巴管為棕黃色染色的單個內(nèi)皮細胞或細胞簇，先在低倍鏡(40倍鏡)下觀察，再選擇高密度區(qū)在高倍鏡(200倍鏡)隨機選擇5個視野內(nèi)淋巴管進行計數(shù)，記錄平均值。VEGF-C表達陽性率并由3名高年資主治醫(yī)師雙盲閱片，并協(xié)商一致后進行記錄。具體方法[5]：采集切片圖像，并在顯微鏡下觀察陽性區(qū)域(10倍鏡)及陽性細胞計數(shù)(40倍鏡)。陽性區(qū)域標準[6]：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性計數(shù)比例標準：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，50%以上為3分；總評分：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中陽性(++)，6分為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料比較采用t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平比較胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平均高于癌旁正常組織(P< 0.05)，見表1。

表1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平比較

2.2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平與臨床病理參數(shù)關系不同年齡、性別、腫瘤大小的胃癌患者癌組織中Podoplanin表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)，臨床分期高、分化程度低、存在漿膜浸潤及淋巴結轉移的患者Podoplanin表達水平較高(P< 0.05)。不同年齡、性別、腫瘤大小、分化程度的胃癌患者癌組織中VEGF-C表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)，臨床分期高、存在漿膜浸潤及淋巴結轉移患者VEGF-C表達陽性率較高(P< 0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平與臨床病理參數(shù)關系

3 討論

胃癌是一類起源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，高發(fā)于50歲以上男性，且與患者飲食結構、工作壓力及幽門螺桿菌感染相關，隨著近年社會生活方式不斷轉變，使得胃癌呈年輕化趨勢[7]。目前，胃癌治療主要以手術治療為主，但術后仍存在較高復發(fā)和轉移率，而淋巴結轉移是胃癌手術治療失敗的主要原因之一，且影響胃癌患者預后。

Podoplanin蛋白作為淋巴管內(nèi)皮標志物的跨膜唾液酸蛋白，主要表達部位為淋巴管內(nèi)皮細胞，而在血管內(nèi)皮上不表達，且在多種惡性腫瘤及瘤旁組織中均有表達，現(xiàn)已成為新型免疫組織化學標志物，與惡性腫瘤侵襲、遷移及轉移密切相關[8]。腫瘤細胞自身可分泌促進淋巴管生成的Podoplanin蛋白，對腫瘤性淋巴管生成具有一定促進作用，同時癌細胞可通過增多的淋巴管向外散播和轉移，進而促進腫瘤細胞沿淋巴結轉移。本文研究結果顯示，胃癌癌組織中Podoplanin表達水平明顯高于癌旁正常組織，其高表達可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤及淋巴結轉移有關，這與郭海等[9]研究類似，提示癌組織中淋巴管密度明顯高于正常組織，臨床可通過抑制或阻斷Podoplanin蛋白表達，降低新生淋巴管形成，進而抑制腫瘤細胞增殖、浸潤等。

VEGF是一種強大的內(nèi)皮調(diào)控因子，主要誘導內(nèi)皮細胞增殖，同時可促進腫瘤內(nèi)外管脈生成，其在胃癌組織血管內(nèi)皮細胞及淋巴管內(nèi)皮細胞分裂和增殖過程中起著較為關鍵的作用。VEGF-C作為其中之一，是促進腫瘤淋巴管生成的重要因子之一，其可誘導淋巴內(nèi)皮細胞增殖、遷移，并形成淋巴竇，同時與腫瘤轉移和侵襲密切相關。VEGF-C誘導腫瘤轉移及侵襲機制包括：誘導淋巴管生成促進腫瘤轉移；激活淋上皮細胞釋放腫瘤趨化因子，進而促進腫瘤浸潤生長及淋巴轉移；通過調(diào)節(jié)淋巴管收縮增加淋巴滲透范圍[10]。腫瘤組織中癌細胞可通過自分泌或旁分泌產(chǎn)生VEGF-C，使其作用與腫瘤周圍組織，進而刺激并誘導新生淋巴管的形成及擴張，對惡性腫瘤淋巴轉移有一定促進作用[11]。本研究結果顯示，胃癌癌組織中VEGF-C陽性率明顯高于癌旁正常組織，且VEGF-C陽性表達與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤及淋巴結轉移有關，這與修麗娟等[12]研究結果類似。

綜上所述，胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C均呈高表達狀態(tài)，兩者高表達均增加胃癌淋巴結轉移風險，其中Podoplanin高表達可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤情況有關，而VEGF-C高表達可能與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤有關。