麥粒灸對(duì)雙轉(zhuǎn)基因AD 小鼠GFAP 與Aβ1-42斑塊共定位的影響

樊振宇,包燁華,張永生,楚佳梅

(1.浙江醫(yī)院,杭州 310016;2.杭州市中醫(yī)院,杭州 310007;3.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD),是一種以認(rèn)知記憶障礙為特征的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。其主要病理特征為細(xì)胞外β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein, Aβ)沉積形成的老年斑(senile plaque, SP)、Tau 蛋白異常聚集形成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)、突觸減少和神經(jīng)元丟失以及腦萎縮[1]。老年斑主要是由 Aβ沉積形成,細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)主要是微管相關(guān)蛋白 tau 的過(guò)度磷酸化導(dǎo)致[2]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為Aβ沉積形成的老年斑是AD 病理發(fā)展的核心機(jī)制[3]。可溶性 Aβ過(guò)度表達(dá),其生成和清除失衡,從而加劇神經(jīng)原纖維的纏結(jié)、炎性反應(yīng)和細(xì)胞死亡,是導(dǎo)致AD 的直接因素[4]。星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞的重要組成部分,通過(guò)與腦內(nèi)其他細(xì)胞接觸和連接,具有營(yíng)養(yǎng)和支持神經(jīng)元、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放、離子緩沖、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝、血流控制等功能[5-6]。Aβ沉積亦會(huì)激活星形膠質(zhì)細(xì)胞,在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中,星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目最多,散布最廣,擔(dān)負(fù)著神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的大部分功能,激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)既有保護(hù)作用又有毒性作用。且激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞可以釋放多種炎癥因子來(lái)調(diào)節(jié)AD 的病情發(fā)展。許多報(bào)道稱(chēng)在AD 腦組織的 Aβ沉積周?chē)械男切文z質(zhì)細(xì)胞數(shù)量極多,神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)是星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的中間絲蛋白,是其特異性標(biāo)記物。保護(hù)星形膠質(zhì)細(xì)胞的正常功能,使其發(fā)揮對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用,將成為AD 治療的新方向。

迄今為止,治療AD 并沒(méi)有特效藥物和良好的治療方法。因此,應(yīng)該在還未發(fā)病或發(fā)病早期對(duì)AD 進(jìn)行干預(yù),阻止或延緩 Aβ異常沉積產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用所激發(fā)的一系列AD 病理過(guò)程。隨著科學(xué)的發(fā)展,醫(yī)學(xué)發(fā)展也開(kāi)始著重于以疾病預(yù)防為主,符合中醫(yī)學(xué)“治未病”思想。艾灸作為我國(guó)傳統(tǒng)治療方法,近年來(lái)在防治阿爾茨海默病方面體現(xiàn)出了較好的療效,實(shí)驗(yàn)研究表明,艾灸不僅具有遠(yuǎn)紅外線輻射的功能,而且具有近紅外線輻射的功能,一般遠(yuǎn)紅外線能直接作用于人體較為淺表的部位,而近紅外線能滲入人體較為深層的組織,且能通過(guò)毛細(xì)血管網(wǎng)將熱能傳遞到更廣泛更深層的部位,從而進(jìn)一步調(diào)整人體的免疫功能。麥粒灸屬于艾灸療法中的一種,具有患者易于接受、熱力深透、操作方便、療效顯著的特點(diǎn)。用麥粒灸療法時(shí),艾炷與小鼠皮膚接觸更為緊密,艾灸刺激的強(qiáng)度、滲透度比其他艾灸療法更為顯著,麥粒灸作為本研究的特色治療方法,其治療效果更出色。目前大多數(shù)的針灸臨床研究偏向于對(duì)AD的后期治療,在后期治療效果不理想的情況下,早期對(duì)該病的防治顯得極為重要。本實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)在于通過(guò)觀察AD 小鼠腦內(nèi)Aβ沉積與GFAP 的病理學(xué)改變來(lái)研究麥粒灸治療AD 的作用及機(jī)制,從而為臨床麥粒灸法治療AD 提供理論依據(jù),為進(jìn)一步研究AD 發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 模型制備

由中科院上海生命科學(xué)院生化所景乃禾研究員惠贈(zèng)飼養(yǎng)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心。B6SJL-Tg(APPSwFlLon,PSEN1*M146L*L286V)6799Vas/J 品系雙轉(zhuǎn)基因AD 小鼠雜合體種鼠4 只,配種鼠由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心/上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供[SCXK(滬)2007-0005],已經(jīng)由所在SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心繁殖并形成建立了規(guī)范的飼養(yǎng)條件,由 SPF 級(jí)轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心提供飼養(yǎng)條件,繁衍所產(chǎn)生后代。出生的子鼠在 3～4周后剪尾鑒定。本研究中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵循保護(hù)原則、動(dòng)物福利原則、倫理原則和綜合性科學(xué)評(píng)估原則。

1.2 主要試劑與儀器

瓊脂糖凝膠和溴乙錠(上海生工生物工程有限公司提供)、10%水合氯醛(02030,上?；瘜W(xué)試劑有限公司)、PBS 磷酸鹽緩沖液(ZLI-9062,北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、驢血清封閉液(sigma 分裝)抗熒光淬滅封閉液(P0128,碧云天生物技術(shù)研究所)、Anti-beta Amyloid 1-42 antibody(Ab10148,abcam 公司)、Anti-GFAP antibody(Ab53554,abcam 公司)、AF488 Donkey Anti-Rabbit IgG(H＋L)(DW-DAR4881, abcam公司)、Cy3 Conjugated Donkey Anti-Goat IgG (H＋L)(DW-A0502, abcam 公司)、PTC-200 PCR 擴(kuò)增儀(Biorad 公司)、EPS 601 水平電泳儀(GE 公司)、臺(tái)式冷凍離心機(jī)(Thermo 公司)、倒置熒光顯微鏡 IX71(Olympus 公司)、冰凍切片機(jī)(Thermo Fisher 公司)。

1.3 PCR 法鑒定APP/PS1 轉(zhuǎn)基因小鼠基因表型

1.3.1 提取基因組DNA

所生子代小鼠 3～4 周齡時(shí),剪取小鼠鼠尾約0.5 cm 放入1.5 mL 離心管內(nèi),每管中加入0.5 mL 裂解液,以 12000 r/min、56℃轉(zhuǎn)動(dòng) 2 h 以上或過(guò)夜,離心 20 min,取上清,加入等體積異丙醇混勻,放置30 min,12000 r/min 離心 10 min,沉淀 DNA。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 片段,制備2%瓊脂糖凝膠加溴化乙錠 5 μL,加入擴(kuò)增后 DNA10 μL,120 V、30 min 電泳,觀察PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度。

1.3.2 引物設(shè)計(jì)

以Primer5.0 軟件設(shè)計(jì)小鼠Tg(APP)、Tg(PS1)序列引物,如表1。

表1 小鼠Tg(APP)、Tg(PS1)序列引物

1.3.3 PCR 擴(kuò)增

按照Takara 公司產(chǎn)品說(shuō)明書(shū),根據(jù)定量體系摸索的實(shí)驗(yàn)研究條件,確定最佳反應(yīng)體系,以目的DNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng),采用相同的數(shù)據(jù)記錄標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。具體方法如下。

1.3.3.1 配制PCR 反應(yīng)液

按照下列組分配制 PCR 反應(yīng)液(反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行)。

表2 PCR 反應(yīng)液配制

1.3.3.2 反應(yīng)程序

以 Tg(APP)Tg(PS1)DNA 為模板,進(jìn)行 PCR 反應(yīng),反應(yīng)條件如下：

1.3.3.3 瓊脂糖凝膠電泳

制備 2%瓊脂糖凝膠加 EB 5 μL,加入擴(kuò)增后DNA10 μL,120 V、30 min 電泳,觀察 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度。

1.4 動(dòng)物分組

PCR 檢測(cè)結(jié)束后APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因鑒定結(jié)果為陽(yáng)性的小鼠40 只(1.5 月齡)按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組20 只和治療組20 只。同齡同背景的C57BL6J 陰性純合子野生型小鼠20 只(1.5 月齡)為正常組。飼養(yǎng)期間給予動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼養(yǎng)及自由飲水。溫度 22±1℃,相對(duì)濕度 50%～70%,換風(fēng)次數(shù) 15～20 次/h,光照150～200 Lx,12 h 明暗交替,噪音＜50 dB,設(shè)有溫度、濕度、光照、壓力梯度等自動(dòng)控制和顯示系統(tǒng),飲用水及飼料均高溫蒸汽滅菌,喂養(yǎng)期間可自由飲水和進(jìn)食。

1.5 干預(yù)方法

小鼠穴位定位參照中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸分會(huì)制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》及比較解剖學(xué)方法,取心俞(第5 胸椎下兩旁肋間)、腎俞(第2 腰椎下兩旁)穴。治療前,3 組小鼠均剃除穴位區(qū)域毛發(fā)。采取人工固定小鼠,治療組 AD 小鼠穴位區(qū)涂少量凡士林(可粘住艾炷即可),以麥粒大小艾炷(5 mm×8 mm)艾灸雙側(cè)心俞、腎俞,當(dāng)艾炷燃燒至 3/5(以小鼠的耐受度為限),即去除,每次灸1 壯,若有皮膚燙傷,涂濕潤(rùn)燒傷膏少許。正常組和模型組給予抓取、固定及放置未燃燒的艾炷等刺激,小鼠治療時(shí)間均為每日1 次,連續(xù)治療 10 d,中間休息2 d,再繼續(xù)下一次治療,總共治療5.5 個(gè)月(全部治療結(jié)束后小鼠為7 月齡)。

1.6 樣本取材處理

1.6.1 灌注固定

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠麻醉、取腦。用10%水合氯醛(一般 0.1 mL/10 g)腹腔注射麻醉小鼠成功后,將其仰臥伸展四肢固定于平臺(tái)上,開(kāi)胸暴露并游離出心臟和肝臟。將輸液器針頭從心尖部位穿入左心室,并用止血鉗固定于左心室,然后將右心耳剪口以使血液和灌注液流出?？焖俟嘧?.9%生理鹽水50 mL 左右至肝臟完全變白,右心室流出澄清液體后,改灌 4%多聚甲醛固定液,先快速再緩慢灌注60 mL 左右,若觀察到小鼠尾巴翹起或四肢抽搐,表明多聚甲醛進(jìn)入體循環(huán),即完成固定。灌注固定后斷頭,完整取出小鼠腦,投入4%多聚甲醛溶液中固定。

1.6.2 脫水

將固定好的標(biāo)本投入 10%蔗糖進(jìn)行脫水處理。待標(biāo)本于10%蔗糖溶液中下沉至容器底部后,換至30%蔗糖溶液,4℃過(guò)夜。

1.6.3 包埋與冷凍

脫水后的標(biāo)本用OCT 膠充分包埋,編寫(xiě)樣本序號(hào),液氮速凍,放置-80℃冰箱貯藏。

1.6.4 冰凍切片

每只小鼠腦組織在恒冷箱冰凍切片機(jī)切片,于視交叉前、后連續(xù)冠狀切片,片厚約20 μm。剩余暫未實(shí)驗(yàn)切片繼續(xù)放置于-80℃冰箱貯藏。

1.7 指標(biāo)檢測(cè)

采用免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)皮層及海馬 Aβ1-42與GFAP 的共表達(dá)。①腦組織進(jìn)行冰凍切片,片厚約20 μm,貼片法,37℃,1 h。②PBS 洗4 次,一次10 min,取出玻片,用紙小心擦去多余水分,但不能使組織干燥。用組化油筆將待染組織圈好。③滴加封閉液 37℃孵育30 min。④同時(shí)加入一抗兔來(lái)源(Aβ1-421：1000)、山羊來(lái)源(GFAP1：1000),置于濕盒,37℃孵育2 h 后轉(zhuǎn)入4℃過(guò)夜。⑤次日拿出濕盒,37℃復(fù)溫1 h,棄一抗,PBS洗4 次,一次10 min。⑥滴加二抗Cy3 紅色熒光標(biāo)記的驢抗兔(1：150)、AF488 綠色熒光標(biāo)記的驢抗山羊(1：500),37℃避光 2 h。⑦棄二抗,PBS 洗 4 次,一次10 min,避光。⑧晾干后,滴加抗熒光猝滅封片液,用處理干凈的蓋玻片封片。⑨激光共聚焦顯微鏡下觀察、拍片,在免疫熒光染色切片的海馬區(qū)和額葉皮層各取6 個(gè)視野(20×),應(yīng)用圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)視野內(nèi)Aβ1-42與GFAP 共表達(dá)指標(biāo)的陽(yáng)性細(xì)胞率。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間兩兩比較,方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn),方差不齊采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 APP/PS1 轉(zhuǎn)基因小鼠基因型的鑒定結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)所用的 APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠表型穩(wěn)定,PCR 法鑒定小鼠基因型。詳見(jiàn)圖1。

圖1 PCR 法鑒定APP/PS1 轉(zhuǎn)基因小鼠的凝膠電泳分析

2.2 艾灸治療對(duì)早期AD 小鼠腦內(nèi)Aβ1-42及GFAP 共表達(dá)的影響

熒光顯微鏡下,小鼠大腦GFAP 免疫陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布,GFAP 免疫陽(yáng)性細(xì)胞胞體膨脹、肥大,突起較多,呈樹(shù)枝狀,且突起增厚、濃染,數(shù)個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞可聚集成團(tuán),為活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。淀粉樣斑塊沉淀呈紅色熒光。GFAP 與 Aβ1-42淀粉樣蛋白免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示,小鼠大腦皮層和海馬內(nèi)活化的綠色星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP 成簇狀圍繞在紅色Aβ斑塊周?chē)?胞體膨脹、肥大;突起較多,呈樹(shù)枝狀,有的突起伸入到紅色斑塊內(nèi)。

實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn),模型組小鼠腦內(nèi) GFAP、Aβ1-42的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率較對(duì)應(yīng)的正常組明顯增多,但是經(jīng)過(guò)麥粒灸治療后的AD 小鼠腦內(nèi)GFAP、Aβ1-42的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率比模型組顯著減少,提示了早期麥粒灸療法治療AD 有顯著治療效果,可以抑制AD 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),抑制Aβ異常聚集。詳見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠腦內(nèi)Aβ1-42及GFAP 共表達(dá)的比較 (±s,%)

表3 各組小鼠腦內(nèi)Aβ1-42及GFAP 共表達(dá)的比較 (±s,%)

注：與正常組比較1)P＜0.01;與模型組比較2)P＜0.01

組別 例數(shù) 額葉皮層陽(yáng)性細(xì)胞率 海馬區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞率Aβ1-42 GFAP 共表達(dá) Aβ1-42 GFAP 共表達(dá)正常組 6 27.46±7.93 28.19±8.28 28.36±7.38 26.35±5.59 27.48±5.63 27.89±5.94模型組 6 54.27±3.261) 54.86±3.051) 55.83±3.051) 58.73±2.311) 59.61±2.301) 61.01±2.411)治療組 6 30.74±3.882) 31.45±3.752) 32.51±4.382) 28.70±4.172) 29.54±4.832) 31.01±4.592)

圖2 額葉皮層區(qū)Aβ1-42及GFAP 共表達(dá)(×20)

3 討論

β-淀粉樣蛋白(Aβ)具有很強(qiáng)的自聚性,極易形成極難消融的沉淀并逐漸沉積于腦中[7]。Aβ沉積亦會(huì)激活星形膠質(zhì)細(xì)胞,在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中,星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目最多,散布最廣,擔(dān)負(fù)著神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的大部分功能,星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能發(fā)生變化將影響其對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用。許多研究稱(chēng)在AD 腦組織中的淀粉樣斑塊周?chē)械男切文z質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量極其多,且伴有不同程度的形態(tài)改變,如星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體肥大、變性及萎縮等[8],激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有雙重作用,既有保護(hù)作用又有毒性作用[9]。許多研究表明神經(jīng)炎癥在AD 病變發(fā)展過(guò)程中起著很重要的作用,激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞可以釋放多種炎癥因子來(lái)調(diào)節(jié)AD 的病情發(fā)展[10-11]。

Aβ主要是由其前體蛋白(amyloid precursorprotein, APP)經(jīng)過(guò)β-分泌酶、γ-分泌酶裂解形成,根據(jù)肽段的長(zhǎng)度不同,在體內(nèi)以多種形式存在,Aβ是細(xì)胞的固有成分,在正常人腦脊髓液中可溶性Aβ和AD 中出現(xiàn)的濃度相同,這說(shuō)明 Aβ是一種自然而非病理性的產(chǎn)物[12]。Aβ是腦內(nèi)主要的興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì),包括 Aβ1-40、Aβ1-42、Aβ1-43三種,而在腦內(nèi)發(fā)揮神經(jīng)毒性作用的主要是 Aβ1-40和 Aβ1-42兩種[13-14]。除了介導(dǎo)正常的突觸傳遞外,還參與突觸的可塑性[15]、學(xué)習(xí)和記憶[16]、神經(jīng)發(fā)育[17]以及神經(jīng)毒性[18]等諸多生理病理功能。其中 Aβ1-40是主要成分,Aβ1-42聚集性最強(qiáng),有更強(qiáng)的神經(jīng)細(xì)胞毒性。Aβ1-42已被證實(shí)具有較高的聚集傾向,同時(shí)被認(rèn)為是老年斑中最主要的淀粉樣物質(zhì)[19],過(guò)渡態(tài)的Aβ1-42寡聚物或纖維會(huì)導(dǎo)致線粒體功能阻滯,神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,神經(jīng)回路障礙,尤其與突觸和神經(jīng)元的損失相關(guān),最后引起癡呆癥[20]。Aβ1-42聚集是引起Aβ1-42毒性蛋白的主要原因,Aβ1-42毒性蛋白是引起AD 發(fā)病的主要原因,所以,抑制Aβ1-42的聚集可以有效防止AD 的發(fā)生[21]。

膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)是星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的中間絲蛋白,是公認(rèn)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白,GFAP表達(dá)上調(diào)的程度代表星形膠質(zhì)細(xì)胞增生活躍程度,在腦損傷的炎癥中會(huì)出現(xiàn)以GFAP 為特征的纖維化。通過(guò)研究 GFAP 的表達(dá)強(qiáng)或弱可反映在正常及病理?xiàng)l件下星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能狀態(tài)[22]。星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)形態(tài)和功能的改變由靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)化為激活、增生狀態(tài)時(shí),可以造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的損傷,這一激活的過(guò)程以 GFAP 表達(dá)水平的增多為主要表現(xiàn)[23]。國(guó)外學(xué)者Landfield PW 等[24]發(fā)現(xiàn)老年記憶損害的大鼠海馬內(nèi)的星形細(xì)胞肥大,并認(rèn)為GFAP 與老年學(xué)習(xí)記憶能力減退之間有一定的關(guān)聯(lián)性。

AD 患者腦內(nèi)伴有明顯膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng),斑塊周?chē)霈F(xiàn)大量星形膠質(zhì)細(xì)胞,激活星形膠質(zhì)細(xì)胞在老年斑的形成中起到重要作用。激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞具有吞噬功能,可吞噬并降解 Aβ,有研究發(fā)現(xiàn) Aβ可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放細(xì)胞因子,如 IL-1β、IL-6、IFN-γ、IL-13、IL-17、IP-10 等,這些物質(zhì)對(duì)神經(jīng)元有毒性作用,而星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活又能夠誘導(dǎo) Aβ神經(jīng)毒性的產(chǎn)生,使神經(jīng)元凋亡并壞死。蔡志友等[25]所做實(shí)驗(yàn)的直線相關(guān)分析表明Aβ1-42與GFAP 表達(dá)呈顯著正相關(guān)。星形膠質(zhì)細(xì)胞的增強(qiáng)激活會(huì)增加炎癥介質(zhì)的分泌,使得 Aβ1-42產(chǎn)物增加,而 Aβ1-42產(chǎn)物增多則進(jìn)一步激活星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥因子而增加 Aβ1-42產(chǎn)物的生成,從而發(fā)生級(jí)聯(lián)放大作用。所以筆者認(rèn)為Aβ1-42與GFAP 的表達(dá)有一定的關(guān)聯(lián)性。

古人云：“藥之不及,針之不到,必須灸之?！薄睹t(yī)別錄》：“艾味苦,微溫,無(wú)毒,主灸百病。”艾屬菊科多年生草本植物,其氣味芳香、易燃,艾灸可通過(guò)艾葉辛溫之性,激發(fā)人體經(jīng)絡(luò)之氣,溫陽(yáng)補(bǔ)虛,以達(dá)到補(bǔ)益人體正氣,防病保健“治未病”的目的[26]。艾灸是中醫(yī)傳統(tǒng)治療方法,具有防病保健的作用,在疾病的早期干預(yù)治療方面具有其特定的優(yōu)勢(shì)?！侗怡o心書(shū)》：“保命之法,灼艾第一?！薄额?lèi)經(jīng)圖翼》：“神闕行隔鹽灸,艾灸至三五百壯,不惟疾愈,亦且延年?！薄锻馀_(tái)秘要》：“三里養(yǎng)先后天之氣,灸三里可使元?dú)獠凰?故稱(chēng)長(zhǎng)壽之灸。”近年來(lái),艾灸在延緩衰老方面的研究取得了較大突破,大量研究表明艾灸具有延緩衰老的作用。吳巧鳳等[27]對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力減退的SD 老年大鼠進(jìn)行艾灸治療,發(fā)現(xiàn)艾灸具有促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力減退的老年大鼠海馬神經(jīng)發(fā)生的作用。陳興華等[28]觀察艾灸五臟背俞穴對(duì)模型大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響,提示艾灸治療可抑制大鼠海馬神經(jīng)元凋亡,對(duì)大鼠的腦損傷也具有一定的保護(hù)作用。喬秀蘭等[29]發(fā)現(xiàn)艾灸能夠抑制快速老化小鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞向成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。

由此可見(jiàn),艾灸療法相對(duì)其他療法來(lái)說(shuō)具有一定的優(yōu)勢(shì),是治療與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)疾病的良好治療方式。但是到目前為止關(guān)于麥粒灸療法治療 AD 的機(jī)制的研究很少,所以本研究在雙轉(zhuǎn)基因小鼠1.5 月齡時(shí),腦內(nèi)剛開(kāi)始發(fā)生Aβ聚集的AD 病理過(guò)程早期介入麥粒灸治療,通過(guò)艾灸治療后,與模型組比較,治療組小鼠額葉皮層和海馬區(qū)Aβ1-42的表達(dá)明顯減少。研究結(jié)果表明,早期麥粒灸療法對(duì)治療AD 有顯著治療效果,可以抑制AD 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),抑制 Aβ異常聚集，從而延緩AD 病理過(guò)程進(jìn)展,達(dá)到“既病防變”的目的。