川楝皮化學(xué)成分分析

曾 金，秦玲麗，岑巧連，李麗芳，馬瑞婧，譚欽剛

(1.桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541004；2.柳州市婦幼保健院，廣西 柳州 545001)

川楝(MeliatoosendanSieb.et Zucc.)為楝科(Meliaceae)楝屬(MeliaLinn.)植物，分布于我國四川、貴州、湖南、湖北等地。川楝的果實川楝子是我國的傳統(tǒng)中藥，《本草綱目》記載川楝子性味苦寒，有小毒，并有酸味，入肝、胃、小腸經(jīng)；具有疏肝、止痛、驅(qū)蟲等功效，用于治療胸脅、脘腹脹痛、疝痛、蟲積腹痛等癥。近年來對川楝子的化學(xué)成分研究報道比較多，其主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、楝烷型三萜和檸檬苦素類化合物、黃酮類、甾體類、酚酸及木脂素類化合物等[1，2]。現(xiàn)代藥理研究表明，川楝子有驅(qū)蟲、抗腫瘤、抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛及抗病毒、抗氧化等藥理作用；其中三萜類化合物川楝素是川楝子的主要有效成分和毒性成分[3，4]。川楝的干燥根皮及樹皮也是傳統(tǒng)中藥苦楝皮的一個來源，但對川楝皮化學(xué)成分的研究報道很有限，主要是關(guān)于三萜類成分的報道[5-8]。為了進一步從川楝皮中尋找有藥用價值的活性成分，本研究探討了川楝干燥樹皮乙醇提取物的乙酸乙酯萃取層，從中分離鑒定了6個化合物，分別是棕櫚酸(1)、meliastatin 3(2)、toosendanone A(3)、24-甲基-膽甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇(4)、(2S，3S，4R，10E)-2-[(2R)-2-羥基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1，3，4-三醇(5)、(+)-兒茶素(6)。其中化合物(4)為首次從該植物中分離得到，化合物(5)為首次從楝科植物中分離得到。

1 實驗材料與儀器試劑

1.1 實驗材料

干燥川楝皮于2016年9月購自廣西玉林藥材市場，由桂林醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室黃德青副教授鑒定為川楝(Meliatoosendan)的皮，樣品(MT-201609T)保存于藥學(xué)院實驗中心。

1.2 主要實驗儀器

LCMS-8030(日本島津公司)；Bruker DRX-400(400 MHz)核磁共振儀(瑞士Bruker公司，TMS為內(nèi)標(biāo))；BT224S電子分析天平(北京賽多利斯公司)；RE-5230旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；三用紫外儀(ZF-2，上海市安亭電子儀器廠)；低溫冷卻液循環(huán)泵(DLSB-5/20，鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；循環(huán)水式多用真空泵(SHB-III，鄭州長城科工貿(mào)有效公司)。

1.3 實驗試劑和材料

甲醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(沸點60～90 ℃)、氯仿(均為分析純，西隴化工股份有限公司)；乙醇(分析純，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心)；顯色劑為10%硫酸-乙醇溶液。柱色譜硅膠和GF254薄層層析硅膠板(煙臺江友硅膠開發(fā)公司)；小孔樹脂(MCI)CHP20(日本Mitsubishi公司)。

2 實驗方法

2.1 提取

取廣西玉林藥材市場采購的川楝皮10 kg，粉碎，用50L 95%乙醇冷浸3次，每次7d，合并濾液，回收溶劑，濃縮至無醇味，得總浸膏?？偨嗉舆m量水制成混懸液，用乙酸乙酯萃取，萃取3次，濃縮，得乙酸乙酯浸膏159g。

2.2 分離與純化

乙酸乙酯部分用硅膠柱層析，依次用氯仿∶丙酮(1∶0～3∶2)，氯仿∶甲醇(3∶1～1∶1)梯度洗脫得到10個組分(Fr.I-X)。Fr.III經(jīng)過正相硅膠柱，石油醚∶丙酮(10∶1～1∶1)洗脫，得到10個流分(Fr.IIIa-IIIj)，F(xiàn)r.IIIa經(jīng)過MCI柱(90%～95%甲醇-水)洗脫，得到Fr.IIIa1-Fr.IIIa7，合并Fr.IIIa1-Fr.IIIa5，用丙酮重結(jié)晶，得到化合物1(365 mg)。Fr.IIIh經(jīng)過MCI柱(80%～95%甲醇水)，正相柱(石油醚：乙酸乙酯=8∶1～5∶1)及丙酮重結(jié)晶得到化合物2(6.4 mg)。Fr.VI經(jīng)過MCI柱(70%甲醇-水)洗脫，得到10個流分(Fr.VIa-VIj)，F(xiàn)r.VIh經(jīng)過正相硅膠(氯仿∶乙酸乙酯=6∶1)，反相硅膠(60%～90%甲醇-水)及正相硅膠柱(氯仿∶丙酮=8∶1)，得到化合物3(4 mg)。Fr.IX經(jīng)過MCI柱，60%～90%甲醇-水洗脫，得到12個流分(Fr.IXa-IXl)，F(xiàn)r.IXh經(jīng)過丙酮重結(jié)晶，得到化合物4(12.1 mg)。Fr.IXi經(jīng)過丙酮重結(jié)晶，得到化合物5(80 mg)。Fr.X經(jīng)過MCI柱，60%甲醇-水開始洗脫，得到9個流分(Fr.Xa-Xi)，F(xiàn)r.Xa經(jīng)過反相柱(20%～50%甲醇-水)，正相柱(氯仿∶甲醇=10∶1～7∶1)，得到化合物6(200 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物(1)為白色無定型粉末，ESIMSm/z326 [M+2Cl-H]-，1H NMR(400 MHz，CD3OD)δH：2.29，2.27，2.25，1.61，1.59，1.57，1.29，0.91，0.90，0.88。2.27處信號峰為與羰基相連的-CH2-，1.29-1.61為長鏈-CH2-的堆積峰，0.88處為甲基峰，與-CH2-相連，分裂為三重峰；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δC：13.1，22.4，24.7，28.9，29.1，29.1，29.2，29.3，29.4，29.4，29.4，31.7，33.6，176.3。176.3為羰基碳的信號，22-34(22.4，24.7，28.9，29.1，29.1，29.2，29.3，29.4，29.4，29.4，31.7，33.6)為脂肪鏈上的碳的信號，13.1為甲基碳的信號。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，通過與對照品TLC分析，與已鑒定的化合物棕櫚酸Rf一致，故鑒定此化合物為棕櫚酸。

化合物(2)為無色針晶，ESIMSm/z539 [M+Na]+，1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH：5.95(H-23)，5.91(H-24)，5.31(H-7)，3.80(H-16)，2.47(H-22α)，2.30(H-22β)，2.02(H-15α)，1.95(H-1β)，1.93(H-12β)，1.72(H-5)，1.58(H-12α)，1.45(H-1α)，1.12(H-28)，1.06(H-19)，0.94(H-18)。13C NMR(100 MHz，pyridine-d5)δC：12.5(C-19)，18.1(C-11)，21.2(C-29)，22.9(C-18)，24.3(C-27)，24.6(C-6)，24.8(C-26)，25.1(C-28)，28.1(C-30)，33.1(C-12)，34.2(C-22)，34.8(C-2)，34.9(C-10)，38.1(C-1)，44.9(C-15)，46.3(C-13)，47.6(C-9)，47.8(C-4)，48.8(C-20)，50.0(C-14)，51.1(C-31)，52.2(C-5)，58.9(C-17)，75.7(C-16)，80.9(C-25)，118.3(C-7)，126.7(C-23)，137.9(C-24)，145.1(C-8)，175.4(C-21)，215.0(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定此化合物為meliastatin 3。

化合物(3)為無定型粉末，ESIMSm/z495 [M+Na]+，1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH：0.96(6H，m)，1.07(3H，d，J= 5.5Hz)，1.14(3H，d，J= 5Hz)，1.24(6H，m)，4.25(1H，s)，4.61(1H，s)5.33(1H，s)13C NMR(100 MHz，pyridine-d5)δC：12.5(C-19)，17.9(C-11)，21.2(C-29)，22.9(C-18)，23.6(C-22)，24.3(C-6)，24.6(C-28)，26.5(C-23)，28.5(C-30)，29.9(C-27)，32.4(C-12)，34.9(C-2)，35.0(C-10)，38.1(C-1)，45.1(C-15)，45.5(C-13)，47.6(C-4)，47.8(C-20)，49.3(C-14)，47.6(C-9)，52.9(C-5)，55.0(C-24)，61.1(C-17)，71.2(C-25)，77.1(C-16)，80.1(C-21)，118.2(C-7)，145.5(C-8)，215.1(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[11]，故鑒定此化合物為toosendanone A。

化合物(4)為無定型粉末，ESIMSm/z225 [M-C14H28O2+Na]+，1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH：5.76(1H，m，H-7)，5.27(1H，brd，J=15.6 Hz，H-23)，5.20(1H，dd，J=15.6，6.4 Hz，H-22)，4.84(1H，m，H-3α)，4.36(1H，br s，H-6α)，3.04(1H，t，J=13.0 Hz，H-4α)，2.55(1H，m，H-9)，1.71(2H，m，H-11)，1.54(3H，s，H-19)，1.27，1.71(each 1H，m，H-16α，H-16β)，1.24(1H，m，H-14)，1.04(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.99，0.98，0.96(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.88(3H，d，J=1.8 Hz，H-26)，0.86(3H，d，J=1.8 Hz，H-27)，0.68(3H，s，H-18).13C NMR(100 MHz，pyridine-d5)δC：12.3(C-8)，17.6(C-28)，18.6(C-19)，19.6(C-26)，20.0(C-27)，21.2(C-21)，22.2(C-11)，23.2(C-15)，28.3(C-16)，32.4(C-2)，33.1(C-25)，33.6(C-1)，37.8(C-10)，39.6(C-12)，40.7(C-20)，41.8(C-4)，42.8(C-24)，43.5(C-9，C-13)，55.0(C-14)，55.8(C-17)，67.3(C-3)，74.0(C-6)，75.9(C-5)，120.3(C-7)，131.8(C-23)，135.9(C-22)，141.3(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12]，故鑒定此化合物為24-甲基-膽甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇。

化合物(5)為白色無定型粉末，ESIMSm/z367 [M-C21H41O2+H]+，1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH：8.63(1H，d，J=9.2 Hz，NH)，7.68，6.78，6.31(3OH)，5.56(1H，m，H-10)，5.18(1H，m，H-2)，4.67(1H，m，H-2′)，4.56 and 4.47(each 1H，m，H-1)，4.38(1H，m，H-3)，4.31(1H，m，H-4)，2.30-2.12(3H，m)，2.05-1.94(4H，m)，1.80-1.67(3H，m)，1.45-1.31(5H，m)，1.29-1.24(53H，m)，0.86(6H，m，H-18 and H-24′)13C NMR(100 MHz，pyridine-d5)δC：15.2(C-18 and C-24′)，23.9(C-23′and C-17)，26.7(C-4′)，27.7(C-6)，31.3，31.1，31.0，30.9，30.9，30.8，30.8，30.5，30.4(C-13-C-16 and C-5′-C-22′)，33.9(C-9)，34.2(C-12)，34.7(C-5)，36.6(C-3′)，53.9(C-2)，62.9(C-1)，73.4(C-2′)，73.8(C-4)，77.7(C-3)，131.6(C-10)，131.7(C-11)，176.1(C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定此化合物為(2S，3S，4R，10E)-2-[(2R)-2-羥基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1，3，4-三醇。

化合物(6)為白色無定型粉末，ESIMSm/z291[M+H]+，1H NMR(400 MHz，CD3OD)δH：6.84(lH，d，J=2.0 Hz，H-2′)，5.93(lH，d，J=2.4 Hz，H-6)，4.58(lH，d，J=7.6 Hz，H-2)，4.01(1H，m，H-3)，2.88(1H，dd，J=5.2，16.0 Hz，H-4a)，2.48(1H，dd，J=8.8，16.0 Hz，H-4b)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δC：27.1(C-4)，67.4(C-3)，81.43(C-2)，94.1(C-6)，94.9(C-8)，99.4(C-10)，113.9(C-6′)，114.7(C-2′)，118.7(C-5′)，130.8(C-1′)，144.8(C-3′)，144.8(C-5)，155.5(C-4′)，156.2(C-9)，156.4(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定此化合物為(+)-兒茶素。

以上所鑒定的化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 化合物1～6的結(jié)構(gòu)