cyclin D1與PD-L1在不同分子亞型浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性分析△

孔令慧，王金花，郭志娟，吉茹，呼斯冷，梁俊青

內(nèi)蒙古自治區(qū)腫瘤醫(yī)院1病理科，2乳腺腫瘤科，呼和浩特 010020

乳腺癌主要分為管腔型乳腺癌（Luminal A型、Luminal B型）及非管腔型[人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）過表達(dá)型和三陰性]乳腺癌[1]。內(nèi)分泌治療是目前臨床治療雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽性乳腺癌的主要手段，但對(duì)ER陰性或表達(dá)較低的乳腺癌治療效果不佳，且內(nèi)分泌治療后患者易出現(xiàn)耐藥，治療難度增加[2-3]。細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）的異常表達(dá)可致細(xì)胞周期紊亂，增殖失調(diào)，從而使正常細(xì)胞發(fā)生癌變[4]；程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）通過與T細(xì)胞、B細(xì)胞結(jié)合，抑制T細(xì)胞的增殖，對(duì)機(jī)體免疫進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的抵抗能力降低，促進(jìn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[5]。cyclin D1及PD-L1均與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展有著緊密的聯(lián)系，但目前缺乏關(guān)于二者的相關(guān)性研究，故本研究收集78例非特殊性浸潤(rùn)性乳腺癌患者的乳腺癌組織標(biāo)本，通過檢測(cè)cyclin D1和PD-L1的表達(dá)情況，分析二者在腫瘤發(fā)展過程中的相關(guān)性，旨在為臨床尋找新的分子指標(biāo)，為個(gè)體診療提供更多方案，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年12月內(nèi)蒙古自治區(qū)腫瘤醫(yī)院收治的乳腺癌患者的病歷資料和乳腺癌組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均未行放化療等治療，且經(jīng)病理學(xué)檢查確診為浸潤(rùn)性乳腺癌；病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：特殊性浸潤(rùn)性乳腺癌。根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入原發(fā)性非特殊性浸潤(rùn)性乳腺癌患者78例，均為女性，年齡38～65歲，平均年齡（52.63±6.17）歲；分子亞型：Luminal A型23例，Luminal B型29例，HER2過表達(dá)型15例，三陰性11例。

1.2 檢測(cè)及評(píng)價(jià)方法

采用免疫組化法對(duì)浸潤(rùn)性乳腺癌患者的乳腺組織進(jìn)行分析。提取患者病理組織并制作切片，行免疫組化EnVision兩步法染色（德國(guó)Leica公司的Leica BOND MAX型免疫組化自動(dòng)染色儀），分別采用兔抗人cyclin D1單克隆抗體（ZA-0101）、鼠抗人PD-L1單克隆抗體（ZA-0170）、ER單克隆抗體（ZM-0104）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）抗體（ZM-0215）、Ki-67單克隆抗體（ZM-0165）、HER2抗體（ZM-0065）檢測(cè)cyclin D1、PD-L1、ER、PR、Ki-67、HER2在病理組織中的表達(dá)情況，所有抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；對(duì)于HER2（2+）的標(biāo)本進(jìn)行熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）檢測(cè)（試劑盒購自廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司）。根據(jù)上述指標(biāo)的表達(dá)情況，將浸潤(rùn)性乳腺癌進(jìn)行分型：Luminal A型[ER（+）/PR（+）、HER2（-）、Ki-67＜20%]；Luminal B型[ER（+）/PR（+）、HER2（-）、Ki-67≥20%；ER（+）/PR（+）、HER2（+）]；HER2 型[ER（-）、PR（-）、HER2（+）]；三陰性[ER（-）、PR（-）、HER2（-）]。cyclin D1及PD-L1陽性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn)：cyclin D1陽性細(xì)胞＞5%記作陽性，PD-L1陽性細(xì)胞＞1%記作陽性。比較不同分型浸潤(rùn)性乳腺癌中cyclin D1及PD-L1的表達(dá)情況。參考第7版美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（American Joint Committee on Cancer，AJCC）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]對(duì)所有患者進(jìn)行病理分期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同分子亞型原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中cyclin D1與PD-L1表達(dá)情況的比較

不同分子亞型原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中cyclin D1、PD-L1表達(dá)情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。三陰性乳腺癌中PD-L1陽性表達(dá)率高于Luminal A型乳腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同分子亞型原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中cyclin D1與PD-L1陽性表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌組織中cyclin D1及PD-L1表達(dá)情況的比較

TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、ER陽性原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌組織中cyclin D1陽性表達(dá)率高于TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、ER陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.405、6.303，P＜0.05）；TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、ER陰性原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達(dá)率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、ER陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.015、6.019，P＜0.05）；不同年齡、腫瘤大小、月經(jīng)狀態(tài)原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌組織中cyclin D1、PD-L1陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌組織中cyclin D1及PD-L1的陽性表達(dá)情況

2.3 cyclin D1與PD-L1在原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，在原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中，cyclin D1與PD-L1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.436，P=0.021）。

3 討論

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，以女性居多，常伴有乳腺腫塊、皮膚改變及乳頭乳暈異常等臨床表現(xiàn)[7]。當(dāng)腫瘤細(xì)胞失去了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間的連接松散，腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生脫落，游離的腫瘤細(xì)胞隨血液及淋巴液播散全身，造成轉(zhuǎn)移[8]。目前，乳腺癌分子分型結(jié)合特異性生物分子的靶向治療已成為研究熱點(diǎn)。

由于基因的異常激活或失活、過度表達(dá)或缺失，導(dǎo)致人體內(nèi)細(xì)胞增殖異常，發(fā)生惡變，使正常細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞。cyclin D1是一種細(xì)胞周期調(diào)控基因，其通過縮短細(xì)胞G1期，使細(xì)胞對(duì)分裂原的需求降低，提前進(jìn)入S期，促進(jìn)DNA的合成，推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)程，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控和癌變，在王競(jìng)偉等[9]對(duì)cyclin D1與乳腺癌相關(guān)研究分析中也有提到，cyclin D1表達(dá)水平越高，腫瘤細(xì)胞增殖越快。本研究中，cyclin D1在各型乳腺癌患者中的陽性表達(dá)情況無差異，cyclin D1陽性表達(dá)與TNM分期及ER狀態(tài)有關(guān)。已有研究證實(shí)，cyclin D1與ER呈正相關(guān)，ER能夠誘導(dǎo)cyclin D1的過表達(dá)，cyclin D1也能夠通過與激素結(jié)合區(qū)結(jié)合激活ER，刺激ER的陽性表達(dá)[10]。Luminal A型乳腺癌以ER陽性表達(dá)為主要特征，Luminal B型乳腺癌雖然ER也呈陽性表達(dá)狀態(tài)，但其表達(dá)強(qiáng)度沒有Luminal A型高，因此Luminal A型乳腺癌患者cyclin D1表達(dá)水平最高[11]。陳春兵等[12]對(duì)cyclin D1水平與不同分子分型浸潤(rùn)性乳腺癌的研究提出，cyclin D1陽性表達(dá)水平越高的患者，生存時(shí)間越長(zhǎng)。乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，臨床可對(duì)cyclin D1陽性表達(dá)水平高的患者予以針對(duì)性的內(nèi)分泌治療，通過調(diào)節(jié)患者體內(nèi)激素水平，控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)展，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。

程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）作為共刺激分子家族中的一員表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞表面，在T細(xì)胞、B細(xì)胞活化中起著重要作用，PD-L1是PD-1的配體，其能夠通過結(jié)合活化T細(xì)胞、B細(xì)胞的PD-1，抑制T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌，導(dǎo)致機(jī)體T細(xì)胞失去免疫作用，增加腫瘤細(xì)胞的惡性程度，引起腫瘤細(xì)胞的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[13]。本研究中，三陰性乳腺癌中PD-L1陽性表達(dá)率高于Luminal A型乳腺癌，PD-L1表達(dá)陽性與TNM分期及ER狀態(tài)有關(guān)。三陰性乳腺癌是一種ER、PR、HER2均為陰性的乳腺癌，同時(shí)也被稱為是一種免疫原性腫瘤[14]，目前常規(guī)的靶向內(nèi)分泌治療對(duì)其無明顯作用，PD-L1在腫瘤細(xì)胞的增殖中通過弱化細(xì)胞的免疫原性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸、增殖和轉(zhuǎn)移，故其在三陰性乳腺癌中的表達(dá)水平更高，同時(shí)PD-L1增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)正常細(xì)胞組織的侵襲性，故PD-L1表達(dá)水平高的乳腺癌惡性程度高，這也符合三陰性乳腺癌的臨床特點(diǎn)，故可將PD-L1作為治療三陰性乳腺癌的新靶點(diǎn)，這與Mittendorf等[15]研究結(jié)果一致。但在張亞和彭成浩[16]對(duì)乳腺癌中PD-1/PD-L1的表達(dá)水平及意義的研究中提出PD-L1的表達(dá)水平與ER、PR等受體表達(dá)水平無顯著關(guān)系，這與本次研究所得結(jié)論相悖，具體結(jié)果仍需進(jìn)一步討論研究。

本研究對(duì)cyclin D1和PD-L1的相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中，cyclin D1水平與PD-L1水平呈負(fù)相關(guān)。ER能夠引導(dǎo)cyclin D1的高表達(dá)，cyclin D1的高表達(dá)又同時(shí)刺激ER水平的增加，組織分化程度高，則腫瘤惡性程度相對(duì)較低，患者預(yù)后較好[17-18]。而PD-1/PD-L1通路通過對(duì)機(jī)體免疫進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，導(dǎo)致腫瘤特異性T細(xì)胞不能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生了免疫耐受，從而加快了腫瘤細(xì)胞的增殖速度，更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，腫瘤的惡性程度也更高，患者預(yù)后更差[19-20]。

綜上所述，在原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌中，cyclin D1水平與PD-L1水平呈負(fù)相關(guān)，且cyclin D1陽性表達(dá)與TNM分期低及ER陽性有關(guān)；PD-L1在三陰性乳腺癌中呈高表達(dá)，其在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)與TNM分期高及ER陰性有關(guān)。